血清中microRNA-106b对宫颈癌患者的早期诊断及预后预测价值

高红敏，杨红英，刘 鑫

(1.西安市第四医院妇产科，西安 710004; 2.西安市第九医院妇产科，西安 710000;3.西安大兴医院妇产科,西安 710014)

宫颈癌(cervical cancer, CC)是发病率和死亡率均较高的妇科恶性肿瘤[1]。近年来，年轻女性罹患CC 的人数呈逐年攀升趋势，临床上早期CC主要以手术为主，放化疗为辅，晚期CC 以放疗为主[2-3]。microRNA 是一类长约19～25 nt 的内源小分子非编码RNA，microRNA-106b 在甲状腺癌[4]、视网膜母细胞瘤[5]、胃癌[6]和肾细胞癌[7]等组织中存在异常表达，目前关于microRNA-106b 与CC 的关联报道鲜有，本研究拟分析microRNA-106b 在CC 早期诊断中的价值，旨在为CC 患者的临床诊治提供参考依据，现具体报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2017年9月～2019年11月西安市第四医院妇产科收治的经病理学确诊的CC 患者150 例为研究对象，患者均为女性，年龄23 ～62 岁，平均年龄41.5±3.2 岁；病理类型均为浸润型鳞状细胞癌。手术治疗中留取CC 组织和癌旁正常组织(距病灶2 cm)。本研究经由我院伦理委员会批准。

纳入标准：(1) 根据国际癌症协会推荐的TBS系统及病理性诊断为宫颈鳞状细胞癌者；(2) 患者知情且自愿参加本研究。排除标准：(1) 伴有其他恶性肿瘤者；(2) 妊娠期及哺乳期女性。

1.2 仪器与试剂 TRIzol Reagent 购自美国 Invitrogen 公司，PCR 引物的合成和设计由生工生物工程(上海)股份有限公司完成，PCR 仪为ABI Prism 7900HT 型，Ambion mirVanaTM miRNA 标记试剂盒购自Scien Cell Research Laboratories。

1.3 方法 将组织放入1.5 ml Eppendorf 管中用液氮保存，从液氮中取出Eppendorf 管，使用BioPluverizerTM 冰冻粉碎组织，加入l ml Trizol混匀后，使用MiniBead-Beater-16 匀浆后提取MicroRNA，用1 ml 75ml/dl 乙醇(以焦碳酸二乙酯水配制)洗涤RNA 1次，4℃下离心5 min，移去乙醇，室温下干燥 5 min，55℃～60 ℃条件下溶于焦碳酸二乙酯处理过的无菌水中，取总RNA 2 μl，紫外分光光度计测定microRNA纯度(A260nm/A280nm＞1.8)，并计算其含量。其余总RNA 添加多聚腺苷酸后，再通过Ambion mirVanaTM miRNA 标记试剂盒进行荧光PCR 检测。

1.4 统计学分析 采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计量资料采用均值±标准差(±s)表示，行t 检验，计数资料采用n(%)表示，行χ2检验。P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 microRNA-106b 在CC 组织和癌旁正常组织中的相对表达量 探究microRNA-106b 在CC组织和癌旁正常组织中的相对表达量，结果表明microRNA-106b 在CC 组织中的相对表达量为0.075，显著高于癌旁正常组织中的相对表达量0.003(P=0.0186)。

2.2 不同水平microRNA-106b 与CC 患者临床病理特征间的关系 见表1。根据2.1 的结果，microRNA-106b 高表达79 例，microRNA-106b 低表达71 例。不同水平microRNA-106b 与CC 患者的年龄、肿瘤直径、FIGO 分期无关，与淋巴结转移和分化程度有密切关系(P ＜0.05)。

表1 microRNA-106b 与CC 患者临床病理特征间的关系[n(%)]

2.3 不同水平microRNA-106b 对CC 患者总体生存率的影响 探究不同水平microRNA-106b 对CC患者总体生存率(overall survival, OS)的影响，结果见图1。microRNA-106b 低表达组患者的中位生存时间为70 个月，而microRNA-106b 高表达组患者的中位生存时间为54 个月。microRNA-106b 高表达组患者的OS 显著低于microRNA-106b 低表达组，其差异具有统计学意义(P=0.036)。

图1 不同水平microRNA-106b 对CC 患者总生存率的影响

3 讨论

近年来，伴随着我国社会经济的飞速发展，加之人们生活方式的改变，恶性肿瘤的发病率和死亡率不断攀升，严重威胁着人们的健康。CC 是一种病毒感染性疾病[8]，发病率仅次于乳腺癌，是第二大妇科恶性肿瘤。目前临床上治疗失败的原因主要是局部复发和远处转移，CC 的发生、发展是多基因参与、涉及多步骤的复杂生物学过程[9-10]。microRNA 是一类长约19～25 nt 的内源小分子非编码RNA，microRNA-106b 在甲状腺癌、视网膜母细胞瘤、胃癌和肾细胞癌等组织中存在异常表达，其在肝细胞癌和喉癌中呈显著高表达，发挥促癌作用；而在胶质 瘤和胃癌中呈显著低表达。目前关于microRNA-106b 与CC的关联研究相对较少，本研究拟分析microRNA-106b 在CC 中的表达水平及不同水平microRNA-106b 与CC 患者临床病理特征间的关系，旨在为CC 的临床诊断提供合理参考。

结果显示，相较于癌旁正常组织，microRNA-106b 在CC 中呈显著高表达，提示microRNA-106b 是CC 潜在的生物学标记物。高、低水平的microRNA-106b与CC患者的淋巴结转移和分化程度有密切关系。此外，高水平的microRNA-106bCC 患者的OS 较低，反之亦然，提示microRNA-106b 可预测CC 患者的预后。下一阶段本研究组将继续深入开展microRNA-106b 在CC 中作用机制的有关研究。

综上所述，microRNA-106b 与CC 的发生、发展有密切关系，其对CC 的诊治及预后有关键作用。