慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者血清25(OH)D和Tregs的表达水平及临床意义

安丽，闫娟，张杰，拓明祥，田青，杨红丽

延安市人民医院耳鼻咽喉头颈外科，陕西 延安 716000

慢性鼻窦炎伴有鼻息肉是临床鼻科常见慢性炎症性疾病，患病率逐年递增且趋于低龄化，已成为影响人类生活质量的全球性健康问题[1]。药物或手术治疗是临床治疗慢性鼻窦炎伴有鼻息肉的常用方法，但有20%的患者治疗后效果不佳且在短时间内复发，导致病情迁延不愈[2]。尽管临床对慢性鼻窦炎伴有鼻息肉进行了大量研究，但至今对其发病机制仍尚未明确。有学者认为环境、微生物、遗传或免疫应答缺陷等因素与慢性鼻窦炎伴有鼻息肉的发生有关[3]。研究指出，免疫反应参与了慢性鼻窦炎伴鼻息肉的发生及发展，但关于其炎性反应对慢性鼻窦炎伴有鼻息肉的发病作用及对病情进展的影响仍有诸多不明[4]。调节性T 细胞(Tregs)为自身免疫反应的T 细胞亚群，被认为是慢性鼻窦炎伴有鼻息肉的危险因素[5]。维生素D属于固醇类脂溶性维生素，属人体免疫调节因子，血清25(OH)D 是其主要表现形式，并间接对Tregs 生产影响，调节慢性鼻窦炎伴有鼻息肉的发生及发展[6]。对此，本研究主要分析了慢性鼻窦炎伴有鼻息肉患者的血清25(OH)D、Tregs及相关细胞因子表达水平与病情变化的关系，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018 年11 月至2019 年12月延安市人民医院耳鼻咽喉头颈外科收治的80 例慢性鼻头炎伴鼻息肉患者作为观察组，同期选择不伴有鼻息肉慢性鼻窦炎患者80 例作为观察组1。纳入标准：①符合《耳鼻咽喉·头颈外科疾病诊疗指南》[7]中相关诊断标准；②病程＞12 周，且未合并其他免疫性疾病。排除标准：①合并糖尿病、高血压等慢性疾病；②肝、肾、心功能严重障碍或合并恶性肿瘤者；③合并哮喘、变异性鼻炎等变态反应性疾病；④近1个月内有接受激素、抗生素治疗；⑤合并严重心脑血管疾病者；⑥既往有代谢紊乱疾病史；⑦阿司匹林耐受不良者。观察组中男性 48 例，女性 32 例；年龄 18～65 岁，平均(41.65±7.52)岁；体质量42～70 kg，平均(55.13±3.68)kg。观察组1中男性47例，女性33例；年龄18～65岁，平均(41.50±7.43)岁；体质量42～70 kg，平均(54.98±3.70)kg。另选取健康体检者80 例作为对照组，其中男性41例，女性 39 例；年龄 18～64 岁，平均(41.99±7.31)岁；体质量42～69 kg，平均(54.88±3.69)kg。三组受检者性别、年龄和体质量比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有入组者均知晓本研究并签署知情同意书。

1.2 方法 (1)采集三组受检者空腹外周静脉血10 mL，常温静置10 min 后，给予患者离心处理(3 000 r/min，离心半径5 cm)15 min，分离上清液保存于-45℃的冰箱中待测。采用酶联免疫吸附法(生产厂家：武汉兴华生物科技有限公司)检测血清中25(OH)D、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-35(IL-35)、转化生长因子β (TGF-β)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平；取出残留液体加入稀释缓冲并充分摇匀，离心弃上层清液，采用Foxp3流式细胞仪(生产厂家：美国eBioscience公司)检测Tregs水平。25(OH)D评价方法：依据《临床内分泌学与新陈代谢》[8]进行评定，以25(OH)D＜20 ng/mL 定义为维生素 D 缺乏。(2)鼻窦CT检查：参考点与硬腭垂直，前者为鼻骨，后者至蝶窦后壁，层厚2 mm，间距5 mm，窗技术2 000/200 Hu。(3)鼻窦CT评分：依据左侧、右侧，分析每侧分上颌窦、额窦、蝶窦、前、后组筛窦，每侧12分，总分0～24分。

1.3 观察指标 比较三组受检者的血清25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10、TNF-α、IL-1β水平，并分析上述指标与疾病的相关性。

1.4 统计学方法 应用SPSS20.0 统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差()表示，多组均数比较采用方差分析，两两比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，相关性采用Pearson 相关分析，均以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组受检者的25(OH)D、Tregs 及相关因子比较 观察组患者的25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10明显低于观察组1和对照组，而TNF-α、IL-1β水平则明显高于观察组1 和对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 三组受检者25(OH)D及Tregs及相关因子比较()

表1 三组受检者25(OH)D及Tregs及相关因子比较()

注：与对照组比较，aP＜0.05；与观察组1比较，bP＜0.05。

组别观察组观察组1对照组F值P值例数80 80 80 25(OH)D(ng/mL)14.23±3.12ab 17.15±2.14a 21.56±3.24 131.721 0.001 IL-1β(ng/mL)6.13±1.12ab 4.23±0.65a 3.12±0.37 306.591 0.001 TGF-β(ng/mL)78.12±5.13ab 84.12±6.11a 89.13±6.11 72.220 0.001 IL-35(ng/mL)55.12±3.12ab 59.18±4.52a 62.10±6.23 42.761 0.001 IL-10(ng/mL)15.32±3.18ab 18.12±4.18a 20.13±4.25 30.682 0.001 TNF-α(ng/mL)21.46±5.12ab 18.31±3.66a 14.12±2.99 67.031 0.001 Tregs(%)5.31±1.12ab 6.58±1.74a 7.85±1.51 58.992 0.000 1

2.2 观察组不同血清25(OH)D 水平患者的外周血Tregs、细胞因子比较 血清25(OH)D＜20 ng/mL 患者的Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10 水平明显低于血清25(OH)D≥20 ng/mL 患者，而IL-1β、TNF-α则明显高于血清25(OH)D≥20 ng/mL 患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 观察组不同血清25(OH)D水平患者的外周血Tregs、细胞因子比较()

表2 观察组不同血清25(OH)D水平患者的外周血Tregs、细胞因子比较()

血清25(OH)D＜20 ng/mL≥20 ng/mL t值P值例数60 20 Tregs(%)4.52±0.78 5.62±0.98 7.855＜0.05 IL-1β(ng/mL)6.12±1.52 4.13±1.12 9.569＜0.05 TGF-β(ng/mL)65.13±5.11 78.13±6.23 14.430＜0.05 IL-35(ng/mL)52.13±7.02 57.51±6.55 5.011＜0.05 IL-10(ng/mL)12.52±2.16 16.79±2.52 11.264＜0.05 TNF-α(ng/mL)23.12±3.18 15.56±2.11 17.718＜0.05

2.3 三组受检者的鼻窦CT评分和鼻内镜评分比较 观察组患者的鼻窦CT 评分、鼻内镜评分明显高于观察组1 和对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 三组受检者鼻窦CT评分和鼻内镜评分比较(，分)

表3 三组受检者鼻窦CT评分和鼻内镜评分比较(，分)

注：与对照组比较，aP＜0.05；与观察组1比较，bP＜0.05。

组别鼻内镜评分例数 鼻窦CT评分观察组观察组l对照组F值P值6.18±1.21ab 4.28±0.78a 2.01±0.35 480.971 0.001 80 80 80 7.85±1.25ab 5.10±0.87a 2.57±0.52 646.261 0.001

2.4 相关性分析 Pearson 相关性分析显示，血清25(OH)D与鼻内镜评分、CT评分呈负相关(r值分别为0.457、0.408，P值＜0.05)，Tregs与鼻内镜评分、CT评分呈负相关(r值分别为0.371、0.529，P值＜0.05)。

3 讨论

慢性鼻窦炎伴有鼻息肉具有较高的发病率、复发率，严重影响患者的生活质量，且直到目前为止临床尚未阐明其具体发病原因[9]。相关资料表明，炎性反应相关的细胞因子贯穿慢性鼻窦炎伴鼻息肉疾病的发生的整个过程，但是对于各个因子之间相相互作用的具体情况及关系尚不明确[10]。因此，相关细胞因子在慢性鼻窦炎伴有鼻息肉的病理生理学机制中日益获得临床重视。

Tregs是一种具有免疫调节作用的细胞因子，其免疫调节主要是通过表达的特异性转录因子、细胞接触及分泌IL-10、TGF-β细胞来体现[11]。资料表明，自然Tregs分泌具有抗炎作用，如IL-35、TGF-β等，TGF-β主要是通过趋化并募集单核细胞发挥抗炎及抑制免疫功能的作用[12]。IL-10具有降低炎性因子合成的作用，其主要是通过抑制细胞增殖而发挥作用，如TNF-α、IL-1β等，进而延缓病情进展[13]。研究发现，在慢性鼻窦炎伴有鼻息肉患者中，其鼻息肉组织可能存在局部免疫激活现象，当鼻黏膜受到刺激时(如微生物病原菌或炎性因子)，Tregs 表达水平会快速减少，从而导致IL-35、TGF-β及IL-10 的表达水平在短时间内快速下降，从而刺激T 细胞增殖、活化，增加局部免疫炎症反应[14-15]。一旦机体组织内的抗炎反应处于弱炎症反应状态时，可诱导免疫炎症反应处于恶性循环状态，从而诱导慢性鼻窦炎伴有鼻息肉发生。因此认为Tregs表达水平下降可导致炎症反应持续，是诱导慢性鼻窦炎伴有鼻息肉发生的危险因素之一。

维生素属于人体组织中主要且重要的营养元素之一，不仅对免疫系统及Tregs 具有调节作用，同时对天然免疫、获得性免疫均具有调节作用[16]。资料表明，维生素D 在人体中的存在方式以维生素D2、维生素D3体现，而维生素D3经肝脏被羟化，从而形成25(OH)D，即维生素D的主要表现形式，被认为是评估人体维生素营养状态的敏感性指标[17]。研究显示，大多数慢性鼻窦炎伴有鼻息肉患者均存在25(OH)D 缺乏现象，因此认为25(OH)D与慢性鼻窦炎伴有鼻息肉的发生具有密切关系[18]。研究表明，慢性鼻窦炎伴有鼻息肉患者的血清25(OH)D 表达水平明显低于健康对照组，且随着病情加重，患者的血清25(OH)D 表达水平则随之降低[19]。本研究表明，慢性鼻窦炎伴有鼻息肉患者的血清 25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10表达水平明显低于慢性鼻窦炎不伴有鼻息肉患者及健康体检者，而TNF-α、IL-1β水平高于慢性鼻窦炎不伴有鼻息肉患者及健康体检者。由此可见，血清25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10、TNF-α、IL-1β均参与了慢性鼻窦炎伴鼻息肉的发生及发展，临床应密切监测其表达水平。

CT评分、鼻内镜评分是目前国内用于评估慢性鼻窦炎伴有鼻息肉嗅觉功能的有效方法，且二者具有较好的操作性及可重复性。本结果表明慢性鼻窦炎伴有鼻息肉患者鼻窦CT评分、鼻内镜评分均高于慢性鼻窦炎不伴有鼻息肉和健康对照者；慢性鼻窦炎伴有鼻息肉患者的血清25(OH)D水平、Tregs与CT评分、鼻内镜评分相关，可反映鼻息肉病变严重程度；血清25(OH)D、Tregs、与鼻内镜评分、CT评分呈负相关。但本研究所选取的样本量较少，且为对照试验，并未对研究因素施加人为干预，对于结果的论证强度较薄弱。

综上所述，慢性鼻窦炎伴有鼻息肉患者的血清25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10 水平明显升高，而IL-1β、TNF-α显著降低，其含量变化与患者是否合并鼻息肉相关，可为诊断慢性鼻窦炎伴有鼻息肉提供指导。