4269例羊水MLPA非整倍体检测结果分析

宋居杰 宁思思 温圆圆 秦雪

摘要：目的 探讨多重连接探针扩增技术（MLPA）联合羊水染色体核型分析在产前检测中的应用价值。方法 同时采用MLPA及染色体核型分析技术对4269例羊水进行非整倍体检测。结果 两种方法共检出102例非整倍体，包含嵌合型非整倍体19例，在MLPA的提示下染色体核型分析额外检出1例低比例嵌合体，除9例嵌合体仅在核型分析检出外，其余结果基本一致，故两种方法检测结果的符合率为99.79%。结论 MLPA非整倍体技术联合羊水染色体核型分析应用于非整倍体的产前检测，可显著缩短非整倍体的诊断周期，提高嵌合型非整倍体的检出率。

关键词：MLPA;非整倍体;核型分析;产前诊断;嵌合体

【中图分类号】R4  【文献标识码】A  【文章编号】1673-9026（2021）14--01

非整倍体是染色体数目异常的一种，即染色体数目的减少或者增加，主要包含单体综合征、三体综合征、嵌合体等[1]。临床上的染色体非整倍体最常见于13、18、21、X和Y这5条染色体，约占产前诊断中有临床意义的染色体异常的86%[2] 。染色体非整倍体异常发生于胎儿细胞可导致流产或出生缺陷[3]。染色体病目前并没有很好的治疗方法，对家庭和社会都带来巨大的负担，因而在产前诊断胎儿染色体非整倍体异常降低出生缺陷显得尤为重要。MLPA技术是由 schouten 等[4]在2002年首先报道的，该技术高效、特异，在单管里可一次性完成至少40个核苷酸序列的检测，主要针对大片段的缺失和重复突变，可用于染色体非整倍体的快速产前诊断。本研究主要探讨MLPA 非整倍体检测技术在常见染色体非整倍体中的应用价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2017年1月至2020年12月在玉林市妇幼保健院优生遗传科进行产前优生遗传咨询的4269例符合产前诊断指征的孕妇，年龄 18-47 岁，孕周17-27w。在充分知情告知并签署产前诊断知情同意书后进行羊膜腔穿刺并获取羊水样本20ml， 并分装到3支15ml无菌离心管中，每支管6～8ml，其中2支用于细胞培养进行染色体核型分析，另1支用于MLPA检测。

1.2 方法

1.2.1 染色体核型分析

羊水标本离心后弃上清，留约0.5 ml，加入4ml羊水培养基混匀后接种。选择适宜时机行本实验室常规细胞收集、低渗、固定、滴片、G显带及吉姆萨染色等处理。按人类细胞基因组学国际命名体系（ISCN）2016 版描述核型。

1.2.2 MLPA方法

按照本实验室羊水细胞DNA提取、PCR扩增、毛细管电泳和结果分析等常规步骤进行。

2 结果

在4269例样本中，4167例兩种方法均未检测出染色体非整倍体异常。在检出的102例常见染色体非整倍体异常样本中，两种方法共同检出93例常见非整倍体异常，染色体核型分析比MLPA多检出9例异嵌合型常见染色体非整倍体，总体符合率99.79%（4260/4269），102例异常结果分布情况见表1。

3 讨论

产前诊断染色体异常的传统方法是进行胎儿染色体核型分析[5]，核型分析也是诊断染色体非整倍体的金标准，但该方法检测周期长、操作繁琐、要求较高的操作技术，影响因素多，且最终的培养结果有时不一定能够达到核型分析的要求从而能导致核型判读失败[6]。因此，临床工作中迫切需要新的诊断技术来弥补染色体核型分析的缺陷[7]。MLPA是目前已报道的快速产前诊断技术之一，具有高通量、检测时间短（可在收到标本 24-48h 后出结果），特异性好，灵敏度高等优点。

本研究中，羊水细胞培养及染色体核型分析成功率100%，MLPA检测成功率100%，两种方法均能在行业标准规定期限内得到结果。MLPA可在接收标本48h内得到结果，核型分析则需要20d，两者联合检测，可以对MLPA方法提示异常的病例优先进行核型分析，最快能在2W左右得到核型分析的结果，大大提高了产前诊断的效率。

4269例样本的检测结果中，MLPA技术检出常见染色体（21、18、13、X和Y染色体）非整倍体93例，结果均与核型分析一致，4167例未见异常，核型分析也未检出常见（21、18、13、X和Y染色体）非整倍体，有9例嵌合体是核型分析发现，而MLPA未见异常，故两种方法的结果符合率达到99.79%（4260/4269），与覃宋强等[8]报道的一致。其中MLPA检出1例18号长臂的等臂异常，有了MLPA结果的验证，染色体核型分析可以直接出具准确的结果，可见该技术对相关染色体的非平衡性结构异常也具有提示作用。

MLPA非整倍体检测技术在染色体嵌合体中的应用。染色体嵌合体，即两个或两个以上不同细胞系同时存在于同一个体，在人类囊胚植入前后普遍存在，可能导致遗传异常、流产、死产[9]。在本研究中，染色体核型分析共检测出19例嵌合体，MLPA检出其中的10例（52.6%）。其中7例嵌合体两种方法的结果是一致的，3例染色体核型分析结果为性染色体嵌合体，MLPA结果提示为纯合体，结果有所差异，其中1例染色体核型分析的结果为45，X[65]/46，X，+mar[35]，MLPA结果提示为45，X，可能是因为mar染色体并未携带基因，或者携带的基因不在MLPA的检测范围，由于45，X占大多数，遗传咨询可按特纳综合征进行;1例染色体核型分析的结果为45，X[48]/46，X，del（X）（p22.1）[41]，MLPA结果提示为45，X，可能是嵌合比例失真所致;1例染色体核型分析的结果为45，X[9]/47，XYY[42]，MLPA结果提示为47，XYY，嵌合比例较低，MLPA未能提示嵌合。Koope 等[10]研究认为 MLPA 能够检测出异常核型比例高于 20% 的嵌合体，本次研究MLPA检出2例嵌合比例低于20%，其中1例嵌合比例只有5.7%，这个病例是在MLPA提示异常的情况下进行了加大计数分析，如果没有MLPA结果的提示，很可能会漏诊，给临床带来不够准确的产前诊断结果。在MLPA未能准确提示的9例嵌合体中，仅有1例染色体核型分析结果嵌合比例>20%（22.2%），可能是由于羊水细胞经过培养，出现优势生长，导致嵌合比例不真实。本次研究MLPA结果均在染色体核型结果之前得出，可以给核型分析工作提供更多的信息，提高嵌合体检出率。

综述所述，MLPA检测方法操作简单、周期短、结果准确，联合染色体核型分析应用于常见染色体非整倍体的快速产前检测，可大幅提高产前诊断效率，同时还可以提高染色体嵌合体的检出率，为临床遗传咨询提供更准确的诊断依据，对降低出生缺陷有重要意义。

参考文献：

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