新型冠状病毒检测方法的应用现状

周娜

（新疆第八师石河子市疾控中心检验科,新疆 石河子）

0 引言

新型冠状肺炎是近年来出现的一种新型疾病，在患上此病后，患者主要出现的临床症状为：高热、咳嗽、疲劳乏力等，威胁着患者的身心健康，需要对其进行及时检测[1]。目前在临床中有几种常用的检测方法，那么本次研究就对当前常用的SARS-COV-2 基因测序、荧光RT-PCR 核酸检测、血清特异性抗体检测这几种检测方法的相关情况进行综述。

1 基因测序

基因组指的是生物机体内所有遗传信息的和，应用高通量测序平台分析病毒基因组序列，可以成为诊断新冠肺炎的准确依据。经过数据分析结果显示：SARS-COV-2和SARS-COV 中绝大多数的全基因组序列是十分相近的[2]，与蝙蝠具有较高的同源性。但SARS-COV-2 基因组ORF1ab 区域中的RNA 聚合酶基因（RdRp）与SARSCOV 具有明显的差异性，它是一种新型的β 群冠状病毒[3]。

通过创设的研究笔者选取了华南海鲜市场接触史的2 例急性呼吸症患者作为研究资料，对研究资料应用基于RNA 的宏基因组下一代测序检测方式实施检测，通过检测，能够在短时间内检测出新型冠状病毒，这是样本中唯一的病毒。采用的高通量测序检测方法具有准确性高、敏感性强的特点，通过检测可以获得病毒全基因组序列的准确结果，这样就能够显著提升病毒的检测准确性，且对及时明确疾病病机也有促进作用；同时对变异性病毒的监测有指导意义，对于继续开发诊断试剂盒有促进作用。和其他的检测方法进行比较，基因测序方法的优势较高，但是这种检测方法的成本较高，对操作人员的要求也很高，从开始检验一直到得到检验结果需要较长的时间，不能满足COVID-19 爆发时的检测需求。所以，在疫情期间这种检测方式不太适合，需要结合其他的检测方式使用。

2 实时荧光RT-PCR 核酸检测

实时荧光RT-PCR 技术是WHO 推荐的MERS-COV检测方法之一，目前在我国已经将检测患者的呼吸道分泌物、血液标本病毒核酸阳性作为COVID-19 的诊断标准之一了[4]。在疫情刚刚出现的时候，我国的相关部门对SARS-COV-2 确认了序列并予以公布，确认了在基因检测中核酸检测的保守序列区域内容，主要包括：开放读码框、核衣壳蛋白N 基因。SARS-COV-2 属于一类RNA 病毒，其是先将RNA 逆转录为DNA，若样本中有靶序列存在，那么TaqMan 探针与模板相结合，DNA 链扩增就会有荧光显示，在荧光达到阈值时即可得到Ct 结果，病毒核酸浓度与Ct 值是成反比例的[5]。此外，对一些弱阳性标本，要将具有更高敏感度的检测方法开发出来并应用要检测中。张锋教授团队开发了一种基于QRISPR 的SHERLOCK 技术的新方法，能够对SARS-COV-2 的特异性RNA 在短时间内检测出来。虽然取得了一定的成效，但有一些领域还没有涉及到，仍然需要继续去探索。

3 血清特异性抗体检测

3.1 胶体金免疫法

此种方法主要是应用胶体金作为示踪标记物或显色剂来开展检测。其基本原理为：将金标抗原包被在硝酸纤维素膜上，如果受检血液标本中含有SARS-COV-2 特异性抗体的时候，就会形成SARS-COV-2 特异性抗体-金标抗原复合物，借助层析的作用复合物会流向检测区域内，由此金标抗原SARS-COV-2 特异性抗体－第二抗体复合物形成，进而出现显色反应；剩余的那些金标抗原会继续发生扩散，流向质控区域中，显色表示结果在控[6]。胶体金法操作简单，短时间内即可出结果，且样本不需要离心，在检测大数量人群中比较适用比较适用[7]。

3.2 化学发光免疫法

这种检测方法主要是指把发光分析与免疫反应进行结合来实施的检测方法，此种检测方法能够对未知的抗体进行定量检测，当前在临床中应用十分广泛。其基本原理为：如果样本中含有SARS-COV-2 抗体与荧光素标记抗原结合，将包被抗荧光素抗体的磁微粒添加进入，那么即可得到SARS-COV-2 抗体-荧光标记抗原-磁微粒复合物1，然后将其放于特定环境中进行沉淀、去上清，将酶标二抗加入其中，得到酶标二抗-复合物1 结合体，将其上清去掉，然后加入酶促底物，底物受到酶催化进而会产生发光现象，之后通过计算机的处理得到待测抗体的浓度[8,9]。

相关研究结果显示，应用化学发光法检测了确诊组患者、疑似组患者与对照组人员（共计102 例的血浆标本），通过检测得到的结果为：SARS-COV-2IgM/IgG 抗体检测灵敏度为96.0%，特异度为100%。另有相关研究结果显示：应用化学发光微粒子免疫检测法对血清SARS-COV-2 总抗体实施定量检测，得到的结果为：此种检测方法的灵敏度为93.5%，特异度为100%，准确度96.8%。检测结果显示：化学发光法检测SARS-COV-2 总抗体的效果要显著好于胶体金检测法[10]，在SARS-COV-2 感染的检测中具有较好的实用价值。

3.3 酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）主要是应用酶的催化作用所实施的检验。ELISA 需要实施离心操作，操作程序复杂，检测需要较长时间，而且当前还没有此种方法用于检测新冠病毒检测产品的出现。

血清学抗体检测方式的优点为：（1）操作方法简单，对于条件简陋的医院也可以开展，比较适合用于大量样本的筛检过程中。（2）有助于提升荧光RT-PCR 核酸检测的检测准确性。（3）对患者体内抗体含量的变化情况能够进行实时监测出来，为疾病的及时检测提供准确依据。（4）用于传染病既往感染规律的流行病学研究，对于促进SARSCOV-2 等病毒的感染防治和疫苗研发有重要依据[11]。

4 小结

SARS-COV-2 的传染性是比较强的、传播速度快，要及时发现、及时隔离、尽早治疗。但是所采取的基因测序检测方法的时间较长，PCR 核酸检测的全覆盖率较高，并且因为SARS-COV-2 与其他冠状病毒的同源性较高，应用血清抗体检测方法容易发生N蛋白和S 蛋白的抗原交叉反应现象[12,13]，因此，如果只是用单一的检测方法往往不能达到理想的检测效果，要采取两种甚至两种以上的检测方式实施检测，才能不断提高检测工作质量与效率[14,15]。