1%鸡红细胞悬液配制注意事项

2020-12-16赵明娟崔鸿博刘乾

中国畜禽种业 2020年7期

赵明娟崔鸿博刘乾

（北京市怀柔区动物疫病预防控制中心 101400）

血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验是新城疫和高致病性禽流感诊断技术之一[1，2]，也是新城疫和高致病性禽流感免疫抗体检测的重要方法。1%鸡红细胞悬液是该项试验中的重要试剂之一，准确配制是保证试验结果正确的重要因素。笔者通过多年临床经验总结了配制该试剂各个环节需要注意的内容，希望能为从业人员提供参考，不足之处欢迎批评指正。

1 采集血液

根据国标[1，2]要求，需要采集至少3 只SPF 或无禽流感和新城疫抗体的非免疫鸡的抗凝血。实际操作中也可采集1 只符合条件的公鸡血液。每5ml 的血液能获得约2ml 的红细胞。一般采集公鸡翅静脉血，一人保定公鸡，一人用5ml 一次性注射器采集血液。采血前需用酒精棉球为采集部位消毒，同时可以起到湿润羽毛，起暴露血管的作用，便于采血者操作。

2 抗凝处理

2.1 阿氏液处理

将采集的血液与阿氏液以1：1 的比例混合，轻轻地充分摇匀，在4℃环境下可保存两周。阿氏液的量一定要大于血液量，否则容易造成血液凝固，有结块，影响血球悬液的制备。实际工作中，若需要的量较小，可将阿氏液放于15ml 或50ml 扣盖离心管中，再将采集的血液沿管壁缓缓注入与其混合。混匀时切忌剧烈震荡，避免红细胞破裂。

2.2 1：9 的枸橼酸钠真空贮血管处理

周志民等[3]通过试验证明，采用1：9 的枸橼酸钠真空贮血管可以替代阿氏液。具体做法是将采集的符合要求的公鸡血液直接注入抗凝管中，每管不超过2ml，轻轻上下摇动混匀。笔者认为，此种方法适合少量制备红细胞悬液，操作简单方便，若大量制备则需要多个抗凝管，反而增加了操作难度。

2.3 玻璃球抗凝处理

将预计采血量10 倍的0.9%生理盐水或PBS 置于玻璃三角锥形瓶中，加入洗涤干净的实心透明玻璃珠，以铺满瓶底为宜。采集鸡血后，沿瓶壁缓缓注入三角瓶，同时朝一个方向快速轻轻摇动，摇动5～10min，直至溶液表面出现泡沫，血液中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，完成抗凝处理。

3 洗涤红细胞

为避免试验误差，洗涤红细胞所用的溶液应与后续开展血凝和血凝抑制试验所用的溶液一致。即使用0.9%生理盐水洗涤红细胞，则HI 和HA 试验也需要用0.9%生理盐水；使用PBS洗涤红细胞，HI 和HA 试验也要用PBS。

将抗凝处理后的血液移至离心管中进行离心。离心要求2000 转/min，每次离心5min，离心2～3 次，具体以离心后上清呈无色透明为准。每次离心后，用移液器弃去上清及白细胞，可将多个离心管中的红细胞向一个离心管中合并，便于最后准确吸取红细胞。每次洗涤重新加入洗涤液后，可用拇指垫一次性塑料薄膜轻轻上下颠倒混匀，保证充分洗涤。切忌剧烈摇晃，易导致红细胞破裂。洗涤2～3 次后，若上清清亮，可最后一次离心7min，去掉上清，准确量取红细胞制备悬液。

4 制备1%红细胞悬液

为便于操作，可将提前量好99ml 生理盐水或PBS 加入准备好的容器中，再用一次性移液器吸取1ml 洗涤好的红细胞加入其中。吸去红细胞时要把移液器吸头插入离心管底部缓慢吸取，避免由于吸取速度过快导致气体进入，造成误差。量取的红细胞加入溶液后，要将吸头在溶液中反复吹吸若干次，将残留在吸头内壁的红细胞洗入溶液。若红细胞量不足1ml，则按照比例量取溶液配制。