浓缩当归丸质量标准研究

汪霞平 杨劝生

1.甘肃天水岐黄药业有限责任公司，甘肃 天水741018；2.甘肃工业职业技术学院，甘肃 天水741025

“浓缩当归丸”收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》第十七册（编号：WS3-B-3279-98），是由当归一味中药材制备而成，具有“养血活血、调经止痛”之功效，临床上用以治疗月经不调，经闭痛经，经来腹痛等病症［1］。因产品注册时制定的标准比较宽泛，仅收载了“对照药材的薄层鉴别”和“醇浸出物的含量测定”项，没有制定相应的活性药效成分控制指标。为了保证治疗疾病基础物质的稳定，降低批次间的指标差异，控制其内在质量，本文通过薄层色谱法和高效液相色谱法对浓缩当归丸的主要成分阿魏酸和藁本内酯进行检测［2-3］，建立含量测定方法，为提高浓缩当归丸的质量提供技术支撑。

1 仪器与试药

岛津LC-15C 型高效液相色谱仪、KQ-500DE 型数控超声波清洗器、HH-4 高精度数显恒温水浴锅、WFH-201BJ 紫外可见透射反射仪、CP214 型万分之一电子天平、CPA225D 型十万分之一电子天平、色谱工作站为SPD-15C、色谱柱为岛津S/N.1A7163348 等。甲醇（批号：190719；生产单位：四川西陇科学有限公司）、乙醚（批号：180601；生产单位：四川西陇科学有限公司）、盐酸（批号：160829；生产单位：四川西陇科学有限公司）、二氯甲烷（批号：181018；生产单位：四川西陇科学有限公司）、乙酸乙酯（批号：181102；生产单位：四川西陇科学有限公司）、环己烷（批号：2018071901；生产单位：成都市科隆化学品有限公司）、甲酸（批号：20150702；生产单位：山东普利斯化工有限公司）等分析纯试剂。阿魏酸对照品（批号：110773-201614）、藁本内酯对照品（批号：111737-201608）、当归对照药材（批号：120927-201617）均购自中国食品药品检验研究院。浓缩当归丸（天水岐黄药业有限公司产品，批号：170801、171001、171205、180102、180201、180602、180903、181113、190104、190307、190503、190712、191104、191206、191210）

2 TLC 鉴别

2.1 制备供试品溶液 精密称取本品5g，研细，加1%NaHCO3溶液85mL，超声处理10min，离心5min，取上清液用稀HCl 调pH 值至2～3，用乙醚（DEE）振摇提取2 次，每次30mL，合并乙醚液（EDD），挥干，残渣加甲醇1mL 使溶解，作为供试品溶液。

2.2 制备对照品溶液 取阿魏酸对照品和藁本内酯对照品，加甲醇制成每1mL 各含1mg 的溶液，作为对照品溶液。

2.3 制备阴性对照品溶液 按制剂工艺量和方法，取除当归药材的药用辅料按2.1 项下操作方法制备成缺当归药材的阴性对照品溶液。

2.4 鉴别 分别吸取上述供试品、对照品、阴性对照品溶液各10μL，点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4 ∶1 ∶1 ∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与阿魏酸对照品和藁本内酯对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照样品无斑点，见图1。

3 含量测定

3.1 对照品溶液的制备 取阿魏酸（C10H10O4）对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1mL含阿魏酸（C10H10O4）12μg 的溶液，即得。

3.2 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.3 阴性对照溶液的制备 取空白样品，按“供试品溶液的制备”项下方法，制得阴性对照溶液。

3.4 色谱条件与系统适用性试验 实验色谱柱：Phnomenx C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸溶液（17 ∶83）；检测波长：316 nm；流速：1.0 mL/min；柱温35℃；进样量：10μL。在此色谱条件下，取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10μL分别进样，结果，供试品色谱中，阿魏酸峰峰形对称，分离良好。HPLC 图谱见图2。

3.5 线性关系的考察 精密吸取上述对照品溶液1、2、5、10、15 mL，分别置于10 mL 容量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下各进样10μL 测定，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得阿魏酸回归方程为Y=34.3441 X-0.6451（r=0.9999，n=6）。结果表明，阿魏酸在0.024～0.060 μg 范围内有良好的线性关系。

3.6 精密度试验 精密量取对照品溶液10μL，注入HPLC，重复测定5 次，阿魏酸峰面积的RSD=0.13%（n=5），结果表明精密度良好。

3.7 稳定性试验 在上述色谱条件下，取室温条件放置的供试品溶液，分别于0、1、3、6、12、24 h 各进样一次，测定峰面积积分值，计算得对照品的RSD=0.15%，供试品的RSD=0.54%，结果表明对照品和供试品溶液在24h 内稳定性良好。

3.8 重复性试验 取浓缩当归丸（批号：190104，含量0.5633mg/g），平行制备6 份供试品溶液，按样品测定法测定，计算阿魏酸的含量，结果RSD=0.42%，表明该方法重复性较好。

3.9 回收率试验 采用加样回收法，精密吸取已知含量的浓缩当归丸（191210）6 份，精密称定，分别精密加入阿魏酸对照品溶液（浓度：0.56 mg/g）0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL，按“3.2”方法制备测试样品，在上述色谱条件下测定阿魏酸的含量，结果平均回收率为99.73%，RSD=0.59%（n=3），表明本法回收率良好。结果见表1。

3.10 样品含量测定 取3 批次样品，按“3.2”方法制备下所述方法分别制得供试品溶液，在上述色谱条件下，分别吸取对照品及供试品溶液各10μL 注入液相色谱仪，按外标法计算样品中阿魏酸（C10H10O4）的含量，结果见表2。

图1 TLC 图

图2 HPLC 色谱图

表1 回收率试验结果（n=6）

表2 样品含量测定结果

4 小结

阿魏酸可溶于水、醇、醋酸乙酯等溶剂，在制剂中易于被提取［4］。Gao J 等［5］对当归挥发油进行GC-MS测定，分离和鉴定了包括藁本内酯、正丁烯酰内酯、倍半萜类化合物等30 多种化合物。阿魏酸不仅是优良的抗氧化剂，也是被普遍认可的防癌物质，与藁本内酯是浓缩当归丸药理作用的主要物质基础［6］。阿魏酸和藁本内酯薄层定性鉴别分离度好，检验专属性强，可收载于该制剂的质量标准中。本研究采用了HPLC 测定了浓缩当归丸中阿魏酸的含量，方法比较简便，结果准确，可靠性良好，可用于有效控制本制剂的质量。根据15 个批次样品检测的结果，其阿魏酸的含量在0.4997～0.5914mg/g 之间，平均含量为0.5390mg/g。考虑当归药材批次间的差异性和产品制备中的损失情况［7］，故以其最低含量0.4997mg/g 为基础下浮10%确定控制限量值，即浓缩当归丸中含阿魏酸（C10H10O4），不得少于0.45mg/g。