色谱法在巴比妥类药物含量测定中的应用分析

李俨，孙立丽，王婉婷

（吉林市食品药品检验所，吉林 吉林）

0 引言

巴比妥类药物内最主要的成分就是巴比妥酸盐，该成分具有抑制中枢神经的作用，因此在临床上常用于镇痛、镇静、催眠需求上，而介于此类药物的安全隐患，在使用时保障巴比妥酸盐含量符合标准，否则容易出现医疗事故。就这一点，依照国家规定任何巴比妥类药物都必须经过药品检验，而色谱法就是此类药品检验中的常用方法，但随着现代技术发展，色谱法在巴比妥类药物测定中的应用方式也越来越多，对此文章将依照测定流程，分析色谱法测定巴比妥类药物的常见方式，且阐述各方法的特点。

1 巴比妥类药物特征

要对巴比妥类药物进行测定，就必须先了解此类药物的特征，这一基础上下文将对常见巴比妥类药物的结构与理化性质进行分析。常见巴比妥类药物包括：巴比妥、苯巴比妥、戊巴比妥、环己烯巴比妥、司可巴比妥、异戊巴比妥、硫喷妥钠、甲苯巴比妥、己锁巴比妥。

巴比妥类药物的理化性质包括分子量、溶剂，针对以上常见药物，其理化性质分别为：巴比妥分子量：184.19、溶剂：pH值9.4的硼酸盐缓冲液；苯巴比妥分子量：232.24、溶剂：0.1mol/L NaOH溶液；戊巴比妥分子量：226.27、溶剂：pH值9.4的硼酸盐缓冲液；环己烯巴比妥分子量236.27：、溶剂：pH值10或13的碱性溶液；司可巴比妥分子量：260.27、溶剂：pH值9.4的硼酸盐缓冲液；异戊巴比妥分子量：226.27、溶剂：pH值9.4的硼酸盐缓冲液；硫喷妥钠分子量：264.3227、溶剂：pH值9.4的硼酸盐缓冲液；甲苯巴比妥分子量：246.26、溶剂：pH值10的碱性溶液；己锁巴比妥分子量：236.27、溶剂：分子量：246.26、溶剂：pH值10的碱性溶液。

2 色谱法应用

介于国标巴比妥类药物测定流程，色谱法应用可以分为两个步骤，即前处理、色谱法测定，下文将对两个步骤中的色谱法应用常见方式、应用方法及特点进行分析。

2.1 前处理

目前，色谱法巴比妥类药物测定当中的前处理方法有二，即蛋白沉淀法、溶剂萃取法，下文将对两种方法的应用进行分析。

（1）蛋白沉淀法

蛋白沉淀法主要适用于血样状态的巴比妥类药物测定当中，应用具有针对性特点，且该方法应用方式简便、容错率较高，因此受到了广泛关注。在应用方法上，针对巴比妥药物类型，需要先选择对应的蛋白沉淀剂，后将蛋白沉淀剂滴入药物溶液当中，使两者产生反应，此时蛋白受沉淀剂影响会逐渐下降，而剩余巴比妥盐酸则浮于上层，实现了蛋白与巴比妥盐酸分离，后续采用色谱法可以进行检验。这种方法的应用可以保护色谱柱被污染、避免萃取时的乳化现象。原理上，该方法中的蛋白沉淀剂属于有机溶剂，具有降低溶液中介电常数的作用，接触后会使溶液内的蛋白质分子凝集而沉淀。此外，关于蛋白沉淀剂的选择，一般常用的沉淀剂为甲醇、乙腈，这两种沉淀剂在前人实验当中均具有良好表现，特点在于甲醇沉淀剂的安全性更高，而乙腈的沉淀效果最好[2]。

（2）溶剂萃取法

因为巴比妥类药物具有亲脂性特征，所以其与有机溶液接触之后很容易荣家，同时此类药物当中的内源性干扰物质普遍数据强极性水溶性物质，在这一基础上通过有机溶液是可以对巴比妥类药物进行萃取的。关于容积萃取法的应用方式有二，即液-液萃取法、固相萃取法，其中前者主要在两相之间对药物的物分配系数进行提取，在根据提取结果对不同组分物质进行分离即可，而后者则是在固相基础上进行相同操作，该方式相对简陋，因此现代测定中已经不太常用。另外，在液-液萃取法应用当中要注意两个要点，即萃取时间与二次萃取应用，其中萃取时间需要根据溶液来进行确认，例如当溶液为甲苯时，萃取时间应当控制在15min左右；二次萃取应用中要重视方式方法的选择，这一点根据前人研究了解到，与溶剂萃取法契合度较高的二次萃取法为超声波萃取，该方法可以有效提升萃取效率[3]。

（3）固相萃取法

固相萃取法是一种主要通过柱色谱分离原理来实现迁出了方法，在现代应用当中常用于生物样品条件下。原理上，首先需要采用固定相对生物样品进行吸附处理，可得样品当中的目标物或者干扰物，其次完成后采用常规洗脱分离手段可知实现样品分离，这种方法的优势在于流程较为简单，可以在短时间内多大批量样品进行处理，同时处理完成后的回收率、萃取率都有良好表现，因此被广泛应用。但值得注意的是，固相萃取法虽然流程简单，但实际操作却较为复杂，同时需要大量的有机溶液作为支撑，说明该方法的成本、污染性较高，且在一些特殊条件下，可能出现微量分析物过量损失的问题，例如当非特异性的沉淀反应过量时会导致这一问题，此时固相萃取法的净化效果、检测灵敏度、可靠性都会随之贬低，因此在前处理环节当中，如果条件允许不建议选择这种方法。

2.2 色谱法测定

结合上述前处理方法，在对巴比妥类药物处理完成之后，即可开始色谱法测定，此步骤测定方式较多，主要包括：高效液相色谱法、超高效液相色谱、反相高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用联用技术，下文将对各类方法进行分析。

（1）高效液相色谱法

高效液相色谱法在巴比妥类药物测定当中应用最为常见，其主要利用高压输液泵将样品液流动相输入固定相色谱柱当中，在分离后通过检测仪器获取色谱柱检测结果即可。该方式主要来源于气相色谱法、液相色谱法，利用这两种方法的特点，进行分析可以得到准确结果，且因为不同巴比妥类药物性状不同，这种方式的应用范围十分广泛。例如可以将高效液相色谱法应用于液态巴比妥药物测定当中，即采用Diamonsil TM C18的反相柱作为色谱柱、将醋酸铵-甲醇作为流动相进行测定，结果显示该方法的检出限在1.0μg/mL范围，满足测定要求。

（2）超高效液相色谱

超高效液相色谱是一种脱胎于高效液相色谱法的先进技术，在近几年的巴比妥类药物测定中应用逐渐频繁。介于两种方法的相似性，在原理上两者并没有太多差异，但区别在于超高效液相色谱中采用的固定相为超高柱效细粒径新型固定相，这种固定相的填料粒度较于上述方法更低，因此色谱柱功效提升，据悉可达到20万块/m的理论要求，在实际测定中具有更快的分离速度。例如在苯巴比妥含量测定当中，可以以C18s色谱柱作为固定相，结合高效液相色谱法原理进行分离，整个过程十分短暂，于4min内可将药物中的四种成分完全分离，且标准曲线表现良好，可见该方法具有分离程度高、灵敏度高、测定速度快的优势，有利于测定成本降低。

（3）反相高效液相色谱法

反相高效液相色谱法应用当中，主要以表面为非极性的载体作为固定相、以高极性溶剂作为流动相来进行测定。应用方法上，固定相可选择ODS-18系列色谱柱、流动相可选择甲醇-水，测定当中可以得到准确的线性曲线图，且曲线图线性关系表现良好，同时根据前人研究了解到，该方法的回收率达到了95%以上，可见其具有精度优势。

结合上述三种方法应用可见，各类方法在应用当中互有优劣，因此原则上需要根据实际要求来选择相应方法，但综合对比下，超高效液相色谱的应用性能最为优秀，因此其在准确性、速度、成本上均有优势，因此测定中可以重点考虑该方法的应用。

（4）液相色谱-质谱联用技术

液相色谱-质谱联用技术是一种系统化的测定技术，即首先依照液相色谱-质谱联用的基本原理进行系统设计，系统中至少要包括液相色谱系统、样品导入系统、接口、质量分析器、离子检测器、真空系统和数据处理系统。其次将巴比妥类药物通过样品导入系统导入液相色谱系统当中，后经过接口与质量分析器、离子检测器、真空系统接触，在真空系统当中药物成本将会逐渐分离，分离完成后在质量分析器、离子检测器作用下可得分离成分数据，数据将会被数据处理系统接收，依照运行逻辑将数据对应后展示。这种方法具有较高的自动化表现，应用中更具便捷性优势。

3 结语

综上，本文主要对色谱法在巴比妥类药物含量测定中的应用进行了分析，通过分析可见，巴比妥类药物种类较多，结构、理化性质各异，需要采用相应方法来进行测定；参照测定流程，对色谱法巴比妥类药物测定的前处理、测定步骤中的各类方式进行了分析，了解了各方式原理、功效以及优劣表现，在选择时应当根据实际需求来选定方式。