肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌检测的方法学评价

胡茜茜

【摘要】目的：研究肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌采用不同检测方法的临床价值。方法：病例样本为2019年1月-2020年1月时间段我院收治的84例肺结核患者，收集其肺泡灌洗液，采用Xpert MTB/RIF法、改良抗酸染色法、离心涂片法、960培养法，评估不同检测方法的检测结果。结果：评估不同检测方法阳性率，Xpert MTB/RIF法、改良抗酸染色法高于其他方法（P<0.05）。结论：肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌采用Xpert MTB/RIF法、改良抗酸染色法诊断临床价值突出，值得推广应用。

【关键词】肺结核;肺泡灌洗液;结核杆菌

【中图分类号】R521 【文献标识码】B 【文章编号】1002-8714（2020）11-0086-01

肺结核属临床常见慢性传染性疾病，致病原因为结核杆菌感染。细菌培养是临床诊断结核杆菌感染的金标准，其主要缺陷为诊断耗时较长，对诊断环境及生物安全性要求较高，敏感性偏低[1]。抗酸染色法、Xpert MTB/RIF法属临床诊断结核杆菌感染的全新技术，本次研究通过对我院1年时间内收治共计84例该疾病患者资料的研究分析，重点探讨肺泡灌洗液中结核杆菌采用不同检测方法的临床价值。

1 资料与方法

1.1一般资料

2019年1月为本次研究起始时间，2020年1月为本次研究终止时间，研究样本数量共计84例，全部患者经影像学诊断、病理诊断、细菌学诊断，均符合肺结核临床诊断标准，其中男46例，女38例，年龄范围为35-57岁，年龄均值为（40.21±5.04）岁。

1.2方法

全部84例患者均行Xpert MTB/RIF法、改良抗酸染色法、离心涂片法、960培养法检测结核杆菌感染情况，检测前医师依据患者病变部位选择需灌洗的肺段，于患者肺段支气管开口部位插入电子支气管镜，注入2ml利多卡因实施局部麻醉，注入5-10ml生理盐水反复灌洗，收集肺泡灌洗液15ml。

Xpert MTB/RIF法：将消化液加入BALF中，比例设定为1：1（v/v），将试管盖子拧紧，利用旋涡振荡器持续振荡约30s。于室温环境中放置约15min，如混合液中无明显可见颗粒物，可在检测试剂盒被加入2ml混合液。利用Gene Xpert仪器对试剂盒实施自动检测2h进而显示检测结果。

改良抗酸染色法：將BALF混合均匀，取0.3mlNaOH溶液（4%）与0.9mlBALF于旋涡振荡器中混合均匀，将消化完成的BALF0.5ml加入4型Cy-tospin玻片离心沉淀仪器中，离心处理5min后将玻片取下，并于恒温干燥设备中进行干燥处理及抗酸染色处理，利用油镜检查，并分析记录检查结果。

离心涂片法：10ml一次性无菌试管中加入5mlBALF，离心处理10min（3000g），将上层清液吸出并弃去。利用底部沉淀实施涂片处理，面积设置为10mm×20mm。利用恒温干燥设备处理后加入石炭酸复红染液处理10min，脱色处理1min（盐酸酒精3%），利用美蓝复染30s，水洗并干燥处理后利用油镜进行检验。

960培养法：50ml一次性离心管中加入5ml混合均匀的BALF，加入2倍体积消化液处理，旋涡振荡使其达到完全消化。静置15min，加入PBS，取混合液45ml进行低温离心处理，离心时间为15min（3000g）。弃去上层清液，并将沉淀中加入适量PBS，重悬后取悬浮液0.5ml，加入MGIT内部实施培养，操作中需利用抗酸染色确认培养阳性管。

1.3评价标准

评估不同检测方法阳性率指标。

1.4统计学方法

为确保数据分析计算结果准确，采用SPSS23.0软件计算各类数据，本次研究中计数资料为（%），检验方法为χ2，如P<0.05，则组间有差异。

2 结果

评估不同检测方法阳性率，Xpert MTB/RIF法、改良抗酸染色法高于其他方法（P<0.05）。

3 讨论

肺结核属临床常见慢性呼吸系统传染性疾病，结核杆菌感染是其主要发病原因，早期诊断并采取针对性治疗干预措施是临床防治肺结核的关键，为此医师需结合患者病情合理选择诊断方案[2]。

本次研究数据显示，Xpert MTB/RIF法、改良抗酸染色法诊断阳性率高于离心涂片法、960培养法，提示其诊断结核杆菌感染临床价值突出。离心涂片法、960培养法属肺结核诊断的常规方法，离心涂片发主要缺陷为阳性率偏低，培养法需要较长的培养周期，无法在短时间内完成疾病的诊断[3]。改良抗酸染色法利用玻片离心沉淀设备完成结核杆菌采集，经多聚赖氨酸处理的玻片能够减少结核杆菌在检测过程的损失。BALF经消化液处理能够将聚集的结核杆菌分散，可为医师观察涂片营造良好条件。改良抗酸染色法离心操作中滤纸将液体成分吸收，有效解决了结核杆菌在液体中存在浮力对检测结果的影响，且涂片面积较小，可促进结核杆菌浓缩。Xpert MTB/RIF法是近年来应用广泛的新技术，该技术操作中利用巢式PCR技术，敏感性显著提高，可降低非特异性扩增总量，有效区分非结核与结核杆菌，操作过程自动化，并能够在封闭环境中完成，可最大程度上确保生物安全，提高诊断准确率。

由此可知，肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌采用Xpert MTB/RIF法、改良抗酸染色法诊断临床价值突出，值得推广应用。

参考文献

[1] 柯创宏，韩焕钦，杨天骄，等.高通量测序技术检测支气管肺泡灌洗液在婴幼儿肺炎病原学诊断中的价值[J].中华实用诊断与治疗杂志，2020，34（04）：398-400.

[2] 陈石，陈静，魏瑜，等.特发性肺纤维化患者肺泡灌洗液和血清中Napsin A、KL-6、SP-A、SP-D表达的意义及与肺功能相关性[J].临床肺科杂志，2020，25（04）：565-569.

[3] 蒋慧，邵乐健，杨树坤，等.尘肺病患者肺泡灌洗液TNF-α、IL-10、Th1/Th2水平的临床意义[J].职业与健康，2020，36（06）：724-728.