HPLC法测定甲磺酸培氟沙星胶囊的含量及有关物质

2020-12-09朱晓璐胡幸

世界最新医学信息文摘 2020年84期

朱晓璐，胡幸

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121）

0 引言

甲磺酸培氟沙星是喹诺酮类第三代抗菌药物，主要作用于细菌细胞的DNA旋转酶，干扰细菌DNA的合成，使细菌死亡[1]。其合成工艺系由诺氟沙星与甲醛、甲酸进行甲基化反应生成培氟沙星，再与甲磺酸在乙醇溶液中进行成盐反应[2-3]。甲磺酸培氟沙星胶囊收载于《中国药典》2015年版，甲磺酸培氟沙星原料药收载于EP9.0，USP及JP均未收载该品种。有关物质是评价药物安全性的一个重要指标，也是评价药品质量的重要指标[4]。本文参照EP9.0[5]建立了甲磺酸培氟沙星胶囊含量及有关物质的测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器。Agilent1100高效液相色谱仪（紫外检测器和DAD检测器），色谱柱：SHISEIDO（资生堂）MG5μm C18 4.6 mml.d.×250 mm。

1.2 试药与药品。乙腈、N，N，N-三甲基1-十六烷基溴化铵、硼酸均为国产分析纯，硫二甘醇为Johnson Mathey Company提供。甲磺酸培氟沙星胶囊（A厂，规格：0.2 g；B厂，规格：0.2 g）各三批。

2 色谱条件

流动相：乙腈-N，N，N-三甲基1-十六烷基溴化铵（2.70g/L）与硼酸溶液（6.18 g/L）的混合溶液（用1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.30）-硫二甘醇（28:72:0.2）；流速：1.0 mL/L；柱温为30℃；检测波长273 nm；进样量：20 µL。

3 方法学考察

3.1 专属性试验

3.1.1 破坏试验：取样品分别进行热破坏（60℃下放置10天）、酸破坏（加入1 mol/L盐酸）、碱破坏（加入1 mol/L氢氧化钠溶液）、光照破坏（裸置于强光下48小时）、紫外光破坏（裸置于紫外光下48小时）以及氧化破坏（加入30%双氧水1 mL），采用“2”的色谱条件进行杂质分离度的考察。结果显示主峰与各杂质均能较好的分离，且辅料对测定无干扰。分别精密吸取上述供试品溶液20 ul注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。

3.1.2 峰纯度检测：将“3.1.1”的破坏试验样品溶液用DAD检测器进行纯度检测，结果主峰纯度均大于990，结果表明，本品在酸、碱、高温、光照、紫外及氧化条件下均有新的杂质产生，但均与主峰有良好的分离度，表明本方法具有较好的专属性，能满足本品有关物质检查的要求[6-8]。

图1 峰纯度检测

3.2 检测限及定量限。取培氟沙星对照品约25 mg，用流动相溶解并稀释制成每1 mL中含培氟沙星0.2 mg的溶液，再稀释500倍，采用“2”的色谱条件进样，测得培氟沙星检测限为0.01989 ng（信噪比=3），定量限为0.08517 ng（信噪比=10）。

3.3 溶液稳定性。取培氟沙星对照品约25 mg，用流动相溶解并稀释至每1 mL中含培氟沙星0.2 mg的溶液，采用“2”的色谱条件分别在1小时、2小时、4小时、8小时、10小时进样，结果表明，溶液在室温条件下10小时内杂质含量基本未变，提示本品溶液能够在10小时内保持稳定。

3.4 回收率考察。对两个生产厂家的样品进行样品加标回收率试验。取培氟沙星对照品约25 mg，用流动相溶解并稀释至每1 mL中含培氟沙星0.2 mg的溶液，作为对照品溶液；取样品适量，用流动相溶解并稀释至对照品溶液相同浓度，作为供试品溶液。另分别配制相当于含量测定浓度80%、100%和120%的加标供试品溶液各三份，采用“2”的色谱条件测定其含量，扣除本底，计算回收率，并计算相对标准差（RSD），结果见表1。

结果表明，2个生产厂家的样品平均回收率分别为100.40%、100.59%，RSD分别为0.79%和0.77%，该方法测定含量准确可靠。

4 结果检测

按拟订的方法进行有关物质和含量检测，杂质峰出峰时间均在主峰前。结果显示，三个生产厂家9批样品采用自身对照法，单个杂质在0.10%-0.31%，均小于0.5%，总杂质在0.25%-0.52%，均小于1.0%。9批样品含量为95.2%-98.4%。

5 讨论

在277 nm和273 nm波长处，甲磺酸培氟沙星峰的响应值比较接近，在258 nm波长处，峰的响应值较低。经紫外扫描，原料及各种处方的制剂主峰最大吸收均在273 nm处，辅料在273 nm波长处几乎无吸收；经破坏试验结果可知，除了酸破坏，其余强制破坏样品均未在主峰后检出杂质峰，而EP9.0的检测方法中，258 nm波长处主要检测主峰以后出峰的杂质[9-11]。为了便于含量和有关物质检测方法操作的简便和一致性，最终确定检测波长为273 nm。