青蛤活性物质的研究现状

牛红鑫，李 伟， 佟长青

（大连海洋大学 食品科学与工程学院，辽宁大连 116023）

0 引言

青蛤（Cyclina sinensis） 是我国沿海地区常见的养殖贝类[1]。青蛤的营养价值较高，含有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物、糖分、无机元素等[2]。 《本草纲目》 中记载的蛤类相关的药品有海蛤、文蛤、蛤蜊，其中海蛤是指所有的蛤类，主治咳逆上气、喘息烦满、胸痛寒热、利膀胱大小肠、下小便、化痰饮等[3]。从青蛤中提取的活性物质具有促进免疫应答、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、刺激酵母细胞增殖等作用。就青蛤活性物质的国内外研究进展进行了系统综述，对青蛤后续研究进行了展望，以期为青蛤的进一步开发利用提供依据。

1 青蛤多糖

青蛤中含有大量多糖类活性物质。多糖的提取方式有多种，不同提取方式提取的青蛤多糖结构不同，因而其生物活性也不同。利用水提法、酸碱法和酶解法提取的青蛤多糖均有报道。水提法可以与超声波、微波等方法结合。水提法操作简单方便，被广泛应用于多糖提取。水提法是以蒸馏水为提取液，在一定的提取温度、提取时间、料液比和提取次数下进行提取[4]。蒋长兴[5]利用水提法提取了青蛤多糖， 并利用DEAE- 纤维素柱层析、 Sephadex G-100 凝胶柱层析进行分离纯化，获得了由木糖、葡萄糖组成的青蛤多糖CSPS-1，由葡萄糖组成的CSPS-2 和鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的CSPS-3。郭雷等人[6]采用单因素试验和正交试验设计优化提取工艺提取了青蛤多糖，经脱蛋白后具有较好的清除自由基活性。胡聪聪等人[7]通过改变加水量及加酸量研究了对青蛤多糖提取率的影响，并对获得的青蛤多糖进行了对前列腺癌细胞抑制作用的研究，发现青蛤多糖显著抑制前列腺癌细胞，半数抑制率为4.58 mg/mL。Jiang C 等人[8]研究了青蛤多糖CSPS-3 的抗氧化活性和抑制人胃癌BGC-823 细胞的作用，发现青蛤多糖CSPS-3 具有较强的抗氧化活性和较强的抑制人胃癌BGC-823 细胞的作用。蛤类多糖提取工艺成熟，其生物活性清楚，适合于大规模生产制备，是保健食品及药品的潜在来源。

2 青蛤多肽化合物

2.1 青蛤活性肽

闫海强等人[9]利用胰蛋白酶对青蛤肉进行酶解，通过超滤及G25 分离纯化，获得具有显著抑制PC-3前列腺癌细胞活性的组分。赵莎莎等人[10]利用碱性蛋白酶进行青蛤内脏酶解获得了青蛤多肽，该肽的分子量分布在15～25 kDa，具有较好的清除DPPH 自由基、超氧自由基的能力，对羟自由基诱导损伤的pBR322DNA 具有保护作用。史文军等人[11]利用木瓜蛋白酶酶解青蛤边下脚料，以水解率和DPPH 自由基清除率为指标，通过单因素试验和正交试验获得了酶解青蛤边下脚料的最佳工艺，获得的青蛤肽溶液1.5 mL 的DPPH 自由基清除率达74.62%。罗李王等人[12]利用胰蛋白酶酶解青蛤肉，通过正交试验优化酶解工艺，筛选出具有ACE 抑制作用的青蛤肽，抑制率为36.8%。叶盛旺等人[13]利用胃蛋白酶酶解青蛤肉，以小鼠巨噬细胞RAW264.7 相对增殖率为指标获得了最佳酶解工艺，小鼠巨噬细胞RAW264.7 相对增殖率达76.15%。张亚茹等人[14]进一步通过超滤、凝胶层析和HPLC 等研究了青蛤多肽的制备工艺，通过MTT 法筛选出对前列腺癌DU-145 细胞的抑制活性的青蛤多肽（Ile-Leu-Tyr-Met-Pro），青蛤多肽能诱导DU-145 细胞凋亡。刘欣欣等人[15]利用构建的SMART-cDNA 文库及高通量测序的方法，获得了Macin 家族的青蛤抗菌肽基因全长序列，并利用荧光定量PCR 分析了其在青蛤各组织中的表达情况，发现在青蛤外套膜中抗菌肽表达水平最高。赵震等人[16]在重组毕赤酵母中表达了青蛤Mytimacin 抗菌肽，该重组蛋白对金黄色葡萄球菌（Staphylocaccus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli） 和副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus） 有明显的抑制作用。由此可见，青蛤中肽类活性物质的来源及其丰富。

2.2 青蛤蛋白质

青蛤蛋白质是分子量较大的肽类物质。吕达等人[17]研究了青蛤金属硫蛋白及硫氧还蛋白的基因表达与克隆，发现Cd2+能够诱导青蛤金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因的表达的时序性升高。李子牛等人[18]分析了盐度对青蛤超氧化物歧化酶（SOD） 和过氧化氢酶（CAT） 的影响，发现在盐度胁迫下这2 种酶的含量波动性较大。对于青蛤这类活性物质的研究，有助于了解青蛤的生理状态及免疫防御状态，为青蛤养殖提供基础数据。

2.3 青蛤凝集素

凝集素是一类具有多价糖结合特性的糖蛋白，具有多种多样的生理活性。从青蛤血淋巴中分离出了一种分子量为72 kDa 的N- 乙酰- 半乳糖胺/ 甘露糖特异性凝集素（CSL）[19]。CSL 具有凝集酵母，刺激酵母生长及产生乙醇增加的作用[19]。Liu S 等人[20]进一步利用非标记定量蛋白质组技术研究了CSL对酵母生长的影响，发现在CSL 作用下酵母的己糖激酶、甘油醛-3- 磷酸脱氢酶、烯醇酶表达上调，二氢硫辛酰胺脱氢酶及乙醛脱氢酶下调，这表明CSL 通过改变酵母的代谢途径使其生长并产生乙醇增加。为了深入研究CSL 与酵母的相互作用，刘帅等人[21]研究了CSL 与酵母细胞壁肽聚糖的相互作用，发现CSL 与酵母细胞壁肽聚糖的相互作用具有浓度依赖性，而且两者的结合可以被N- 乙酰- 半乳糖胺和甘露糖抑制，同时CSL 导致了酵母的细胞壁发生变化。佟长青等人[22]通过滤纸片法研究了CSL 的抑菌活性，利用呼吸抑制作用深入研究表明，CSL通过抑制EMP 途径来抑制大肠杆菌和产气荚膜菌，通过抑制HMP 途径来抑制枯草芽孢杆菌，并且CSL能够抑制大肠杆菌、产气荚膜菌和枯草芽孢杆菌的DNA、RNA 及蛋白的合成。

3 结语

青蛤作为养殖贝类，具有资源丰富的优势。青蛤中含有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物、糖分、无机元素等，具有较广阔的开发前景。目前，对青蛤中含有多糖、抗菌肽、凝集素等活性物质研究较多，对其中所含有的小分子活性物质，如核苷酸、牛磺酸、脂肪酸、甾体类活性物质研究也较少。因此，对于青蛤研究的广度和深度都有待于扩展，对青蛤活性物质的深入研究，将有利于促进青蛤的下游产业链的延伸，使其在更广阔的领域得到应用。