ROC曲线设置流式细胞术检测HLA-B27的临界值在强直性脊柱炎诊断和鉴别诊断中的应用

张 静 ，董松武 ，孙 峰

(亳州市人民医院a.检验科；b.心内科，安徽亳州236800)

BREWERTON 等人[1]于1937年提出HLA-B27 抗原的表达与强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）的发病高度相关，90%以上AS 患者携带HLA-B27 基因，且不同种族的人群表达阳性率不同，HLA-B27 的检测对于没有明显症状的早期AS的辅助诊断有较高的应用价值。目前我院使用BD公司的流式细胞仪检测HLA-B27，其诊断临界点是以白种人的表达水平建立的，国内较少报道以国人的表达水平建立的临界值，本文将经临床确诊的AS 患者作为研究组，与AS 患者症状相近的类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）患者、骨性关节炎患者（osteoarthritis，OA）、腰椎间盘突出(Lumbar Intervertebral disc Herniation, LIDH)、痛风（gout）患者和健康体检者(healthy controls，HC)合并作为对照组，对其进行HLA-B27 的荧光值检测，分析探讨流式细胞术（flow cytometer，FCM）检测HLA-B27 临界值的设置及对诊断和鉴别诊断AS 的影响。

1 材料与方法

1.1 研究对象 本院 2016年 1月～2019年7月收治的符合诊断要求[2]的AS 患者40 例作为研究组，男性32 例，女性8 例，年龄15 ～72 岁；RA 患者40例，男性4 例，女性36 例，年龄32 ～73 岁；OA 患者22 例，男性3 例，女性19 例，年龄47 ～79 岁；LIDH 等腰痛病患者26 例，男性11 例，女性15 例，年龄26 ～78 岁；痛风患者31 例，男性29 例，女性2 例，年龄18 ～75 岁；健康体检者50 例，男性22 例，女性28 例，年龄13 ～74 岁，此五组合并为对照组。

1.2 仪器和试剂 仪器为BD FACSCalibur 双激光四色分选流式细胞仪，试剂盒为HLA-B27 检测试剂盒（BD 公司)。

1.3 方法 所有研究对象均空腹抽取2ml 静脉血，乙二胺四乙酸二钾抗凝，由检验师按照规定操作程序进行检测并记录结果。

1.4 统计学分析 应用SPSS17.0 统计软件进行数据处理，正态分布检验采用SW 检验，符合正态分布的数据以均值±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，率的比较采用卡方检验，采用ROC 曲线分析检测指标的诊断效能，以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组间HLA-B27的检测荧光值比较 见表1。AS 组和其余各组进行单因素方差分析，各组荧光值比较差异具有统计学意义（F=40.45，P ＜0.05），进一步行两两比较，AS 患者与RA 组、OA 组、LIDH 组和痛风组比较荧光值差异均具有统计学意义（均P ＜0.05），其余各组之间两两比较差异均无统计学意义（P ＞0.05）。

表1 各组检测HLA-B27 荧光值比较

2.2 ROC 曲线分析 见图1。以AS 为研究组，所有非AS 患者合并为对照组，以临床诊断为金标准，做ROC 曲线，评价HLA-B27 诊断AS 的效能，AUC 为0.92。根据Youden 指数确定最佳诊断临界点为151.50。

图1 流式细胞术检测HLA-B27 的ROC 曲线

2.3 不同临界值诊断AS 的效能 原装试剂盒设定荧光强度界值为146，根据Youden 指数确定的诊断临界点为151.50，以两个不同临界值标准计算出的诊断效能详，见表2。

表2 不同临界值诊断AS 的效能

3 讨论

AS 是一种主要累及骶髂关节和脊柱关节、主要与遗传因素有关的病因未明的自身免疫性慢性炎症疾病，目前AS 的诊断标准[2]是以临床表现和影像学检查为主要依据，该病早期症状与LIDH，RA和OA 等相似，有一定的漏诊误诊率，明确诊断时患者病程往往已进入中期阶段[3]，延误早期治疗，故而对疑为AS 的患者进行HLA-B27 抗原检测是很有必要的。

我院检测HLA-B27 采用美国BD 公司的流式细胞仪及配套试剂盒，FCM 检测HLA-B27 抗原的荧光强度与T 淋巴细胞表面HLA-B27 表达水平有关，其表达存在人种和个体差异，而且HLA-B27具有高度多态性，亚型众多，并非所有亚型都与AS 相关[4]，不同地区、民族和人种之间HLA-B27基因亚型分布有差异[5]。我国是一个多民族国家，不同民族间HLA-B27 的基因型与AS 的相关性也有差异，陈亚豪等[6-7]研究表明汉族人和维吾尔族人诊断AS 的临界值有差距，蒙古族和汉族AS 的阳性检出率也不同[8]，因此进口试剂盒所设置的临界值是否对我国AS 的诊断和鉴别诊断有最高的诊断效率有待斟酌。本研究发现，AS 组的荧光检测值、阳性率和所有非AS 组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05），用试剂盒设定的临界值146 作为判断标准，敏感度为90.00%，特异度为91.72%，误诊率为8.28%，漏诊率为10.00%，Youden 指数为0.82，ROC 曲线下面积为0.92；根据Youden 指数确定最佳诊断临界点为151.50，根据新的临界点诊断AS的敏感度为90.00%，特异度为93.49%，漏诊率为10.00%，误诊率为6.51%，Youden 指数为0.83。应用新的临界值诊断的敏感度不变，特异度有所提高，但两者较为接近，差异无统计学意义，说明试剂盒所设定的界值较为可靠，和肖琳琳等[9]人研究结果不一致，肖琳琳[9]等人研究认为试剂盒设定的临界值对于诊断研究组的假阴性率过高，原设定临界值对于在国内的应用价值有待斟酌。在本研究中，由于AS 起病隐匿，采用病例均为经过临床确诊的住院病人，有大量AS 病人是门诊病人，或病例资料不完善而无法采用，是否会导致数据有所偏颇？后续我们会加大研究样本量，加大和风湿免疫科合作，将反应性关节炎、银屑病关节炎等与AS 症状类似的其他脊柱关节病纳入非AS 对照组做更为精确的验证。临床上早期诊断AS 可以降低致残率，在本研究中根据新界值在敏感度不变的前提下提高特异度，对于临床更有指导意义。目前的诊断标准主要根据临床症状和影像学检查结果，巫翠萍等[10]人研究确诊的AS 患者和可疑AS 患者HLA-B27 检测结果与 X 线结果比较，HLA-B27 检测结果与X光片在AS 组时差异无统计学意义，但可疑AS 组HLA-B27 的阳性率明显高于X 线结果，认为在AS的早期诊断中，检测HLA-B27 有着重要的价值，因此若患者有腰骶疼痛等症状，影像学检查阴性，而HLA-B27 阳性，在排除其他引起腰骶部疼痛疾病的情况下，需考虑AS 早期。

我国是一个多民族国家，不同民族遗传背景、地区分布、生活习惯不同，在后续研究中我们会加大样本量，将更多的与AS 症状相近的其他脊柱关节疾病组纳入研究，做更为精确的分析，HLA-B27在疑似AS 患者的早期筛查中有不可替代的作用，应引起医患高度重视。