一测多评法测定印度獐牙菜中8个酮类成分的含量
2021-01-05董惠敏许如玲何丹丹范君婷鞠建明
董惠敏，许如玲，何丹丹，范君婷，鞠建明*
董惠敏1, 2，许如玲2，何丹丹1, 2，范君婷3*，鞠建明1, 2*
1. 南京中医药大学附属中西医结合医院，江苏 南京 210028 2. 江苏省中医药研究院，江苏 南京 210028 3. 南京医科大学药学院，江苏 南京 211166
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters Alliance高效液相色谱系统：配有2695溶剂管理系统、2996二极管阵列检测器和Empower色谱工作站；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Milli-Q型纯水器（美国Millipore公司）；AT2011/10万电子天平（瑞士Mettler公司）。
1.2 试药
表1 样品信息
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：甲醇（A）-0.4%甲酸水溶液（B）；梯度洗脱，0～20 min，20%～40% A；20～32 min，40%～44% A；32～36 min，44%～50% A；36～44 min，50%～60% A；44～62 min，60%～70% A；62～72 min，70%～90% A；72～73 min，90%～20% A；73～83 min，20% A；体积流量1.0 mL/min，柱温35 ℃，检测波长254 nm，进样量10 µL。
2.2 溶液的制备
2.2.2 供试品溶液制备 取印度獐牙菜粉末（过60目筛）约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定质量，超声提取（功率100 W，温度25 ℃）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2.3 QAMS法学考察
2.3.1 系统适应性试验 在“2.1”项的色谱条件下，供试品中8个待测成分色谱峰峰形良好，与相邻峰的分离度大于1.5。混合对照品及供试品的色谱图见图1。
1-芒果苷 2-1,3,5,8-四羟基酮 3-swerpunilactone A 4-雏菊叶龙胆酮 5-1-羟基-3,7,8-三甲氧基酮 6-1-羟基-3,5-二甲氧基酮 7-1,8-二羟基-3,7-二甲氧基酮 8-1,8-二羟基-3,5-二甲氧基酮
表2 8种酮类成分的线性回归方程
2.4 相对校正因子（fs/i）的计算
表3 7个待测成分与芒果苷的fs/i
2.5 fs/i的重复性考察
2.5.1 不同仪器和不同色谱柱考察 实验分别考察了Waters 2695 I和Waters 2695II 2种高效液相色谱及Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）、Alltima C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）和Alltima C18TM（250 mm×4.6 mm，5 µm）3种色谱柱对s/i的影响，并计算RSD，结果均小于5%，表明s/i在不同的仪器和色谱柱适用性良好。结果见表4。
2.5.2 不同体积流量对s/i的影响 采用Waters 2695色谱仪和Agilent C18色谱柱考察了体积流量为0.8、1.0、1.2 mL/min时的s/i，并计算RSD，结果均小于5%，表明体积流量的波动对各成分s/i无显著影响。结果见表5。
2.5.3 不同柱温对s/i的影响 采用Waters 2695色谱仪和Agilent C18色谱柱考察了柱温为25、30、35 ℃时的s/i，并计算RSD，结果均小于3%，表明柱温的波动对各成分f无显著影响。结果见表6。
2.6 待测组分色谱峰定位
根据“2.5.1”项中得到的保留时间计算待测成分与芒果苷的相对保留值（r/s，r/s=Ri/Rs），对待测组分进行定位，并计算RSD，结果各待测成分相对保留值的RSD均小于5%，表明采用相对保留值法对待测成分定位是合理的。结果见表7。
表4 不同仪器和色谱柱对fs/i的影响
表5 不同体积流量对fs/i的影响
表6 不同柱温对fs/i的影响
表7 不同仪器和色谱柱对ri/s的影响
2.7 QAMS法与外标法测定结果比较
3 讨论
3.1 供试品溶液制备方式选择
3.2 检测波长的选择
3.3 内参物的选择
参照QAMS法建立的技术指南[10]，内参物应选择含量较高，性质稳定，较易获得的物质。芒果苷在供试品溶液中具有以上优点，因此本实验选择芒果苷为内参物，建立与其他待测成分的s/i，在考察不同仪器、体积流量、柱温等对校正因子的影响时，结果显示RSD均小于5%，说明选择芒果苷作为内参物，建立印度獐牙菜的QAMS法可行。
表8 QAMS法与ESM法测定12批印度獐牙菜中8种酮的含量
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
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Determination of eight xanthones components inwith quantitative analysis of multi-components by single marker
DONG Hui-min1, 2, XU Ru-ling2, HE Dan-dan1, 2, FAN Jun-ting3, JU Jian-ming1, 2
1. Affiliated Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210028, China 2. Jiangsu Academy of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210028, China 3. School of pharmacy, Nanjing Medical University, Nanjing 211166, China
To establish a quantitative analysis of multi-components by single marker method for the determination of eight xanthones in．The relative correction factors (/i) of seven xanthones (1,3,5,8-tetrahydroxyxanthone, swerpunilactone A, 1-hydroxy-3,5-dimethoxyxanthone, 1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone, bellidifolin, 1,8-dihydroxy-3,5- dimethoxyxanthone and 1,8-dihydroxy-3,7-dimethoxyxanthone) were determined by HPLC method with the mangiferin as the internal standard, which were used to calculate the content of each component in. At the same time, the external standard method was used to determine the content of the eight components, and the differences between the two methods were compared to verify the feasibility and accuracy of quantitative analysis of multi-components by single marker.The reproducibility of each correction factor was good, and there were no significant differences in the contents of the ingredients obtained by using the quantitative analysis of multi-components by single marker and the external standard method in the 12 batches of(RSD < 3%).The established quantitative analysis of multi-components by single marker has high accuracy and can be applied to the content determination and quality evaluation of.
(Roxb. ex Flemi) Karsten; multi-components by single marker; external standard method; relative correction factor; mangiferin; 1,3,5,8-tetrahydroxyxanthone; swerpunilactone A; 1-hydroxy-3,5-dimethoxyxanthone; 1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone; bellidifolin; 1,8-dihydroxy-3,5-dimethoxyxanthone; 1,8-dihydroxy-3,7-dimethoxyxanthone
R286.12
A
0253 - 2670(2021)01 - 0241 - 07
10.7501/j.issn.0253-2670.2021.01.029
2020-06-03
江苏省“六大人才高峰”高层次人才培养对象科研资助项目（2015-YY-011）；江苏省药学会奥赛康临床药学基金项目（210303）
董惠敏（1996—），女，硕士研究生，从事中药制剂研究。Tel: (025)85639640；E-mail: 1473787637@qq.com
鞠建明（1975—），男，研究员，从事中药新剂型新工艺及质量控制研究。Tel: (025)85639640 E-mail: jjm405@sina.com
范君婷（1983—），女，讲师，从事天然药物活性成分及其作用机制研究。Tel: (025)86868480 E-mail: juntingfan@njmu.edu.cn
[责任编辑 时圣明]
