RNA在交通事故类的案件中的法医学意义

周佩佩

（南京康宁司法鉴定中心，江苏 南京）

0 引言

RNA是DNA的转录产物，由核糖核苷酸颈磷酸二酯键缩合而成长链分子，与遗传信息的表达和调控有关，并以各种不同的方式行使这些功能。按其功能不同可分为mRNA、tRNA及rRNA，可指导蛋白质的合成，决定细胞表型，具有组织特异性，可解决DNA在生物样本组织来源、死亡时间、死亡原因方面不足的问题。

1 死亡时间推断

死亡时间推断即推断死后经历或间隔时间，一直是法医学实际工作及研究工作的重点及难点。在交通事故致死案件中，尤其是伤后急性死亡的案件，死亡时间推断对于认定和排除肇事嫌疑方，划定搜寻方向有重要作用。特别是在涉及多个嫌疑人时，死亡时间的准确推断显得愈加重要。传统方法中一般主要根据尸体现象或尸体内源性指标来判断，易受主观因素及外界环境因素（如温度、湿度、土壤等）的影响。近年来，RNA作为一种死亡时间推断的新指标受到关注。

肖俊辉等[1]采用RTPCR法检测大鼠肺和膈肌组织中β-actin mRNA含量的变化并进行半定量分析以模拟大鼠死后改变,结果发现两种组织中β-uctin稳定性具有时间和空间差异性,证实mRNA也可以作为死亡时间推断的客观指标。对于在同一个体不同器官组织内RNA的降解差异，Inoue等[2]发现RNA在脑组织中最稳定，死后4～7天仍能验出，其次为肺及心脏，肝组织内RNA稳定性最差。GAPDH、β-actin和18S rRNA是检测PMI的常用指标，降解规律在不同实验条件下呈现出不同现象[2-4]。而皮肤直接与外界环境接触，被认为易受环境影响，组织内的RNA容易降解，然在早期死亡时间中保持稳定[5]。潘晖等[6]认为皮肤作为比较适合作为抽提RNA的检材,其中β-actin与GAPDH表达水平与PMI相关性良好，可用来辅助推断PMI。

虽然RNA降解在死亡时间推断上有着一定的关系，但死后环境、RNA酶、pH值等对RNA的降解存在一定的影响，且因影响因素的不同，降解规律也存在着差异，为提高死亡时间的可靠性，在实际工作中推断死亡原因需综合考虑各种因素的影响。

2 组织来源鉴别

在交通事故案件中，特别是在涉及多辆交通工具碾压、撞击的情况下，现场及涉事交通工具上，往往留有的生物检材过于细碎，所含DNA量或RNA量较少，以量少的检材来鉴定其来源对于案件的分析具有重要作用。国内外相关研究已采用定量RT-PCR技术研究针对静脉血、唾液、精液、月经血的特异性mRNA,将GAPDH管家基因作为内参,对静脉血、唾液、精液、阴道分泌物、月经血等体液以及脑组织、骨骼肌、皮肤、脂肪等组织进行特异性检验,显示上述特异性mRNA具有组织或细胞特异性，并成功试验引入3个管家基因，用mRNA区分从静脉血、唾液、精液、月经血的复合RT-PCR分析方法来进一步提高检测结果的可信度[7-9]。

3 损伤时间、损伤机制推断

用特异性mRNA鉴别出不同的体液、组织后，可根据组织、体液附着的部位，结合现场痕迹勘察，推断出现场事故发生时各方当事者的状态以及事故发生的动态变化。

细胞损伤后，机体内产生的新的蛋白质以及原有蛋白质数量的改变均与RNA有关，则存在检测mRNA的在生物体内的水平来推断损伤时间的可能。有学者通过建立大鼠生前及死后的皮肤损伤模型发现，转移生长因子β1 mRNA在生前皮肤损伤后0.5h上升，3h开始急剧上升，48h达到峰值，死后皮肤创口未见转移生长因子β1 mRNA表达[10]，故转移生长因子β1 mRNA可作为客观证据辅助鉴别生前伤及死后伤。在多项实验中发现，转移生长因子β1 mRNA在伤后0.5h至48h随时间发生动态变化，在正常组织中未检测出的细胞型连接蛋白mRNA在伤后24h内随时间延长而上升，纤维粘连蛋白mRNA在脑损伤后48h达到峰值[10-11]，由此可见，依据不同mRNA的表达及动态变化在法医学中对于损伤是否形成、损伤时间的推断、以及不同器官的损伤特异性提供了新的依据。

4 死亡原因分析

确定死亡原因是法医病理学的首要任务，疾病的发生和外界的刺激会导致机体产生一系列的病理性、生理性变化，使体内蛋白质水平产生变化，mRNA也产生相应的变化，故可认为对分析死亡原因甚至死亡过程及机制有一定帮助。在交通事故的案件中，很多案件的死者体表损伤比较轻微，也没有其他影像学检查等证据支持，甚至有些案情比较复杂的，如撞击后抛出车外溺水等，死亡原因的认定就比较困难。在针对心血管疾病的研究中发现，microRNA在急性心肌梗死、心力衰竭、心律失常及心肌病中存在不同的表达变化[12]，为心源性猝死类案件提供分子生物学的帮助，而且由于miRNA表达的特异性及多样性，对确定心源性猝死的心血管疾病类型也存在一定的价值。在创伤性脑损伤中，microRNA在大脑皮质内随着时间变化有着不同程度的表达及上升[13]。这些结果都表明，通过microRNA分子的表达变化来推断死亡原因存在一定的可行性。

5 展望

RNA作为生物标记的分子，由于其多种独特性，特别是microRNA，其片段小、稳定性高、组织特异性强，在组织来源、死亡时间及死亡原因推断等方面具有一定的研究价值，也可作为生物分子标记物应用于心源性、脑损伤等疾病的诊断。但相较于DNA，RNA容易受环境等因素影响，并且其种类繁多，在实际工作中提取、检测等方面均存在着一定的难度。相信随着研究的深入、技术的发展，未来RNA在法医学鉴定中有着更为广阔的前景。