黑骨藤的化学成分和药效研究进展

孙文娟，龙春芳，龙 毅*

（1.贵州中医药大学，贵州贵阳 550025；2.凯里学院，贵州凯里 556011）

黑骨藤是萝藦科杠柳属植物黑龙骨的干燥根或全株，别名铁骨头、黑骨头、黑龙骨、飞仙藤等，已被收载于《全国中草药汇编》、《中华本草苗药卷》、《贵州省中药材民族药材质量标准》等众多书籍中［1-4］.通过大量的文献研究发现，黑骨藤中含有强心苷类、醌类、黄酮类、苯丙素类、三萜类、甾体类、挥发油类及神经酰胺类等多种类别的化学成分，在治疗关节、神经、皮肤等系统疾病及肿瘤方面有一定的疗效.本文对苗药黑骨藤中主要的化学成分、疾病治疗作用及治疗机制等进行了综述，以期为今后深入研究及临床开发应用提供可靠的参考依据.

1 化学成分研究

近年来，研究者们采用不同提取分离纯化的方法从黑骨藤中分离出大量不同种类的单体化合物.如2010 年，周欣等［5］在黑骨藤的正丁醇提取部位，首次分离得到了苷元为醌类和黄酮类的6个新的苷类化合物；2011年，徐冉等［6］在黑骨藤的氯仿萃取部位，首次分离鉴定了5个单体化合物，分别为香豆素类、三萜类和酚酸类化合物；2013年，宋国斌等［7］从黑骨藤的石油醚提取部位分离鉴定了28种成分，其中酸类成分含量占总挥发油提取物的34.14%，棕榈酸的含量最高，可达到22.94%；2014年，赵超等［8］在黑骨藤的三氯甲烷和正丁醇萃取部位首次分离鉴定出了2个神经酰胺类化合物，即（2S，3S，4R，10E）-2-［（2R）-2-羟基二十四烷酰氨基］-10-十八烷-1，3，4 -三醇和1 -O -β -D -葡萄糖-（2S，3S，4R，10E）-2 -［（2R）-2 -羟基二十四烷酰氨基］-10-十八烷-3，4-二醇；赵珊等［9］和何燕玲等［10］分别在2017年和2019年在黑骨藤的水溶性提取部位共分离鉴定了33个单体化合物，且首次分离得到了12个咖啡酰基奎宁酸类化合物.

各项研究中分离的化合物主要集中在极性较大部位，尤以水提部位为多，这些化合物又通常具有细胞增殖抑制、抗氧化和抗肿瘤的活性.由此可以推测黑骨藤水溶性提取部位是抗类风湿性关节炎的主要活性部位，这或许是民间和临床治疗风湿性关节炎和类风湿关节炎等疾病时通常会采用水煎煮的方式进行服用的原因.

2 黑骨藤的治疗作用及机制研究概述

2.1 治疗关节系统疾病的作用

2.1.1抗炎、抗类风湿作用

党荣敏等［11］通过实验动物分组、造模以及实验干预等方法研究大鼠的踝关节病理情况时发现，黑骨藤具备一定的抗炎作用.同时在这个实验中，经过观察发现，黑骨藤高剂量组滑膜细胞有增生，周围软组织的充血水肿不是特别明显，与秋仙水碱组一样只是少量的炎性细胞出现浸润现象；黑骨藤中剂量组和低剂量组的滑膜细胞均出现了轻度的水肿情况，并且周围软组织也出现了充血水肿的情况，与此同时还可以看见少量炎性细胞的浸润.因此，从黑骨藤不同剂量呈现的药效作用来看，其抗炎作用与用药剂量之间有着一定的量效关系.

黄明进等［12］采用黑骨藤60%乙醇提取物进行了药理实验，发现黑骨藤可以有效地降低患有类风湿性关节炎大鼠体内的血清及大鼠组织液中肿瘤坏死因子α、白介素-6和大鼠白介素-1β的含量水平，从而实现治疗类风湿性关节炎的目的.李慧敏等［13］研究发现，黑骨藤中总黄酮和总皂苷是抗类风湿性关节炎的有效成分，它们的含量高低与抗炎效果的强弱成正比，总黄酮的抗炎作用可能小于总皂苷.

宋国斌等［14］发现黑骨藤中含有的挥发油通过降低血清中NO、丙二醛的含量和抑制小鼠腹腔毛细血管通透性亢进，产生抗炎作用.还有研究发现，黑骨藤乙醇提取物是通过减少iNOS和COX-2 表达以及TNF-α、IL-6、NO 和PGE2 等炎症因子的产生来发挥抗炎作用的［15］.Liu 等［16］对黑骨藤皂苷及其活性化合物杠柳苷进行研究发现，黑骨藤皂苷可改善关节的肿胀，抑制关节骨质侵蚀，杠柳苷能抑制促炎症因子水平和抑制LPS 诱导的细胞因子从滑膜细胞分泌.以上研究都证明，黑骨藤有一定的抗炎、抗类风湿的作用.

2.1.2镇痛作用

刘明等［17］采用SPF 级昆明种小鼠，通过醋酸扭体法和热板法对黑骨藤的镇痛作用及发挥作用的有效部位进行了研究.结果表明黑骨藤中石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇、水的提取部位均有镇痛作用，而其中正丁醇提取部位的镇痛作用最为显著，其作用能力与阳性对照镇痛抗炎药阿司匹林相当，对疼痛的抑制率可达到80.2%.炎症发作时，在炎症部位总是会伴随着剧烈的疼痛，而这种疼痛既可以在局部发生，也可以反映在全身.以往临床应用的很多药物无法达到抗炎与镇痛兼顾的治疗效果，如中枢性和麻醉性的止痛药只能起到止痛作用，糖皮质激素类药物只能起到一定的抗炎作用，而且这类药物的副作用相对而言比较多，如肠胃反应、肺损伤、成瘾等，因此黑骨藤作为一种兼具抗炎与镇痛作用的药物，非常值得在临床应用上进行深入研究.

2.2 治疗神经系统疾病的作用

Pristionchus pacificus线虫可以通过热刺激的方法导致其神经损伤，这种神经损伤与人类神经损伤的情形非常接近，因此人们通常会采用这种方法进行神经系统疾病的研究.张贵源等［18］研究发现，黑骨藤具有修复神经损伤线虫的功效，这一发现为黑骨藤在治疗神经损伤方面的疾病提供了有价值的参考.大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）已被广泛地用于神经保护作用的药物筛选与研究当中.通过研究被H2O2氧化损伤的PC12细胞，发现黑骨藤的乙醇提取物可以提高PC12细胞的存活率，由此可以证明，黑骨藤具有一定的抗氧化损伤作用［19］.王恒等［20］通过建立SNI（坐骨神经损伤）模型的方法，对黑骨藤的乙醇提取物作用于大鼠坐骨神经钳夹的损伤进行了研究.结果表明，黑骨藤乙醇提取物对SNI 模型大鼠的坐骨神经功能具有改善功能，对SNI 模型大鼠坐骨神经的功能修复有明显的治疗作用.

2.3 治疗皮肤系统疾病的作用

通过使用二硝基氯苯所诱发的小鼠迟发性超敏反应，发现了黑骨藤的醇沉部位的小鼠灌胃给药对于抑制二硝基氯苯诱发的超敏反应具有明显的抑制作用.研究数据表明，黑骨藤醇沉部位的剂量在50 mg/kg 的时候抑制二硝基氯苯诱发的超敏反应作用非常明显，且剂量在50 mg/kg 和100 mg/kg 的黑骨藤醇沉部位还能明显地抑制增强脾细胞增殖反应.由此可知，黑骨藤醇沉部位具有一定的免疫抑制活性，并且可考虑将其应用于过敏性疾病治疗当中［21］.

特应性皮炎作为一种人体免疫调节作用异常的瘙痒疾病而存在.针对该病症，鲍春梅等［22］通过研究黑骨藤皂苷对特应性皮炎小鼠的治疗作用，发现黑骨藤皂苷可以治疗特应性皮炎.目前虽然黑骨藤皂苷治疗特应性皮炎的免疫调节机理还没完全清楚，但为深入研究治疗特应性皮炎提供了一定的理论依据.

2.4 治疗肿瘤的作用

研究发现，杠柳苷元具有一定的抗肿瘤作用，但因其含量较低，且具有一定的不良反应，致使其进一步的开发应用有待研究［23］.张引娟等［24］通过研究杠柳苷对人乳腺癌细胞柱BT-549 的抑制作用，发现杠柳苷具有显著的抗肿瘤作用.王瑾等［25］采用细胞毒活性筛选的方法，对从黑骨藤中分离得到的4个化合物进行了研究，发现其中3个强心苷类化合物对前列腺肿瘤（PC-3，DU-145）、黑色素瘤（UACC-62）及血液系统肿瘤（HL-60，CCRT-CEM）等细胞系的细胞具有显著的细胞毒活性.梁勇等［26］利用MTT 法对黑骨藤进行抗肿瘤实验，结果发现，黑骨藤提取物中乙酸乙酯部位的抗肿瘤活性非常显著，同时确定了杠柳苷和一种酚酸类化合物是乙酸乙酯部位抗肿瘤活性的主要成分.

张鹰等［27］采用网络药理学的方法，研究了西南地区各省份黑骨藤防治肺癌的分子机制，发现黑骨藤中强心苷类成分对肺癌及多种肿瘤细胞具有较好的抑制作用.黄秀兰等［28］研究发现黑骨藤可能是通过PI3K-AKT（细胞内信号转导通路之一，发挥抑制凋亡、促进增值的关键作用）和NAKB（真核细胞转录因子，可致细胞增殖失控）两条信号通路发挥抗肺癌的作用.虽然结论存疑，但也为黑骨藤临床应用于基因干预方法治疗肺癌提供了新的研究思路和方向.

2.5 其他作用

目前，关于黑骨藤心脏活性的研究报道极少.杨婉珠等［29］通过离体蛙心心脏灌流实验，初步探讨了黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位对离体蛙心心率和心肌收缩力的影响，发现黑骨藤乙酸乙酯提取部位可以对离体蛙心的收缩活动起到有效的抑制作用.其作用机制，一方面可能与在心肌组织中的Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性升高，同时抑制Ca2+内流，从而减少细胞膜内Ca2+浓度有关；另一方面，可能与其通过抑制AChE 活性，从而使M 受体兴奋，β 受体被阻断的作用有关.但由于黑骨藤中化学成分复杂多样，且本研究仍处于离体实验研究阶段，其具体的作用机制需进行体内动物实验或对黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位进行纯化后进一步研究，此研究结果为黑骨藤在治疗心血管系统疾病中发挥作用奠定了理论基础.Liang 等［30］通过体外抑制透明质酸酶实验发现，使用聚酰胺纯化的黑骨藤中提取的黄酮类物质，有良好的抗透明质酸酶能力.

3 临床应用

由于苗药黑骨藤对类风湿性关节炎有着良好的疗效，因此被制作成了中药制剂，以方便患者使用.其中黑骨藤追风活络胶囊便于2002年作为OTC 甲类医保工伤用药问世.此药物的出现，在为医疗工作做出贡献的同时，也引起了大批实验人员的注意，为此展开了一系列的科学研究.王可博等［31］发现治疗风寒湿痹型类风湿关节炎，热补针法与黑骨藤追风活络胶囊一起使用有着较好的疗效，今后在临床上可以将这种方法进行更为深入的推广应用.古金华等［32］也研究发现黑骨藤追风活络胶囊对患者的软骨修复有很好的促进作用，可显著缓解风湿痹型膝骨关节炎疼痛及功能障碍，且作用于多种细胞因子.

采用联合用药的方法可以使类风湿性关节炎得到更为有效的治疗，甲氨蝶呤作为临床常用的抗风湿类药物被用于此种方法当中.甲氨蝶呤改善类风湿病患者临床症状的主要方式是抑制二氢叶酸还原酶以及辅酶F的形成，进而阻止了嘌呤和胸腺嘧啶的合成，在此基础上有效地起到破坏炎性细胞的增殖、减少炎性因子的释放和减轻炎症反应的作用.但类风湿性关节炎的患者普遍都身体比较虚弱，而甲氨蝶呤不良反应较多，譬如长期使用后导致的消化系统损害、神经系统损害、黏膜损害、生殖系统损害等，所以在治疗时间过长时，长期使用的不良反应较多从而限制了其临床应用［33］.董元凤等［34］应用随机数字表法研究发现，黑骨藤追风活络胶囊可以在一定比例的给药用量的情况下缓解甲氨蝶呤的副作用，两者对类风湿性关节炎的治疗产生了相辅相成的作用，从而治疗类风湿性关节炎采用黑骨藤追风活络胶囊与甲氨蝶呤联合用药的方法是安全有效的.

4 结语与展望

黑骨藤作为贵州的十大苗药之一，被广泛地应用于人们日常的疾病治疗当中，随着现代医学的不断发展，其传统功效通过现代药理学的方法逐渐得到了相应的验证.天然药物有效成分普遍存在着成分复杂，研究困难的问题，黑骨藤也不例外.但正是因为黑骨藤成分繁杂，不仅使其具有抗炎、镇痛、神经保护、防治肿瘤、抑菌等作用，还使其具有很多待开发的药用价值.目前对黑骨藤的药理学研究大多都停留在有效部位上，而对其单一的化学成分的药效研究相对较少，因此在今后的研究中，可以对其具体化学成分的药效进行更多的研究.临床研究方面，对黑骨藤的副作用或毒性试验的研究也相对较少，研究报道主要集中在其功效主治方面，为达到更为安全有效的用药目的，在今后的临床研究中要对其进行更为全面的研究.