血清IL-2、IL-10及IL-32 水平与梅毒RPR滴度的相关性分析

张一琳　杨震

[摘要] 目的 探讨血清IL-2、IL-10及IL-32 水平与梅毒RPR滴度的相关性分析。 方法 方便选取2018年11月—2019年6月该院妇科门诊及男科門诊收治的首次确诊梅毒且未经治疗干预的梅毒患者110例，根据梅毒滴度水平分为高滴度组和低滴度组，各55例。同期收集来该院进行体检的健康职工志愿者60名。检测各组患者血清IL-2、IL-10及IL-32水平，比较和分析其水平与梅毒RPR滴度的相关性。 结果 高滴度组和低滴度组梅毒患者血清IL-2、IL-10、IL-32水平均明显高于正常对照组 （t高滴度组=13.561、15.267、18.220，P<0.05;t低滴度组=7.123、8.596、9.651，P<0.05）;高滴度组患者血清IL-2、IL-10、IL-32水平亦明显高于低滴度组（t=10.261、11.787、12.872，P<0.05）;IL-2、IL-10、IL-32在梅毒患者和正常人群中的表达水平进行ROC曲线分析，IL-2：AUC=0.967，诊断灵敏度为92.3%，特异度为88.6%;IL-10：AUC=0.925，灵敏度为83.6%，特异度为87.2%;IL-32：AUC=0.767，灵敏度为70.5%，特异度为74.1%。 结论 梅毒患者具有较高的血清IL-2、IL-10及IL-32 水平，尤以高滴度患者的血清水平更高，提示血清水平与滴度存在正相关性，可用于梅毒的诊断。

[关键词] IL-2;IL-10;IL-32;梅毒RPR滴度;相关性分析

[中图分类号] R4          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）10（a）-0020-04

Correlation Analysis of Serum IL-2， IL-10 and IL-32 Levels and Syphilis RPR Titer

ZHANG Yi-lin1， YANG Zhen2

1.Department of Laboratory Medicine， Shenyang Maternity and Infant Hospital， Shenyang， Liaoning Province， 110011 China; 2.Hand and Foot Microsurgery， Shenyang Red Cross Hospital， Shenyang， Liaoning Province， 110011 China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between serum IL-2， IL-10 and IL-32 levels and syphilis RPR titer. Methods Convenient selected 110 patients with syphilis who were diagnosed with syphilis for the first time and without treatment intervention， admitted to the gynecological clinic and male clinic of the hospital from November 2018 to June 2019. According to the syphilis titer level， they were divided into high titer group and low titer group， 55 cases in each group. During the same period， 60 healthy volunteers who came to the hospital for physical examination were collected. The serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32 in each group were detected， and the correlation between their levels and the syphilis RPR titer was compared and analyzed. Results The levels of serum IL-2， IL-10， and IL-32 of syphilis patients in the high titer group and low titer group were significantly higher than those in the normal control group（tthigh titer group=13.561， 15.267， 18.220， P<0.05; ttlow titer group=7.123， 8.596， 9.651， P<0.05）; The serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32 in the high titer group were also significantly higher than those in the low titer group（t=10.261， 11.787， 12.872， P<0.05）; ROC curve analysis was performed on the expression levels of IL-2， IL-10， and IL-32 in syphilis patients and normal people. IL-2： AUC=0.967， the diagnostic sensitivity was 92.3%， and the specificity was 88.6%; IL-10： AUC=0.925， the sensitivity was 83.6%， the specificity was 87.2%; IL-32： AUC=0.767， the sensitivity was 70.5%， and the specificity was 74.1%. Conclusion Patients with syphilis have higher serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32， especially those with high titers， which indicate a positive correlation between serum levels and titers， which can be used for the diagnosis of syphilis.

[Key words] IL-2; IL-10; IL-32; Syphilis RPR titer; Correlation analysis

梅毒是目前临床较为常见的慢性传染性疾病和性病，由于梅毒螺旋体感染所致，其主要传播途径包括性行为、血液制品及母婴垂直传播所致的先天性梅毒。梅毒的临床表现复杂多样，病程漫长，分为1期、2期和3期梅毒[1]。1期和2期梅毒属于早期梅毒，可致硬下疳、皮肤斑疹和黏膜损伤，而3期梅毒属于晚期梅毒，可侵及心血管系统等全身各大重要脏器，导致梅毒性主动脉炎、主动脉瓣关闭不全、梅毒性心肌炎和神经梅毒等危重疾病[2]。而且感染梅毒的孕妇具有较高的流产、死胎及新生儿梅毒发生率，故严重影响和威胁患者及其下一代的健康安全。根据临床流行病学途径，梅毒患者的每年全球新发病例数高达1 100万，因此，由于梅毒患者巨大的新发病例数，针对可疑患者的临床检查诊断和普通人群的筛查具有极为重要的意义[3-4]。该研究方便选取2018年11月—2019年6月该院妇科门诊及男科门诊收治的首次确诊梅毒且未经治疗干预的梅毒患者110例，基于梅毒发生的免疫学反应，观察和分析血清IL-2、IL-10及IL-32 水平與梅毒RPR滴度的相关性，以期为临床治疗提供指导。现报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

方便选取该院妇科门诊及男科门诊收治的首次确诊梅毒且未经治疗干预的梅毒患者110例，根据梅毒滴度水平分为高滴度组和低滴度组，各55例。高滴度组：男30例，女25例;年龄20～60岁，平均年龄（37.6±10.2）岁;病程1～12月，平均病程（3.3±2.5）个月。低滴度组：男31例，女24例;年龄20～60岁，平均年龄（37.1±10.5）岁;病程1～12月，平均病程（3.5±2.7）个月。同期收集该院进行体检的健康职工志愿者60名，男34名，女26名;年龄20～60岁，平均年龄（37.2±10.3）岁。3组研究对象的年龄、性别比较，高滴度、低滴度组研究对象的病程时间比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。该研究经该院医学伦理委员会审核批准。

1.2  纳入与排除标准

纳入标准：①患者有感染史，有硬下疳、患处淋巴结肿大等临床表现;②实验室检查：皮损组织液或淋巴结穿刺液可见梅毒螺旋体，或快速血浆反应素诊断试验（RPR）及梅毒螺旋抗体明胶颗粒凝集试验（TPPA）双阳性;③梅毒螺旋体滴度诊断标准：高滴度：梅毒抗体滴度（RPR）>1∶4，低滴度：梅毒抗体滴度（RPR）<1∶4;④患者及家属认可研究方案，愿意配合研究，并签署知情同意书。排除标准：①非首次确诊梅毒患者，既往已确诊并接受相关治疗;②伴有慢性炎症、全身性感染或肿瘤等可对血清炎性因子水平产生影响的疾病;③伴有肝、肾、心、肺等重要脏器功能障碍或其它器官内外科严重疾病。

1.3  方法

经确诊后的梅毒患者及健康志愿者立即进行相关指标检测，抽取患者和志愿者外周肘静脉血5 mL，首先于室温下静置20 min待血液凝固，随后置入离心机中，以3 000 r/min续离心20 min，取上清液即为该患者血清，分为4等分，采用酶联免疫吸附试验检测血清IL-2、IL-10及IL-32 水平。然后采用梅毒螺旋体试剂盒检测RPR滴度，首先将血清依次稀释至：1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，然后进行滴度检测，判断患者RPR滴度，根据滴度水平分为高滴度组和低滴度组，比较和分析血清IL-2、IL-10及IL-32水平与梅毒RPR滴度的相关性。

1.4  统计方法

采用SPSS 25.0统计学软件进行数据分析，计量资料的表达方式为（x±s），采用t检验;计数资料的表达方式为[n（%）]，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。针对血清IL-2、IL-10及IL-32水平在梅毒高滴度和低滴度患者中的表达水平进行受试者工作曲线分析（ROC），曲线下面积（AUC）>0.7视为具有诊断预测意义和价值。

2  结果

高滴度组和低滴度组梅毒患者血清IL-2、IL-10和IL-32水平均明显高于正常对照组，分别经t检验比较，差异有统计学意义（P<0.05）。高滴度组患者上述血清水平亦明显高于低滴度组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

以IL-2、IL-10和IL-32的表达水平为检验变量，是否梅毒患者为检验变量，进行ROC曲线分析。结果显示：IL-2：AUC=0.967，诊断最佳灵敏度为92.3%，特异度为88.6%;IL-10：AUC=0.925，灵敏度为83.6%，特异度为87.2%;IL-32：AUC=0.767，灵敏度为70.5%，特异度为74.1%。可以认为，IL-2、IL-10和IL-32对梅毒患者有显著诊断价值，差异有统计学意义（P<0.05）。见图1。

3  讨论

梅毒是近年来我国临床发病率最高的慢性传染性疾病和性病之一，居乙类传染病的第3位，由于梅毒的社会属性，不仅严重威胁患者的健康安全，而且给患造成巨大的精神心理负担并且影响生活质量，因此早期发现和治疗梅毒显得尤为重要[5]。在梅毒确诊的传统检查方法中，TPPA属于梅毒螺旋体抗原血清检测，是目前最常用的确诊实验技术，但检查过程较为复杂，检查时间长，检查费用较高，不适用于常规患者和大规模人群的初筛以及治疗效果的评估[6]。TRUST和RPR属于非梅毒螺旋体抗原血清检测，目前主要用于普通人群的梅毒筛查和疗效观察，但存在较高的漏诊率或误诊率[7]。因此，选择简单、易操作的梅毒临床筛查指标对于早期发现和治疗梅毒具有重要的意义和社会价值。

该研究采用了RPR对初次发病的确诊梅毒患者进行滴度定量评价，分为高滴度和低滴度组，基于梅毒进展过程中发生的免疫反应，选择血清白介素分子（IL-2、IL-10及IL-32）水平进行检测，观察其在不同梅毒RPR滴度患者和正常人群中的表达差异，分析其与滴度的相关性。

该研究发现IL-2在梅毒患者中存在较高的表达，尤其高滴度患者的表达明显高于低滴度患者，ROC曲线分析发现AUC=0.967，符合预期结果，证实IL-2在梅毒中高表达，与梅毒RPR滴度存在正相关性。这与其他学者[8-9]的研究结果相似，这是因为在梅毒的病理生理反应中，梅毒螺旋体感染后进入机体可激活多种免疫应答反应，以Th1型细胞免疫反应为著[8]。Th1型细胞免疫反义可有效抵抗和清除包括梅毒螺旋体在内的多种入侵病原体，同时可大量合成和分泌IL-2、TNF、IFN-γ等Th1型細胞因子[9]。基础研究发现IL-2具有显著激活 CD4+T细胞活性作用，进一步促进和加强杀伤性T细胞、NK细胞，其它天然杀伤性细胞对梅毒螺旋体等侵入的病原体的杀伤作用[10]。而且已有临床实验发现肌肉注射梅毒螺旋体的疫苗Tp92蛋白可诱发强烈的体液免疫和细胞免疫反应，并出现IL-2水平的持续升高[11]。

该研究发现IL-10在梅毒患者中亦存在较高的表达，高滴度患者的表达亦高于低滴度患者，ROC曲线分析发现AUC=0.925，证实IL-10在梅毒中存在高表达，与梅毒RPR高滴度存在正相关性，同时可能暗示患者存在较高的慢性化转化风险。这可能因为Th2型细胞免疫是导致梅毒慢性化和病程迁延不愈的重要因素，并有研究[12]提出了Th1/Th2 漂移假说的观点，针对大量梅毒患者随访观察均发现随着病程的进展，存在不同程度的Th1型反应减弱和Th2型反应增强。IL-10是参与Th2型细胞免疫的重要细胞因子，可由单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞和B 淋巴细胞等多种免疫细胞分泌，具有抑制T淋巴细胞，而促进B淋巴细胞作用[13]。

IL-32是近年来新发现的促炎细胞因子，参与了多种炎症反应和自身免疫反应，可由单核细胞、T细胞、NK细胞及部分上皮细胞等分泌，而且IL-2、IL-12、IL-18、IFN-γ等细胞因子均可进一步促进IL-32的合成和分泌[14-15]。该研究发现血清IL-32水平随RPR滴度升高而有所升高，差异有统计学意义（P<0.05），ROC曲线分析发现AUC=0.767，灵敏度为70.5%，特异度为74.1%，其原因可能是IL-32可参与调解单核细胞、巨噬细胞和NK细胞的杀伤作用，并通过调节树突状细胞的成熟，同时加强 Thl 和 Th2 免疫反应[16]。由于同类相关研究报道较少，故IL-32的效能尚需未来进一步探讨。

综上所述，梅毒患者相较于正常人群具有较高的血清IL-2、IL-10及IL-32 水平，尤以高滴度患者的血清水平显著，血清水平与滴度存在正相关性。因此，在梅毒疑似患者的常规诊断中，通过检测IL-2、IL-10及IL-32 的表达，有助于进一步指导梅毒诊断，同时其表达水平有助于评估梅毒确诊患者的疗效。

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（收稿日期：2020-07-06）