HPVE6/E7 mRNA 检测对宫颈病变患者的筛查价值

张晓凤

茂名市人民医院，广东 茂名525000

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，好发于30～60 岁的中老年女性。阴道触碰性流血、阴道排白色或血色液体及有腥臭味道是宫颈癌常见的临床特征［1］。宫颈癌是较严重的恶性肿瘤之一，该病有一定潜伏期，大多数患者并未出现不适及其他症状，在日常的妇科检查中难以发现或确认。因此，宫颈癌的发现时间在治疗该疾病中占有关键作用。宫颈癌的主要恶化原因是人类乳头瘤病毒（human papilloma virus，HR-HPV）持续感染，致癌潜力依赖于E6/E7 癌基因的大量表达［2］。宫颈癌患者的HPV 感染原因多种多样，最重要的感染途径为性行为。口服避孕药的滥用以及吸烟等都会引起恶变，同时也是高危型HPV 感染不断扩大的最重要的原因［3］。从HPV 感染到发生癌前病变，进而发展到宫颈癌，一般需5～10 年，在这过程中可通过筛查，及早发现宫颈癌前病变，否则会错过最佳治疗时机。高危型HPV中E6/E7 基因编码的原癌蛋白是导致子宫颈上皮癌变的重要因子，对细胞生长刺激最为重要，可引起宫颈上皮细胞的癌变，促进其恶化［4］。本研究探讨HPVE6/E7mRNA 检测对宫颈病变患者的筛查价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年1 月至2018 年12 月于我院就诊的宫颈病变患者168 例，年龄22～60 岁，平均年龄（36.48±6.78）岁，常见临床症状均为接触性出血、阴道异常出血、白带异常及下腹隐痛等。

1.2 纳入排除标准 纳入标准：①至少有3 年以上性生活史；②均符合宫颈病变的入选标准［5］；③资料齐全，意识正常，能够配合治疗；④签署知情同意书。排除标准：①具有子宫或宫颈切除术史的患者；②相关资料有缺失的患者；③调查期间无故退出者。

1.3 检测方法

1.3.1 宫颈液基细胞学（TCT）检查。样本采集前3 天禁止性生活和药品使用。采集时，擦除宫颈分泌物，将毛刷探入宫颈内顺时针旋转4～6 周，充分刷取宫颈管和宫颈口鳞一柱状上皮交界处的脱落细胞并取出，将刷头浸入细胞处理试剂中，4℃保存。制备成细胞悬液，再制成细胞薄片，乙醇固定、染色，显微镜下观察分析宫颈细胞形态。TCT 结果诊断采用TBS 分级标准。见表1。

表1 TBS 分级标准

1.3.2 HPVE6/E7 mRNA 检测。按1.3.1 方法取得宫颈脱落细胞，常规配置标本缓冲液、阳性对照液及处理后的细胞悬液，将三者混合制成反应液，加入96 孔检测板中，孵育时间为3.5h。严格按高危HPVE6/E7 mRNA 试剂盒使用说明书进行操作，最后放入自动冷光仪读板检测结果，通过信号扩增法进行HPVE6/E7 mRNA 定量检测。结果诊断标准：HPVE6/E7 mRNA 表达水平＞1，则诊断为HPVE6/E7 mRNA 呈阳性；反之，则诊断为HPVE6/E7 mRNA 呈阴性。

1.4 诊断标准 对TCT 检查和HPVE6/E7 mRNA 检测阳性者，在阴道镜下取宫颈活组织病理学检查，具体标准见表2。

表2 宫颈活组织病理学检查诊断标准

1.5 观察指标 分析TCT 检测、HPVE6/E7 mRNA 检测与金标准（病理学检查）的差异性；TCT 与HPVE6/E7 mRNA 检测对宫颈病变患者诊断价值；HPVE6/E7 mRNA 检测阳性率与宫颈病变程度相关性。

1.6 统计学分析 采用SPSS22.0 软件分析数据，计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPVE6/E7mRNA、TCT 检测结果与组织病理学检测结果比较 HPVE6/E7mRNA 检测阳性率高于TCT检测（P＜0.05）。见表3。

2.2 TCT 与HPVE6/E7mRNA 检测对宫颈病变患者诊断价值分析 TCT 检测诊断的灵敏度（73.18%）、阳性预测值（75.15%）、阴性预测值（70.28%）低于HPVE6/E7mRNA 检测诊断为灵敏度（81.26%）、阳性预测值（79.84%）、阴性预测值（76.47%），TCT 检测诊断的特异性（73.52%）高于HPVE6/E7mRNA 检测诊断特异性（64.08%），但组间无显著差异（P＞0.05）。见表4。

表3 HPVE6/E7mRNA、TCT 检测结果与组织病理学检测结果比较［例（%）］

表4 TCT 与HPVE6/E7mRNA 检测的诊断价值比较（%）

2.3 HPVE6/E7mRNA 检测阳性率与宫颈病变程度相关性 HPVE6/E7mRNA 检测阳性率与宫颈病变有显著关系（r=0.581，P=0.005），即HPVE6/E7 检测阳性率越高宫颈病变越严重，其中，宫颈癌患者的HPVE6/E7mRNA 检测阳性率为百分之百。见图1。

图1 HPVE6/E7mRNA 检测阳性率与宫颈病变程度相关性

3 讨论

宫颈癌是妇科恶性肿瘤中致病源十分明确的疾病之一，HPV16 感染是宫颈癌最常见的HR-HPV 类型，HPV18 感染率居第二位［6］。宫颈癌严重影响者女性的身心健康，此病在患者体内潜伏期较长，未出现不适或其他症状的患者半数以上，只有进行宫颈癌筛查才可能被发现或确诊。因此，宫颈癌筛查至关重要。

本研究显示，HPVE6/E7 mRNA 检测与TCT 检测阳性数比较差异显著，HPVE6/E7 mRNA 检测阳性率与宫颈病变有显著关系，即HPVE6/E7 mRNA 阳性率越高宫颈病变越严重，其中，宫颈癌患者的HPVE6/E7 mRN 阳性率为百分之百，表明HPVE6/E7 mRNA 阳性率随着宫颈病变级别进展呈逐步上升趋势，其高表达可促进宫颈癌的发生、发展，是宫颈癌进展预测的指标。高危型HPVE6/E7 基因编码的原癌蛋白是导致子宫颈上皮癌变的重要因子，E6 蛋白通过E6-AP 能特异性结合p53 蛋白形成复合物，促使p53 蛋白快速降解，导致细胞周期失控，其效应等同于p53 突变［7］。E7蛋白和pRb 有高亲和性，使E2F 和pRb 复合物解离，G1 期进入S期所需基因如c-myc、DNA 聚合酶a 等得以转录，使细胞周期失控而发生永生化，发生癌变。当机体发生HPV 感染时，一般情况下机体具有自我防御功能可将HPV 清除掉，其中部分患者由于身体原因不能将HPV 清除，导致HPV 在体内处于持久性高水平状态，病毒基因与人类基因整合，导致HPVE6/E7 复制转录活跃而致癌变［8］。有文献显示，HPVE6/E7 mRNA 高表达是宫颈癌重度恶化的主要原因，与宫颈癌的分期、分化等发展过程呈正相关［9］。E6/E7 mRNA 是HPV 基因表达的直接产物，是宫颈病变开始和进展的必要条件；E6/E7 mRNA 检测是提示宫颈致癌基因的活动度，反映宫颈癌变的风险度。报道表明，HPVE6/E7 mRNA是宫颈细胞癌变的重要因素，故检测HPVE6/E7 片段的表达较检测病毒更精准、更直接［10］。研究显示，HPVE6/E7 mRNA 检测诊断的灵敏度、阳性预测值、阴性预测值均高于TCT，特异性与TCT 差异不大［11］。表明HPVE6/E7 mRNA 表达能很好地反映了宫颈病变的严重程度，作为宫颈癌筛查具有较高的诊断价值。对于宫颈癌而言，早期控制与预防最好的方法就是筛查。若在前驱病变阶段发现并采取适当的治疗，其治疗效果明显优于中、晚期。由此可见，广泛采用HPVE6/E7 mRNA 检测，及早对患者病情进行确诊并及时治疗，对该病的防治具有十分重要的意义［12］。研究显示，TCT与HPVE6/E7 mRNA 检测均具有明显效果，能够较准确地对宫颈病变患者做出分型，有利于后续的进一步诊断和治疗，但两种诊断方法的特异性、灵敏度存在一定差异，两种检测方法各有特点，后续将研究考虑两种检测方法联合对宫颈病变的患者实行进一步检测［13］。

综上所述，HPVE6/E7 mRNA 检测对宫颈病变患者的筛查具有重大意义，能够通过HPVE6/E7 mRNA阳性表达来判断宫颈病变严重程度，进而采取相应治疗措施，更好地改善预后，值得临床推广应用。