河北地区丙肝感染患者丙型肝炎病毒基因型分布特征

李雅静，王戌刚，董倩倩，秦永亮，王 鑫

（1.河北医科大学第二医院检验科， 石家庄 050000；2.河北医科大学第一医院心脏大血管外科，石家庄 050000）

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是全球主要的死亡和发病原因之一，据估计，全球约有3%的人口长期感染该病毒[1]。HCV 具有高度的遗传多样性，其特征是基因型的区域变异。HCV 基因型和亚型是抗病毒治疗反应的重要指标，中华医学会肝病学分会和感染病学分会建议在开始抗病毒治疗前应进行HCV 基因分型[2]。即使在不含干扰素的直接抗病毒治疗（direct-acting antiviralagents,DAA），不同的HCV 基因型或亚型对同一DAA 药物的反应也不同，导致不同的耐药现象，因此明确HCV 基因型和亚型是十分必要的。

资料显示，迄今为止，河北地区丙型肝炎病毒基因型分布的文献资料很少，尤其是不同年龄、性别的流行病学和丙型肝炎病毒基因型分布特征。因此，本研究提供了河北地区HCV 基因型分布情况、感染途径、基因亚型与性别、年龄关系的信息，可为进一步研究本地区HCV 流行情况提供依据，也为丙型肝炎的个体化治疗提供指导。

1 材料和方法

1.1 研究对象 选择2016年7月～2017年10月在我院首次确诊为HCV 感染的284 例患者，纳入患者均符合《丙型肝炎防治指南》诊断标准，血清HCV-RNA，HCV 抗体均为阳性。通过询问病史，收集患者的基本信息，如感染途径、手术史、潜在疾病或曾经滥用药物等。

1.2 仪器与试剂 本研究所涉及的主要仪器有COBAS AmpliPrep 核酸提取仪；COBAS TaqMan48实时荧光定量PCR 仪；ABI 3500DX 基因测序仪。使用的主要试剂有COBAS Ampliprep/ COBAS Taqman HCV Quantitative Test，v2.0；丙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒。

1.3 方法

1.3.1 HCV-RNA 定量测定：按照COBAS Ampliprep/ COBAS Taqman HCV Quantitative Test 说明书进行HCV-RNA 定量测定。

1.3.2 HCV 基因分型：按照丙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒说明书进行核酸提取、PCR 扩增、产物纯化、测序PCR，测序产物纯化，将纯化后的测序产物应用ABI 3500DX 基因测序仪进行测序及数据分析。

1.4 统计学分析 采用SPSS25.0 统计软件对数据进行处理，计量资料采用均数±标准差（±s）表示。HCV 基因亚型和病毒载量高低之间的关系比较采用χ2检验；HCV 基因亚型和肝病严重程度之间关系的比较采用秩和检验。我国不同地区HCV 基因型分布比较采用Fisher 确切概率法。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCV 基因型分布情况 见图1。图1 显示了河北地区HCV 基因型构成比。本研究共发现了4 种基因型（1～3 和6）和5 种亚型，未发现混合基因型感染。最常见的亚型是1b 型（n=191，67.25%），其次是2a 型（n=90，31.69%），少数检测到的基因型包括3a 型（n=1，0.35%），3b 型（n=1，0.35%）型和6a 型（n=1，0.35%）。通过询问病史，本研究共收集了3 种感染途径，包括输血（n=38，13.4%）、献血（n=32，11.3%）、手术（n=1，0.4%）。

2.2 HCV 感染者的年龄分布 根据年龄，HCV感染者分为7 个年龄组。图2 所示HCV 感染率随年龄的变化呈现不同的变化，无论是男性还是女性，在50～59 岁年龄组的感染者人数最多（n=108，38.0%），其次是60～69 岁年龄组（n=81，28.5%）。在这两个年龄组中，女性感染者的数量均显著高于男性感染者（P＜0.05）。

图1 河北地区HCV 基因型构成比

图2 不同年龄组和性别的HCV 感染率

2.3 HCV 基因亚型与年龄、性别的关系 见图3。1b 亚型最常见于50～69 岁年龄组的女性患者，占1b型总数的42.4%（79/191）。1b 亚型在20～29 岁年龄组和70-79 岁年龄组的男性患者多于女性，但差异无统计学意义（P＞0.05），且70～79 岁年龄组病例数较少，只有6 例患者。2a 亚型也最常见于50～69岁年龄组的女性患者，占2a型总数的54.4%（49/90），且在50～69 岁年龄组中，女性患者数量多于男性，差异有统计学意义（P＜0.05），而在20～29 岁年龄组和40～49 岁年龄组男女患者数量相似。

图3 不同年龄、性别人群HCV 基因分型分布

2.4 HCV 基因亚型与病毒载量、疾病严重程度关系 对284 例样本进行了HCV 基因分型和HCV病毒载量测定。分析病毒载量、疾病严重程度与HCV 亚型的关系，见表1。HCV-1b，HCV-2a 优势亚型平均病毒载量分别为1.09E+07，1.40E+07IU/ml，两者之间差异无统计学意义（t= -0.566，P=0.572）。HCV-1b，HCV-2a 亚型患者肝病严重程度之间差异无统计学意义（Z=-0.039，P=0.967）。

表1 HCV 基因亚型与病毒载量、疾病严重程度

2.5 河北省与其他地区HCV 基因型分布模式比较见表2。HCV 1 型是我国丙型肝炎病毒最主要的毒株，没有发现HCV 4 型和HCV 5 型。在我国的不同地区，HCV 2，3，6 所占比例存在明显差异。河北省HCV 基因型分布与已报道的我国东北地区变化趋势相似（χ2=1.417，P=0.743）。

表2 中国不同地区HCV 基因型分布（n）

3 讨论

HCV 基因型的当代全球地理分布是复杂的，MESSINA 等[6]对HCV 基因型流行的全球趋势进行调查，发现HCV-1 型是世界上最流行的，包括8 340 万例（46.2%）；基因型3 是全球第二流行的基因型（5 430 万，30.1%）；基因型2，4 和6 占所有病例的22.8%；其余为基因型5（占比＜1%）。由于传播途径的改变和全球旅行的增加，HCV 在我国的地理和遗传多样性也在不断变化[7]。CHEN等[8]对全国28 个省份的HCV 基因型进行调查，结果发现我国南方省份HCV 基因型分布的多样性高于北方省份，在所有北方省份中，HCV 1b 和2a 是两个主要亚型，占总数的86%，而在南方省份中，HCV 3b 和6a 占HCV 的大部分，这些结果可以用独特的地理位置和人口多样化来解释。值得关注的是，HCV 在我国的流行模式正在发生演变。例如，RONG 等[9]跟踪了2004～2007年和2008～2011年中国丙型肝炎病毒基因型流行率的变化，2008～2011年广东省外献血者中6a 亚型的频率从11%显著增加到26.5%，表明HCV 6a 亚型在过去10年中迅速从广东传播到中国其它地区。这一结果在本研究中得到证实，在石家庄地区也发现了3a，3b 和6a 亚型。病毒基因分型有利于控制和预防HCV感染的流行，具有重要的现实意义。河北省位于我国华北地区，交通便利、人口众多、人员迁徙频繁。我们的研究发现，1b 和2a 亚型是河北地区的优势亚型，这与中国不同地区和人群的先前研究一致[10-11]，但是也出现了3a，3b 和6a 亚型。

HCV 基因型/亚型以及治疗期间病毒载量的变化对于指导临床用药十分重要。一般来说，病毒载量越高，肝脏损伤也越严重，临床表现越明显。慢性HCV 感染者的病毒载量与HCV 基因型有关，HCV-1 型患者的HCV RNA 水平高于非1 型患者[12]。然而，其他一些研究发现HCV 基因型与病毒载量之间没有显著相关性[13]。彭雪彬等[14]的研究发现，在中国高病毒载量的患者中，HCV 2a 型比其他亚型更为常见。

而我们的数据表明，HCV-1b，HCV-2a 优势亚型平均病毒载量之间差异无统计学意义（t=-0.566，P=0.572）。这些不同的研究结论可能是区域性基因型分布差异所致。

此外，本研究共收集了3 种感染途径，包括输血（n=38，13.4%）、献血（n=32，11.3%）、手术（n=1，0.4%）。在可收集到的感染途径中，输血和献血占绝大部分，从这部分患者的年龄分析，这些病例大多可归因于90年代的献血污染和血液制品缺少筛查。有偿献血是20 世纪90年代初以前血液传播HCV 感染的重要途径，GAO 等[15]对中国大陆献血员HCV 感染情况进行了荟萃分析，结果发现中国大陆献血者HCV 感染的总患病率为8.68%，华北、华中地区HCV 感染更为严重，尤其是河南、河北。HCV 感染占输血后肝炎的70%以上，是慢性肝病的主要病因之一，通常在感染后20～30年内导致肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌[16]。

本研究描述了河北地区丙型肝炎病毒（HCV）基因型分布情况、感染途径、基因亚型与性别、年龄关系，并与其他省份的HCV 基因型分布模式进行比较，反映了丙型肝炎病毒感染的变化趋势，可为进一步研究本地区丙型肝炎病毒流行情况和制定有针对性的防治策略提供依据。然而，此项研究也存在一定的局限性，如样本量不够大。综上所述，HCV 1 型是河北省HCV 最主要的基因型，其次是HCV 2 型，HCV 3 和6 型占比很少，未发现HCV 4和5 型及亚型混合感染的情况。