卵巢早衰患者卵泡成熟与自身免疫机制、卵巢血流参数关系

谢德文 黎锡波 韦 励 钟树林 吴伟权

广东省东莞市人民医院 (523000)

卵巢早衰(POF)可引起女性生育力不足[1]。确切发病机制仍不清楚[2]。目前诊断标准基于临床症状与血清卵泡刺激素(FSH)水平相结合。经阴道彩色多普勒超声检查可观察卵泡被淋巴细胞和浆细胞浸润，卵泡耗尽或原始卵泡成熟障碍[3]。Treg细胞是一类具有免疫抑制作用的细胞，可维持人体的免疫耐受，避免自身免疫性疾病发生[4]。本研究探讨POF患者自身免疫机制与卵巢血流参数的变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年3月—2018年4月本院就诊的POF患者100例为POF组，另选体检健康且月经周期正常妇女100例为对照组。纳入标准：①POF诊断标准参考《中华妇产科学》；②妇女40岁以前绝经，血清雌激素水平低下，血FSH和黄体生成素(LH)增高，FSH>40IU/L,血泌乳素正常；③内外生殖器、第二性征退化并有更年期综合征的症状。排除标准：①生殖系统肿瘤、感染疾病；②伴有严重的心血管系统疾病；③精神疾病患者、认知功能障碍；④医源性POF患者；⑤对治疗药物严重不良反应。本研究经本院医学伦理委员会批准，研究对象签署知情同意书。

1.2 指标检测方法

检测两组外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、血清干扰素γ(IFN-γ)、卵巢间质动脉峰值流速(PSV)、阻力指数(RI)、卵巢最大平面平均直径(MOD)、窦卵泡数目(AFC)、血清FSH、LH、雌二醇(E2)的变化。在卵泡早期，收集两组对象4ml肝素抗凝全血，酶联免疫吸附试验检测IFN-γ水平。密度梯度离心分离人外周血单核细胞(PBMC)，5μl Pepcp标记的小鼠抗人CD4抗体，5μl PE标记的小鼠抗人CD25抗体和同种型对照抗体在黑暗中4°C 30min,磷酸盐缓冲盐水冲洗后通过流式细胞术测量CD4+T细胞中CD4+CD25+T细胞的百分比。使用ACUSON X150高端彩色多普勒超声诊断仪(上海涵飞医疗器械有限公司)，阴道探头频率4.0～8.0MHz，扇形角120°～240°，测量子宫动脉的收缩峰值流速(PSV)和舒张末期血流速度(EDV)，计算阻力指数(RI)。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组一般情况比较

POF组年龄(31.6±4.6)岁(22～40)岁，病程(3.4±1.4)年(1～7)年，初潮年龄(13.2±1.1)岁。对照组年龄(32.4±4.4)岁(22～40)岁，初潮年龄(13.0±1.0)岁。两组年龄无差异(P>0.05)。

2.2 两组各项指标比较

POF组AFC、E2、MOD测定值均低于对照组，FSH、LH水平高于对照组(均P<0.05)，见表1。

2.3 两组免疫学指标、卵巢血流参数比较

POF组外周血Treg计数、卵巢间质动脉PSV测定值低于对照组，血清IFN-γ及RI高于对照组(均P<0.05)，见表2。

表1 两组各项指标比较

表2 两组免疫学指标、卵巢血流参数变化

2.4 POF组FSH、AFC与免疫学指标、卵巢血流参数变化关系

POF组AFC计数与卵巢间质动脉PSV测定值呈正相关，与RI、IFN-γ呈负相关(P<0.05)；血清FSH与Treg、卵巢间质动脉PSV测定值呈负相关，与RI、IFN-γ呈正相关(P<0.05)。见表3。

表3 各指标间相关性分析

3 讨论

POF患者卵泡数量急剧下降，卵巢雌激素和孕酮分泌减少[1]。临床上，FSH>40 IU/L表明卵巢卵泡数目减少，含量较低[3]。POF患者卵巢功能下降，雌激素分泌减少导致垂体FSH分泌增加，卵巢功能下降[5]。随着卵泡数量的持续减少，卵巢激素的分泌逐渐减少，血清FSH水平逐渐升高，直到卵巢中没有卵泡发育[6]。研究表明[7]，FSH水平的变化早于E2水平的变化，以FSH评价卵巢功能准确度较高。卵巢颗粒细胞、滤泡细胞和卵母细胞间有效信号交换对卵泡生长成熟非常重要[8]。卵巢细胞可通过自分泌—旁分泌方法产生细胞因子，促进卵泡生长和类固醇产生，促进卵泡募集和排卵期间必需的白细胞活化，并参与排卵组织变化和黄体形成[9]。IFN-γ在机体的免疫反应和炎症反应中起重要作用[10]。当机体受到损害时，激活体内炎症反应和免疫反应，CD4+T和CD8+T细胞数量显著增加，增加表达和分泌细胞因子(IFN-γ)数量[11]。

Treg细胞是免疫抑制性淋巴细胞亚群[12]。在维持免疫环境的稳定性和控制自身免疫疾病的发生中起重要作用[13-14]。本研究中，POF组AFC、E2、MOD测定值均低于对照组，FSH、LH高于对照组，表明卵巢缺血和缺氧导致了卵巢间质、纤维组织增生的血管网络形成减少，使血管阻力增加、灌注不足和卵巢萎缩，导致AFC减少。POF组外周血Treg计数、卵巢间质动脉PSV测定值低于对照组，血清IFN-γ、RI高于对照组，提示Treg细胞与卵巢早衰有关，这可能是由自身免疫性疾病引起的 Treg水平降低。此外，Treg水平降低导致了IFN-γ增加，其激活一系列促进B细胞增殖、分化和抗原分泌的细胞因子，诱导自身免疫应答。导致卵巢抗原靶细胞损伤或凋亡以及卵泡闭锁过多，而TGF-β1水平异常也可引起卵泡发育障碍，其共同导致卵巢早衰发生。POF组AFC计数与卵巢间质动脉PSV测定值呈正相关，与RI、IFN-γ呈负相关；血清FSH与Treg、卵巢间质动脉PSV测定值呈负相关，与RI、IFN-γ呈正相关。提示POF患者子宫动脉血流量、血清激素水平和卵巢功能间存在密切关系。

综上所述，POF患者存在明显的免疫紊乱和卵巢间质动脉血流改变，这些因素可能导致了患者生殖激素发生变化。