动物性食品中磺胺类药物多残留检测能力验证质量控制技巧

田雪莲， 周开拓， 兰承兴， 李雪林

(福泉市农业农村局，贵州 福泉 550599)

能力验证是评价检验检测机构检测水平和检测能力的依据，贵州省农业农村厅每年都要组织各市(州)、县级农产品质量安全检测机构参加能力验证考核，2019—2020年连续2年对磺胺类兽药残留检测进行考核。2020年考核的参数是磺胺吡啶、磺胺醋酰、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪，自领取样品后必须96小时完成检测，上报检测结果及相关原始记录。贵州省福泉市农产品质量安全综合检测中心自2017年获得兽药残留检测资质认定以来，已连续3年一次性通过兽药残留能力验证，积累了能力验证的相关经验。本文以能力验证采用的《动物性食品中13 种磺胺类药物多残留的测定 高效液相色谱法》(GB 29694—2013)标准为依据[1]，分析兽药残留检测能力验证中的影响因素及质量控制技巧，为农产品质量安全检测机构提高能力验证水平提供参考。

1 动物性食品中磺胺类药物多残留检测能力验证过程

1.1 考核样品及检测项目考核样品为2个平行双样，均为空白添加样品。考核样品基质是猪肉，每个样品重5.00 g。检测项目为猪肉中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪5种药物。

1.2 考核样品前处理按照《动物性食品中13 种磺胺类药物多残留的测定 高效液相色谱法》(GB 29694—2013)的方法进行考核样品前处理。

1.2.1 提取考核样品中加入乙酸乙酯20 mL，涡动2 min，4 000 r/min离心5 min，取上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣中加入乙酸乙酯20 mL，重复提取1次，合并2次上清液，备用。

1.2.2 净化鸡心瓶中加入0.1 mol/L盐酸溶液4 mL，于40 ℃下旋转蒸发浓缩至<3 mL，转至10 mL离心管中。用0.1 mol/L盐酸溶液2 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中。再用正己烷3 mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同一离心管中，涡动30 s，3 000 r/min离心5 min，弃去正己烷。再用正己烷3 mL重复萃取1次，取下层液备用。MCX柱依次用甲醇2 mL和0.1 mol/L盐酸溶液2 mL活化，取备用液过柱，控制流速约为1 mL/min。依次用0.1 mol/L盐酸溶液1 mL和50%甲醇乙腈溶液2 mL淋洗，用洗脱液8 mL 洗脱，收集洗脱液，于40 ℃氮气吹干，加0.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解残余物，0.45 μm滤膜过滤，用高效液相色谱法测定[2]。

1.3 样品检测检测仪器：液相色谱仪。色谱柱：ODS-C18(250 mm×4.5 mm,粒径5 μm)。流动相：0.1%甲酸+乙腈。梯度洗脱见表1。流速1 mL/min，柱温30 ℃，检测波长270 nm，进样体积100 μL。

表1 流动相梯度洗脱条件

1.4 检测结果考核样品经5种磺胺类混标0.25 μg/mL 单点校准，检测结果见表2；5种磺胺标准曲线见图1；考核样品检测图谱见图2。经贵州省农业农村厅能力验证通报，此次考核结果合格。

表2 考核样品检测结果

3 兽药残留能力验证质量控制技巧分析

3.1 提前练习做好添加回收按照GB 29694—2013的操作程序或作业指导书进行操作，熟练掌握方法的前处理过程，确保所做样品添加回收在60%～120%。若实验的重现性较差，则查找原因进行改正，确保方法的灵敏度和准确度。

3.2 净化彻底与避免损失

3.2.1按照GB 29694—2013净化步骤，在鸡心瓶中加0.1 mol/L盐酸溶液旋转蒸发时，蒸发温度最好不要超过60 ℃，蒸发至<3 mL即可。用 0.1 mol/L盐酸溶液洗鸡心瓶要用吸管反复多次润洗，再用正已烷3 mL洗鸡心瓶，清洗溶液转至同一离心管中，涡旋混合30 s，3 000 r/min离心5 min，弃去正己烷。此时要用吸管吸去样品中的油脂，油脂吸取要彻底并避免吸取过多，油脂吸取不彻底会影响后续的过柱，导致柱子堵塞；吸取油脂时若吸取了下层的盐酸溶液，又会引起残留损失，导致回收降低。

3.2.2样品过MCX柱时，要控制流速为1 mL/min，不要用外力挤压柱子，挤压柱子会影响柱效，导致回收降低。用洗脱液洗脱时，最好采用洗脱液8 mL，按照GB 29694—2013方法采用4 mL洗脱时会导致磺胺醋酰回收率低，只能达到30%～40%，而采用洗脱液8 mL能确保所有磺胺药品回收达到实验要求。

3.3 严格做好质量控制质量控制中应包括空白对照和质控样品(检出限3～10倍加标)，与考核样品同时测定。空白对照可避免测试过程中的污染和空白基质中的干扰，质控样品可确保测试结果的灵敏度和准确度，同批次实验质控样品达到回收要求则考核样品一般也会在允许误差范围内。

3.4 定性与定量分析在进行定性分析时，对出峰时间接近的兽药要单独配制标样，重新调整流速或流动相洗脱比例，让峰型充分分开。数据分析要精准，建议确定样品各兽药的浓度范围，再配置1个近似的标样浓度进行校准分析，选取前后2针峰面积平均值作为标样峰面积，校定样品浓度。

4 小结

本文通过开展磺胺类药物检测能力验证考核，总结分析了畜产品兽药残留检测能力验证的质量控制技巧，通过强化检测方法中的操作要领和关键点，使检测人员的实验操作技能得到提升，有利于提高兽药残留检测水平和能力验证的通过率，保证检测机构出具准确、公正、有效的检测数据，提高畜产品质量安全监管水平，保障畜禽产品质量安全。