育龄妇女不同同型半胱氨酸水平与叶酸代谢关键酶基因多态性分布研究

广东省惠州市第二妇幼保健院（516000）梁罕超 胡碧英 许冠杰

出生缺陷一直以来都是影响出生人口质量的主要因素之一，其出现会给家庭和社会带来沉重的负担。流行病学调查显示，我国是出生缺陷高发国家，每年约80万～120万的新生儿存在不同程度的缺陷，严重降低了出生人口质量[1]。因此，必须重视对出生缺陷的研究和分析。至今，出生缺陷的发病原因和机制尚未明确，多数研究认为与生殖道感染、内分泌异常以及外部环境等因素有关[2]。同型半胱氨酸（Hcy）升高和叶酸代谢异常是两个导致出生缺陷的重要因素，已得到医学界的高度重视[3]。但是从现阶段临床关于出生缺陷的因素来看，针对不同Hcy水平与叶酸代谢关键酶基因多态性的分布报道并不多见，而二者的相关性研究可能给出生缺陷的防治和处理提供重大的价值，因此有必要进行深入探究。为此，本研究纳入我院2018年11月～2020年2月收治的200例前来进行体检的育龄妇女视展开分析。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年11月～2020年2月在我院体检的200例育龄妇女进行研究。对全部受试者进行Hcy水平检测，根据Hcy的监测水平分为高Hcy组（≥15μmol/L）和低Hcy组（＜15μmol/L），其中高Hcy组102例，低Hcy组98例。高Hcy组：年龄23～38岁，平均年龄（27.41±1.25）岁；已婚32例，未婚70例。低Hcy组：年龄22～35岁，平均年龄（26.97±1.20）岁；已婚13例，未婚85例。两组各资料经比较，具有均衡性（P＞0.05），可比。

纳入标准：①接受并完成遗传检测、Hcy检测；②精神和认知正常，可配合完成基本调查研究；③熟悉和了解本次研究情况，自愿参与并签署知情同意书。排除标准：①合并严重心肝肾等器质性病变；②伴有心脑血管疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤；③存在全身性感染；④糖尿病、消化系统疾病；⑤临床资料不完善。

附表1 两组MTHFR基因组C677T位点基因型比较

附表2 两组MTRR基因组A66G位点基因型比较

1.2 方法

1.2.1 Hcy水平检测 ①标本采集：于清晨空腹状态下，采集受试者肘静脉血5ml，保存于黄色凝胶管中。采用德国HERMLE公司A206A台式医用离心机进行离心处理，3000r/min，持续10min，处理后静置15min，分离上层血清，-30℃保存。②检测操作：采用全自动生化仪（雅培C1600型）检测，试剂盒购自上海科华生物试剂厂，检测方法为双试剂循环酶法。检测时严格按照试剂盒说明操作，确保检测的质量。③参考范围：≤5μmol/L过低，5～15μmol/L正常，≥15μmol/L偏高。

1.2.2 基因型的检测 对所有受检者空腹抽取外周静脉血5ml，使用深圳泰乐德医疗有限公司的亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C/T检测试剂盒（PCR-荧光探针法）提取核酸。检测时根据试剂盒说明操作，使用SLAN-96S荧光定量PCR仪进行检测。对于基因分型，采用连接酶检测反应（LDR）进行；针对所获取到的数据信息，采用Genemapper软件分析。

1.3 观察指标 比较H-W遗传平衡情况，观察两组叶酸代谢关键酶各基因点位基因型频率分布，并进行比较分析。

1.4 统计学分析 采用SPSS21.0软件处理数据。计量资料采用（±s）表示，行t检验；计数资料采用n（%）表示，行X2检验。P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组H-W遗传平衡情况的比较 在H-W遗传平衡结果方面，两组育龄妇女相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。由此可以看出，各位点基因型频率分布差异不显著，表明了受试对象具有群体代表性，因此可作为研究的对象。

2.2 两组MTHFR基因组C677T位点基因型 高Hcy组C677T基因组TT占比高于低Hcy组，CC占比低于低Hcy组，差异有统计学意义（P＜0.05）。如附表1所示。

2.3 两组MTRR基因组A66G位点基因型 高Hcy组A66G基因组AG占比高于低Hcy组，AA占比低于低Hcy组，差异有统计学意义（P＜0.05）。详情见附表2。

3 讨论

叶酸是碳单位载体之一，对机体各组织功能的正常运行起着关键性的作用，常见的如甘氨酸、丝氨酸以及Hcy等，另外在DNA以及血红蛋白的合成过程中也扮演着重要的角色[4]。研究发现[5]，叶酸代谢对Hcy的影响，主要是由各关键酶实现，如MTHFR、MTRR等，在这一过程中，MTHFR、MTRR等关键酶参与到Hcy向蛋氨酸转化以及DNA合成的过程中，引起代谢变化，进而实现对机体叶酸代谢网络的干扰，引起相关指标的变化。Hcy是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物，可能是动脉粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子[6]。正常情况下[4]，Hcy水平介于5～15μmol/L范围内，异常状态下其水平可能升高，进而严重影响血管增殖，相应的修复功能也出现障碍。

研究发现[7]，叶酸代谢相关酶在体内Hcy水平的维持过程中作用显著，具体可以从以下两个关键酶体现：①MTHFR酶，对Hcy催化甲基化生成met有积极的作用，有利于Hcy水平在体内维持平稳状态。MTHFR酶中，主要的基因位点为C677T，其在不良妊娠中受到高度的关注。②MTRR酶，是met合成酶的辅助因子，对于Hcy水平的维持意义重大，特别是A66G基因位点可引起Hcy水平的明显变化。目前，叶酸代谢关键酶主要集中于基因多态性研究，但其与高Hcy水平两者的关系的研究却较少。本研究针对育龄妇女不同Hcy水平与叶酸代谢关键酶基因多态性分布进行研究，结果发现两组MTHFR基因组C677T位点基因型、MTRR基因组A66G位点基因型分布均存在显著的差异（P＜0.05），表明了不同Hcy水平与叶酸代谢关键酶基因多态性之间的关系，从而间接体现了叶酸代谢关键基因位点对Hcy水平的影响。

综上所述，育龄妇女不同Hcy水平与叶酸代谢关键酶基因多态性分布存在一定的差异，高Hcy水平极有可能引起高风险基因突变，因此需加强对Hcy水平的定期检测，以为预防出生缺陷提供有效的参考，提高出生人口的质量和水平。