刺五加多糖对小鼠免疫功能的影响

翟旭楠，刘永武，张娜，赵良友，杜兆远，范卓文

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

刺五加为五加科植物刺五加[Acanthopanaxsenticosus(Rupr.et Maxim.)Harms]的干燥根和根茎或茎[1]。由于对生长环境要求低、耐寒、种植技术简单等原因，所以刺五加广泛分布于我国东北、华北及小兴安岭等地区[2]。刺五加富含活性物质，可以增强人体活力并调节新陈代谢。同时刺五加还具有治疗厌食和失眠的作用[3]。多糖广泛存在于天然高分子化合物中，主要分布于动植物及微生物的细胞壁中[4]。植物多糖是植物自身新陈代谢中产生的，具有来源清楚、毒副作用小、分布广泛、功能多样等优点，被广泛应用于医疗保健、畜牧生产、食品加工等方面[5]。中药多糖普遍存在于菌类、藻类等药材中，研究表明中药多糖具有增强机体免疫力、降低血糖、抗肿瘤、抗氧化、调节血脂等生物活性[6-8]。刺五加多糖是刺五加的有效活性成分之一，由葡萄糖、果糖、阿拉伯糖等组成[9]。本实验通过碳粒廓清实验考察刺五加多糖对吞噬细胞的吞噬作用，并进行溶血素抗体实验,对刺五加多糖的免疫调节作用进行了初步探讨。

1 材料

1.1 仪器

电子分析天平(上海精科天美贸易有限公司)；微量移液器(德国Eppendorf公司)；EDTAK2真空采血管(山东康华医用耗材有限公司)；一次性真空采血管(扬州市华威医疗器械有限公司)；RT-600全自动酶标仪(美国Rayto雷杜公司)；雷勃尔LD25-2离心机(北京医用离心机厂)。

1.2 药品及试剂

刺五加多糖(西安小草植物科技有限责任公司，批号：XC20130515)；印度墨汁(德制Chroma牌，80 mg碳粒/mL)；绵羊红细胞(石家庄华瑞创新生物技术开发中心，批号：20141117)；都氏液(石家庄华瑞创新生物技术开发中心，批号：201409)；胸腺五肽(北京双鹭药业股份有限公司，批号：20058462)；环磷酰胺(天津市广成化学试剂有限公司，批号；201610068)；Na2CO3(天津市广成化学试剂有限公司)；生理盐水(天津市广成化学试剂有限公司)。

1.3 动物

来源于黑龙江中医药大学实验动物中心，BALB/c 小鼠，100只，雌雄各50只，体质量20 g左右，证书号为 P00102014；英国种豚鼠，10只，雌雄各5只，体质量200 g左右，证书号为P00112014。

2 方法

2.1 ASPS对单核吞噬细胞影响

BALB/c小鼠60只，采用随机方法分为6组。分别记为空白组、模型组、阳性药组、ASPS低剂量组[36.25 mg/(kg·d)]、中剂量组[72.5 mg/(kg·d)]、高剂量组[145 mg/(kg·d)]。阳性药组注射胸腺五肽[10 mg/(kg·d)]；多糖组连续7 d，每日灌胃给药1次；除空白组外，在试验第 5、6、7 天注射环磷酰胺注射液0.1 mL(80 mg/kg)[10]。最后一次给药后24 h，将0.1 mL/10 g的稀释印度墨水(用1%明胶稀释4倍)注入尾静脉。注入墨水2 min和6 min后，从眼静脉丛中抽取20 μL血液，立即将其加入含有2 mL 0.1% 碳酸钠的试管中。空白对照样为0.1% Na2CO3溶液，在600 nm下测定光密度值。称重小鼠脾脏及胸腺，计算廓清指数、吞噬指数和脏器指数。

2.2 ASPS对溶血素抗体生成影响

参考文献[11]方法。BALB/c小鼠40只，随机分为4组。分别记为空白组、ASPS低剂量组[36.25 mg/(kg·d)]、中剂量组[72.5 mg/(kg·d)]、高剂量[145 mg/(kg·d)]。对照组小鼠每天采用0.1 mL/10 g，0.9%NaCl溶液灌胃1次，多糖组每日灌胃多糖1次，持续14 d。在给药8 d后，连续7 d经腹腔注射0.2 mL绵羊红细胞混悬液诱发免疫反应。最后一次给药40 min后，眼底取血，离心5 min。将血清与生理盐水按1:300比例稀释，取稀释血清1.0 mL，同一试管中加入绵羊红细胞0.5 mL，再加入10%豚鼠血清1.0 mL。37 ℃温育10 min，冰水浴终止反应，离心。在540 nm处分别测定1.0 mL上清液与3.0 mL都氏液混合溶液的OD值，0.25 mL绵羊红细胞与3.75 mL都氏液混合溶液的OD值。

2.3 统计学处理

3 结果

3.1 ASPS对小鼠免疫器官指数、单核-巨噬细胞功能的影响

模型组小鼠的胸腺指数、脾脏指数、廓清指数和吞噬指数与空白组之间差异显著(P<0.01)，提示造模成功。阳性药组和ASPS高剂量组的胸腺指数、脾脏指数、α值与模型组比较都显著性增加(P<0.01)，具有统计学意义。ASPS中剂量组的胸腺指数、脾脏指数、α值与模型组相比只有胸腺指数显著性升高(P<0.01)，其余均无统计学意义。ASPS低剂量组的胸腺指数、脾脏指数、α值与模型组比较均无统计学意义(P>0.05)。因此可推论ASPS能增强免疫抑制小鼠的吞噬功能。结果见表1。

表1 ASPS对小鼠免疫器官指数、单核-巨噬细胞功能的影响

3.2 ASPS对正常小鼠溶血素抗体生成的HC50的影响

在小鼠产生溶血素抗体的实验中，与空白组相比刺五加多糖给药组的HC50均有升高，其中高剂量组与空白组比较有统计学意义(P<0.01)，中、低剂量组相较于对照组组间比较无明显差异(P>0.05)。因此推断，ASPS可以促进绵羊红细胞诱导的溶血素产生并增强免疫力。结果见表2。

表2 ASPS对正常小鼠溶血素抗体生成的HC50的影响

4 讨论

本研究以BALB/c系小鼠为实验动物，为了研究 ASPS对免疫抑制小鼠血清细胞因子的影响，使用了碳粒廓清法，并进行了ASPS对溶血素抗体生成影响实验，进一步证实了刺五加多糖对增强免疫力的作用。

免疫是一种保护性的生理反应，为了维持机体内环境的稳态和平衡而对外来异物进行识别和排除[12-14]。免疫调节主要依靠免疫系统进行，免疫系统由免疫细胞(T、B淋巴细胞、吞噬细胞等)、免疫器官(胸腺、脾脏等)、免疫分子(淋巴因子、溶菌素等)组成。巨噬细胞来源于单核细胞，是一种多功能效应细胞，单核吞噬细胞分布于全身各器官中，当外来抗原性异物进入机体后，吞噬细胞对其进行识别、处理并将其呈递给T细胞，刺激T细胞增殖分化，引起进一步的免疫反应。因此，吞噬细胞作为体液免疫的第一关卡，其吞噬机能可作为反应机体非特异性免疫功能的重要指标之一。

免疫细胞可分为多种，其中最主要的就是T、B淋巴细胞和吞噬细胞，在免疫反应中担当着重要的角色。T细胞在胸腺分化成熟，B细胞在骨髓中分化成熟，两者都聚积于脾脏，所以一旦发生免疫反应胸腺指数、脾脏指数都会发生相应变化，能够直观地反映机体的免疫反应。本实验对胸腺、脾脏指系数和碳粒廓清指数进行观测，结果表明刺五加多糖ASPS可以显著提高免疫抑制小鼠单核巨噬细胞的吞噬能力。

小鼠中的溶血素水平是特异性免疫力的重要指标。为加强特异性抗SRBC抗体的产生，将红细胞作为一种强抗原异物注入小鼠体内，抗体生成并释放到外周血中，来进行溶血素检测。在有补体参与的情况下，发生细胞免疫后的小鼠血清与绵羊红细胞共同温育会产生溶血反应，释放出血红蛋白，血清中的抗体含量与红细胞的溶血程度有关，溶血程度可以通过颜色来判断。因此，B细胞增殖分化的能力与补体结合分泌溶血素的能力可以通过溶血素数值来表达，从而可以反映出机体的体液免疫能力[15]。本实验通过绵羊红细胞致使小鼠产生溶血素抗体，对口服ASPS后抗体的变化进行了相应研究。由此可知,ASPS可以提高正常小鼠溶血素HC50，具有增强小鼠体液免疫的功能。