APP下载

一种快速测定苦丁茶中苦丁茶皂苷A含量的方法

2020-12-14吕华瑛

食品安全导刊·下旬刊 2020年10期
关键词:苦丁茶含量测定

摘 要:建立一种高效液相色谱法快速测定苦丁茶中苦丁茶皂苷A含量,采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 ?m);流动相为乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱;流速为0.8 mL/min;检测波长226 nm;柱温30 ℃;进样量10 ?L。结果表明,苦丁茶皂苷A在进样量0.102~3.06 ?g/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.6%,RSD为0.86%(n=6)。该方法精密度高,简便快捷,具有良好的重复性和稳定性,可为评价苦丁茶质量提供参考。

关键词:苦丁茶;苦丁茶皂苷A;含量测定

苦丁茶是一种纯天然保健茶。冬青科冬青属植物苦丁的干燥叶,是正品苦丁茶的主要来源,主产于广东省、广西壮族自治区和海南省等地。苦丁茶中主要含有皂苷、黄酮、多酚、氨基酸、挥发油与多糖等多种化学成分,其中,三萜皂苷类化合物是其主要活性成分,有显著降低低密度脂蛋白在血管内沉积,改善血液微循环的药理活性,对降压、降糖、降血脂、防治动脉粥样硬化以及由此引发的心脑血管疾病有积极治疗意义[1-2]。目前,苦丁茶的质量分析主要集中在测定黄酮、三萜、氨基酸、挥发性成分等方面[3]。本实验结合苦丁茶的功效,选取其中含量高、降血脂活性强的三萜皂苷类成分苦丁茶皂苷A为指标,用高效液相色谱法进行测定,为全面客观反映苦丁茶的质量优劣,合理制定苦丁茶等级标准提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1100 型高效液相色谱仪,Chemstation色谱工作站,Sartorius-BS110S 电子天平(德国赛多利斯科学仪器有限公司),KQ-500DE 型超声波清洗器(昆山市超聲仪器有限公司)。

苦丁茶皂苷A(kudinoside A)对照品为实验室自制,经HPLC法检测质量分数在98.0%以上;乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。10批不同等级品次的苦丁茶样品主要购买收集自广西、海南、广东。

2 方法与结果

2.1 提取条件优化

分别从提取方法、提取溶剂、提取时间、固液比4方面进行研究。首先以60%甲醇作溶剂用回流和超声法进行实验检测,显示回流法提取优于超声法。又考察不同浓度甲醇和乙醇对提取的影响,显示80%甲醇与60%甲醇对苦丁茶皂苷A的提取率远高于其他溶剂,从经济上考虑,确定60%甲醇为提取溶剂。进一步考察不同固液比、提取时间的影响,显示以固液比1∶250,用60%甲醇回流提取1 h,待测成分提取效果最好。

2.2 色谱条件优化

为获得苦丁茶皂苷A的最佳分离效果,实验考察了4种不同的液相色谱柱、4种不同的流动相、不同的柱温以及不同流动相的流速等色谱条件。结果表明:Kromasil 100-5C18柱的分离效果最优;采用乙腈-0.1%磷酸水为流动相,0.8 mL/min的流速梯度洗脱,柱温30 ℃,可以使苦丁茶皂苷A的色谱峰保留时间适中,并能与干扰组分的色谱峰良好分离。

2.3 检测波长的选择

取苦丁茶皂苷A对照品甲醇溶液进行波长扫描,在226 nm波长处有最大吸收,故确定226 nm作为检测波长。

2.4 色谱条件

Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm,5 ?m)色谱柱。流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱:0~10 min,15%~30% A;10~30 min,30%~40% A;30~35 min,40% A。体积流量:0.8 mL/min。检测波长:226 nm。柱温:30 ℃。进样量:10 ?L。高效液相色谱图见图1。

2.5 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的苦丁茶皂苷A对照品适量,加入60%甲醇溶解、定容,制成浓度为0.510 mg/mL的对照品储备液,低温保存备用。

2.6 供试品溶液的制备

取粉碎、过40目筛并低温干燥至恒重的苦丁茶粉0.1 g,加入60%甲醇25 mL,称定质量,80 ℃加热回流60 min,取出,自然放冷至室温,以60%甲醇补足减失的质量,摇匀,0.22 ?m微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

2.7 线性关系考察

精密吸取对照品储备液1 mL,以60%甲醇定容于5 mL容量瓶中,再分别精密吸取苦丁茶皂苷A对照品溶液(0.051 0 mg/mL)1、5、10、15、20、25 ?L与30 ?L,注入液相色谱仪,记录色谱峰面积。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,制备标准曲线,得回归方程为Y=489.55X-0.59,r=0.999 9。

结果表明苦丁茶皂苷A进样量在0.102~3.06 ?g/mL时,呈良好的线性关系。

2.8 精密度试验

取同一供试品溶液,连续进样6次,测定苦丁茶皂苷A峰面积,计算RSD为0.47%,表明本方法精密度良好。

2.9 重复性试验

取同一批苦丁茶样品6份,按2.6项下方法平行制备6份供试样品溶液,分别进样10 ?L,计算苦丁茶皂苷A的质量分数,平均结果为2.56%,RSD为1.12%,表明本方法重复性良好。

2.10 稳定性试验

取同一供试品溶液分别于0、2、4、8、12、24 h依次进样,记录不同时间的色谱图,计算苦丁茶皂苷A的峰面积RSD为1.54%,RSD值≤2%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.11 回收率试验

取广西大新苦丁茶样品粉末6份,每份0.05 g,精密称定,分别精密加入0.051 0 mg/mL的苦丁茶皂苷A对照品甲醇溶液25 mL,按2.6供试品溶液制备方法制备并测定,平均回收率为99.6%(RSD=0.86%)。

2.12 样品测定

取不同产地与等级苦丁茶样品,制备供试品溶液。分别精密吸取苦丁茶皂苷A对照品溶液与供试品溶液各10 ?L,注入液相色谱仪,测定峰面积,计算苦丁茶皂苷A含量,见表1。

3 结果与讨论

实验显示:①来自3个不同产地、相同等级苦丁茶中指标成分苦丁茶皂苷A的含量差异不大,但是来自同一产地海南、不同等级苦丁茶中指标成分含量有一定差异,从数据上可以明显看出,普通级>一级>特级>极品,这可能与不同等级苦丁茶烘焙加工温度有密切关系,随着烘焙温度的提高,苦丁茶皂苷A的含量降低,后期需进一步实验验证。②茶叶碎屑中含有较多的苦丁茶皂苷A,将苦丁茶冬青叶开发为新的降血脂药物而言,茶叶碎屑都可用作原料,利于降低开发新药的成本。③苦丁茶冬青老龄叶与嫩叶中指标成分含量差异较大,但老龄叶中所含其他化学成分是否与嫩叶有差异,还有待研究。

本实验建立的测定方法简便,准确可靠,重复性好,可考虑作为苦丁茶质量优劣的检测控制标准。根据实验结果,若以苦丁茶干燥品计算,其所含主要活性成分苦丁茶皂苷A限度标准可暂定为不低于20 mg/g。

参考文献

[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1986.

[2]胡婷.苦丁茶中有效成分的分离纯化、鉴定及其活性研究[D].广州:华南理工大学,2013.

[3]樊伟伟,何进武,陈冬梅,等.海南苦丁茶几种活性成分测定与比较分析[J].食品工程,2017(3):62-64.

基金项目:国家自然科学基金资助课题(编号:81560643)。

作者简介:吕华瑛(1971—),女,山东莱阳人,硕士,教授。研究方向:中药化学成分研究与质量控制。

猜你喜欢

苦丁茶含量测定
餐后常喝苦丁茶
苦丁茶是药不是茶
苦丁茶是茶吗
高效液相色谱法用于丙酸睾酮注射液的含量测定
HPLC法测定彝药火把花根中雷公藤甲素的含量
HPLC法测定不同产地爬山虎茎中白藜芦醇的含量
山苓祛斑凝胶剂提取物质量标准研究
空气中氧气含量测定实验的改进与拓展
善饮苦丁可养生
苦丁茶:不是人人都宜喝