试论HPLC 法测定不同品种鸡蛋中的胆固醇含量

借助于HPLC 法对不同种类鸡蛋里面的胆固醇含量进行有效测定，本文以浓度为2.0mol/L 的KOH-乙醇溶液开展皂化，石油醚萃取，以C18 反相色谱柱进行分离，HPLC 法测定，对操作环节进行了简化，减少了试剂的总体使用量，并且进一步节省了探究时间，整个探究过程只需要1.5 小时。本方法用来测定实际样品，效果明显。

胆固醇是生物膜以及神经髓鞘的核心构成部分，而且是胆汁酸以及类固醇激素的前体。可身体内部太多的胆固醇会进一步引起高血脂等疾病，于是，人们需要对日常饮食中胆固醇的摄入量进行控制。鸡蛋是人体进一步摄入胆固醇的核心渠道。HPLC 法对蛋黄里面胆固醇的具体含量进行测定，操作快速、方便，在短期内就能够完成探究，能够满足快速探究以及大批量样品测定的双重需要。

材料与方法

仪器与试剂。Agilentl100 化学工作站，紫外检测器G1314A，Agilent 1100 高效液相色谱仪，异丙醇、乙腈、甲醇、石油醚、胆固醇、氯化钠、氢氧化钾以及无水乙醇。制定浓度为1.0mg/ml 的胆固醇溶液：将100mg 胆固醇放在100ml 的容量瓶里面，以少量甲醇进行溶解后，用甲醇稀到刻度。

样品处理以及测定。将称好的0.20g 鸡蛋放在50ml的具塞比色管里面，添加5.0ml 浓度为2.0moL/L 的KOH一乙醇液，进行充分振荡，放在65℃的水浴里面实施皂化30 分钟后取出，利用流动的水实施冷却，添加2.0ml 的饱和氯化钠溶液后，然后添加20.0ml 的石油醚，旋涡混合均匀后开展离心分离，将10.0ml 的上清液放进10ml 刻度的比色管中，通入氮气进行吹干，再采取1.0ml 甲醇对残渣进行有效溶解，过0.45μm 滤膜之后，将10.0μl 有效添加到液相色谱仪，根据以上色谱条件有效实施测定，外标法定量。

结果

线性范围以及方法的最低检出限。按照探究步骤对胆固醇的标准溶液进行配制，在本实验的背景下，胆固醇的浓度从0 至1.0mg/ml 范围，标准曲线进一步呈现优良的线性关系。检出限低至0.005mg/ml，如果取样1.0g，鸡蛋里面胆固醇的最低检出浓度是0.5mg/100g。

准确度以及精密度试验。在0.20g 的鸡蛋样品里面依次添加0.15、0.30 以及0.45mg 的胆固醇标准，操作方法与样品一致，获得的回收率如表1 所示。由表1 能够得知，本实验的测定结果是真实的，其平均回收率是92.1%，各种浓度的测定结果的误差都不超过5%。

表1 准确度试验（n=6）

鸡蛋测定。借助于HPLC 法对购买的10 份鸡蛋样品有效实施了测定，结果胆固醇含量依次在(180 至545)mg/100g 之间。

结论

第一，现如今，在借助于比色法以及HPLC 法进一步测定鸡蛋中胆固醇含量的过程中，一般需要对样品实施皂化操作以及若干次提取，以减少蛋黄里面其他成分带来的影响，操作复杂且耗时，一般需要很多个小时才可以测定完一个样品，不适合快速检测大批量的样品。

第二，实验结果进一步表明，不同种类鸡蛋的胆固醇含量有所区别，于是对不同种类鸡蛋的胆固醇含量的相关参考值进行测定，有利于充分指导当地城市居民的合理膳食。