探讨HPV E6/E7mRNA 检测在宫颈病变中的诊断价值

陈媛

（湖北省鄂东医疗集团妇幼保健院 检验科，湖北 黄石 435000）

0 引言

宫颈病变常会发展为宫颈癌，作为危害女性健康的常见恶性肿瘤，据有关调查显示每年全球发生宫颈癌的女性约50万左右，而由于宫颈癌死亡的女性高达20 万左右，宫颈癌的发病率比较高，会对女性身心健康与生命安全均带来极大影响。而宫颈癌在发展时需要经过较长且可逆转的病变过程，因此在早期给予准确有效的诊断，对后期的治疗尤为关键[1]。宫颈上皮内瘤变与宫颈癌的主要发生原因是由于HPV 的持续性感染，临床上常应用HPV 检测诊断HPV 感染情况，但对于大多数性生活活跃女性而言出现HPV 感染情况较为常见，因为经过一段时间机体的免疫系统能够自动清除，故仅存在一小部分慢性感染者有可能会发展为宫颈恶性肿瘤，因此HPV 检测技术具有一定的灵敏性但特异度不够，会使受检者受到不必要的检查与受访，进而增加受检者的经济、身体以及心理压力，而HPV 的早期基因中E6 与E7 蛋白能够反映出肿瘤进展和癌症情况，发展为宫颈癌的前提就是具备HPVE6/E7 致癌蛋白[2]，因此HPV E6/E7mRNA 检测能够充分了解人体细胞中的HPV E6/E7 致癌蛋白转录与活性现象。基于此，本文将对在宫颈病变中应用HPV E6/E7mRNA 检测展开分析，详细内容报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。回顾性分析我院在2017 年2 月至2019 年1月收治的早期宫颈病变患者120 例的临床资料，年龄20-49 岁，平均（35.68±4.12）岁。入选患者均通过相关检查符合本病的诊断标准。本次研究均告知患者并征得患者以及家属同意，签订知情同意书且通过伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 采集标本：清洁患者宫颈外表面，使用宫颈刷置入患者的宫颈口，运用顺时针旋转方式刷宫颈5 圈后，将已经收集到的宫颈处上皮细胞放置在专用的细胞保存液容器中保存备检。

1.2.2 HPV DNA 检测：将标本保存液左右摇至30 min 后，充分混匀保存液和标本，尽量远离粘液，并将400 ul 上清液加入到2 mL 离心管中，并置于离心机中，转速调整为5000 rpm，离心1 min 后清除掉上清液，选择合适的HPV 试剂盒，提取分泌物中的HPVDNA，然后完成PCR 扩增，进行杂交、显色等相关操作，在质控斑点正常显色的情况下，不同型别对应的位置出现篮紫色斑点为此型阳性。

1.2.3 HPV E6/E7mRNA 检测：将标本置于3000 转的离心机内离心5 min，清除掉清液之后，加入2 mLDDH20，将细胞反复吹打之后混悬并离心5 min，将上清液完全去除达到同质化，离心后的细胞团再次进行沉淀，之后将20 ul 裂解液与400ulDDH20 置于内，充分吹打混匀之后将5 ul 的蛋白酶1 加入在内，置于60℃的环境下约60 min，在此过程中需要充分振荡2 次，之后去除上清液进行测试，选用本院的试剂盒、冷光剂，操作方法依据产品说明书进行相应的操作。

1.3 观察指标。检查后，经专业的相关医护人员仔细查看患者检查情况，并详细记录其中阳性情况，同时对比分析2 种检测方法应用后其疾病检出率。

1.4 统计学分析。通过SPSS.20.0 统计软件来比较分析所有数据，计数资料以（%）表示，以X2 和t 来进行组间检验，采用P＜0.05 代表组间差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对比HPV E6/E7mRNA 与HPV DNA 检测符合情况。HPV E6/E7mRNA 检测阳性47 例，阳性率39.17%（47/120）；HPV DNA 检测阳性98 例，阳性率56.67%（68/120），比较结果为（χ2=6.134，P=0.013）。2 种方法对比，HPV DNA 最高，差异明显（P＜0.05）。

2.2 对比HPV E6/E7mRNA与HPV DNA检测病变检出率。HPV DNA 检查出病变91 例，检出率为75.83%；HPV 检查出病变102 例，检出率为85.0%；HPV E6/E7mRNA 检查出病变120 例，检出率为100.0%，比较结果为（χ2=11.216，P=0.000）。2 种方法对比HPV E6/E7mRNA 检查的病变检出率最高，差异明显（P＜0.05）。

3 讨论

宫颈癌作为恶性肿瘤，近几年来发病人群越来越趋于年轻化，并且在女性恶性肿瘤的致死率中久居不下，主要致病因素则为高危型HPV 感染，HPV 是人乳头瘤病毒，该病毒会严重影响到患者机体免疫系统，因此检测HPV 对于宫颈癌的诊断与预后尤为关键。临床上应用HPV 检测基本能够清楚患者病变情况，但由于人体中对个别病毒具有清除功能，会使得检查结果会与患者的实际病情不符合[3]。宫颈癌发病率较高，通过安全可靠的筛查方法能够在一定程度上使发生率降低，而有效的筛查方法需要同时具备高的灵敏度与特异度，临床应用的细胞学检测方法，具有较高的特异度，但灵敏度却较低，HPV DNA 检测虽然可检出高级别癌前病变，但其具备的特异度较低，使得阳性结果不准确，易出现假阳性的情况，因此急需要一种特异度与灵敏度兼备的筛查方式。

有相关调查显示HPV 感染的主要年龄分布为两个高峰，其一是16-25 岁间，其二是34-50 岁间，主要是由于16-25岁的年轻女性性生活活跃等有关，而34-50 岁的女性与HPV持续与潜伏感染的激活状态有密切关系[4]。本次研究中HPV DNA 阳性检出率高于HPV E6/E7mRNA 检测（P ＜0.05），这主要与HPV DNA 是结构基因有关，当出现感染时，HPV DNA 就能检测到，但对于“假阳性”结果，往往会给患者一些心理负担，并且后续还需要通过阴道镜和组织活检再次进行检测，对患者身体造成不必要的伤害，易引起医患关系等社会问题；HPV 检测出现漏诊的原因：①HPV 分型检测时主要是依靠检测L1 衣壳蛋白的情况，来确定HPV 亚型，但当HPV 基因整合宿主的细胞基因之后，L1 则不会再次表达；②HPV 分型检测依据PCR 技术对HPV 亚型进行检查[5]，但对于该技术放大时对于不同型别的HPV 效率也不同，有时会出现一些型别在放大的过程中突然消失，因此筛查方法的关键则在于明确癌基因的整合情况，而不是单纯的对HPV 感染情况进行检测，而检测E6/E7 癌基因的转录情况恰好弥补了该项缺陷，E6、E7 基因具备致癌作用，能够转录mRNA表达癌蛋白，实现改变机体细胞的正常代谢功能，使细胞出现病变，导致产生癌变。病毒感染早期的病毒基因呈现游离现象，此阶段的E6、E7 基因属于静默期[6]，表达mRNA 较低，一旦HPV 病毒出现持续感染，病毒基因整合人类基因，进而激活E6、E7 基因，借助宿主细胞使mRNA 出现转录，大量表达癌蛋白，从而增加细胞发生高级别病变风险。而HPV E6/E7mRNA 检测能够主要就是检出E6、E7 基因，提高对病变细胞检出的准确性，降低患者的心理压力。

综上所述，HPV E6/E7mRNA 检测在宫颈病变中的诊断效果显著，值得临床应用推广。