一例猪圆环病毒2 型与猪伪狂犬病毒混染实验室诊断

尧国民 王湘 白玲 侯强红

（怀化职业技术学院 418000）

猪圆环病毒2 型（PCV2）是引发仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾病综合征及母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一[1]。伪狂犬病毒（PRV）对我国养猪业发展影响巨大，其感染不同发育阶段猪群出现临床症状有所差异，其中繁殖母猪出现流产、死胎等，种公猪出现睾丸炎、精子活力差等，仔猪出现腹泻、呕吐和神经症状等，而育肥猪感染该病主要表现为呼吸道症状[2-3]。怀化市某散养场中育肥猪群近期出现较严重的皮炎综合征，且出现症状较轻的呼吸综合征，经过实验室诊断结果，确诊为其主要由PCV2 和PRV 混合感染所致，经过治疗后疫病得到有效控制。

1 发病猪场及临床症状

湖南怀化某散养户饲养育肥猪30 余头，未对猪群免疫接种PCV2、PRV、蓝耳病毒等常见传染病疫苗，其饲养方式为从外地购买保育猪或断奶仔猪育肥，非自繁自养模式。2019 年10 月初，该场部分猪群陆续出现咳嗽、精神沉郁、体温升高、采食量下降等临床症状，发病期间养殖户对发病猪群使用不同种类抗生素，但疫情未见好转。待到中旬，猪群发病症状严重，发病猪群皮肤表现出现大小不一红色斑块，但无瘙痒症状，虽然未出现猪群死亡现象，但育肥效果很差。

2 实验室诊断

由于发病猪群未死亡，无法对其进行病理变化剖检，遂采集发病明显猪群静脉血5 头份，刮取红色斑块等病变明显部位组织样品和新鲜粪便样品各5 份，适当处理后带回怀化职业技术学院病原检测实验室进行实验室诊断。

2.1 ELISA 检测结果

静脉血液样品于室温静置4～6h 后吸取上清入洁净离心管内，将离心管以低速（2500 rpm）离心10min，吸取上清保存于洁净离心管内。根据武汉科前生物制品有限公司生产的伪狂犬病毒（gE 蛋白）、猪圆环病毒2 型、猪链球菌2 型、猪蓝耳病毒（PRRSV）血清抗体ELISA 诊断试剂盒提供说明书分别对5份血清样品进行检测，其结果显示：以上5 份样品均为PRV 野毒和PCV2 抗体阳性，但猪链球菌2 型和PRRSV 抗体均为阴性。

2.2 分子生物技术检测结果

将样品处理后，分别采用组织DNA 提取试剂盒和酚氯仿法对10 份样品（组织样品和粪便样品各5 份）进行基因组DNA 和RNA 提取，其后按照逆转录试剂盒说明对基因组RNA反转录为cDNA。根据实验室提供的PCV2-Cap 基因、PRV-gE基因和PRRSV-N 基因引物分别对以上病原进行PCR/RT-PCR检测。其检测体系为20ul：10ul 2×easy taq mix、上下游引物各1.0ul（10umol/l）、基因组模板2.0ul 和双蒸水6ul；扩增条件均为94℃5min；94℃30s、56℃30s、72℃30s，共30 个循环，72℃10min。反应结束后，取5ulPCR 产物进行凝胶电泳，观察检测结果。结果显示：10 份样品中检测出PCV2、PRV 和PRRSV 阳性样品分别为7 份、3 份和0 份，提示该猪场所发生的疫情主要是由PCV2 和PRV 混合感染引起。

3 紧急措施

对全场进行卫生打扫，同时加强消毒频率；对该场所有猪群免疫接种伪狂犬病基因缺失疫苗和猪圆环弱毒疫苗；在饲料中添加适量恩诺沙星和黄芪多糖，防止继发感染，同时提高猪群免疫力；对部分发病严重猪群进行对症治疗，如降温与止咳等。经过积极治疗，发病猪群逐渐健康，猪群的育肥效果有较大提高。

4 讨论

本次案例中由于育肥猪仅出现皮炎及咳嗽等症状，而且由于无法对猪群解剖进行病理变化观察，只能通过实验室诊断方法对病原进行检测。由于养殖户对猪群进行抗生素治疗，但发病情况未见好转，所以我们初步判定细菌感染几率较小，可能是病毒性疾病导致疫病发生。为了提高结果可靠性，采用ELISA 检测技术对血清抗体进行检测，同时采集病变组织与粪便样品进行病原检测。实验室检测结果发现猪群发病主要原因是PCV2 和PRV 混合感染所致，育肥猪感染PCV2 后可出现较为严重的皮炎肾病综合征，同时免疫力下降，容易继发性感染其它病原，但死亡率较低；育肥猪感染PRV 后不表现明显临床症状，可出现呼吸道症状，但可长期带毒，感染其他健康猪群，同时导致育肥猪料肉比升高，给养殖户带来巨大的经济损失。对于病毒性疫病的防控，主要依靠疫苗免疫接种和提高猪群饲养管理水平为主，平时的血清学监测也是十分必要的。