两种全血细胞分析仪研究参数在冷凝集标本处理中的应用价值*

王 鑫 李建英 陈 倩 王 斐 孙胜利 毛镭篥 吴 卫*

血液分析仪是临床实验室最为常用的仪器之一，很多实验室备有多种血液分析仪，其优势在于检测快速、能够提供多种参数，为临床提供准确及时的诊疗依据，而分析其检测质量直接关系到临床的诊断与治疗。在日常检验工作中冷凝集标本会引起红系参数的异常，目前在临床工作中发现，有部分血液分析仪上的研究参数在冷凝集标本的处理上有一定的应用价值。为此，本研究将两种血液分析仪的研究参数应用到冷凝集标本的处理，并与传统冷凝集标本处理方法37 ℃水浴法和血浆置换法进行比较分析，旨在探讨血液分析仪研究参数排除冷凝集现象干扰的应用价值。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

采用ADVIA2120型自动血细胞分析仪(德国BAYER公司)及配套原装试剂，该仪器以过氧化物酶染色法加光散射法检测白细胞(white blood cell，WBC)，二维光散射法测量红细胞(red blood cell，RBC)及血小板(platelet，PLT)；单个细胞血红蛋白(cell hemoglobin，CH)由RBC CH直方图所得。XN9100型自动血细胞分析仪(日本Sysmex公司)流水线及配套试剂，该仪器以细胞化学染色加光散射法检测WBC，鞘流电阻抗法检测RBC和PLT。网织红细胞(reticulocyte，Ret)通道采用半导体激光流式细胞仪(flow cytometry，FCM)+核酸荧光染色法。RBC-O为XN9100(Ret通道)测得的研究参数。

1.2 标本来源

收集2019年1-5月在北京协和医院采集静脉血进行血常规检查的22例患者的冷凝集样本(22份)，冷凝集判断标准，红细胞平均血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC)＞360 fl，放入4 ℃冰箱5 min观察到肉眼可见的冷凝集现象。

1.3 标本处理与质量控制

对22份冷凝集标本分别用以下4种处理方法检测：①XN9100网织通道检测法，在血液分析仪XN9100(网织通道)上机检测，用RBC-O替换RBC并计算MCHC；②ADVIA2120检测法，在血液分析仪ADVIA2120上机检测，研究参数单个细胞血红蛋白(CH)通过血红蛋白/单个细胞血红蛋白(HGB/CH)计算得到修正后的RBC和MCHC；③37 ℃水浴法，37 ℃水浴1 h后血液分析仪XN9100检测；④血浆置换法，在标本中加入1 ml生理盐水，混匀后在离心机3000 r/min，离心3 min，吸取1 ml混有生理盐水的血浆后，在血液分析仪XN9100上测定，并记录结果。

ADVIA型2120自动血细胞分析仪和XN9100型自动血细胞分析仪均在校准周期内，每日测定配套质量控制，结果均在控。

1.4 观察评价指标

以血浆置换法为参考方法，计算其他方法在RBC、MCHC、平均红细胞体积(mean corpusular volume，MCV)、WBC和PLT的5项结果相对偏差(%)，依据本研究实验室的允许偏差标准(RBC3%、MCHC3.5%、WBC7.5%、PLT12.5%)确定纠正效果，试验以5项数值纠正结果在允许偏差内为完全纠正，有一项不符合视为未纠正。

2 结果

2.1 四种方法数据比较

(1)RBC比较：采用XN9100网织通道检测法、ADVIA2120检测法、37 ℃水浴法和血浆置换法的4种方法进行RBC比较，其中37 ℃水浴法整体低于其他方法，见图1。

图1 四种方法RBC比较结果

(2)MCV比较：采用XN9100网织通道检测法、ADVIA2120检测法、37 ℃水浴法和血浆置换法的4种方法进行MCV比较，XN9100网织通道检测法及37 ℃水浴法部分病例高于其他两种方法，见图2，XN9100相关直方图见图3。

图2 四种方法MCV比较

图3 两种典型冷凝集标本红细胞直方图

(3)MCHC比较：采用XN9100网织通道检测法、ADVIA2120检测法、37 ℃水浴法和血浆置换法的4种方法进行MCHC比较，37 ℃水浴法部分病例高于其他3种方法，见图4。

表1 22份冷凝集标本3种方法与血浆置换法比较超过允许偏差(例)

图4 四种方法MCHC比较

(4)PLT比较：采用XN9100网织通道检测法、ADVIA2120检测法、37 ℃水浴法和血浆置换法的4种方法进行MCHC比较，XN9100检测法与ADVIA2120检测法无明显差异，血浆置换法整体低于其他3种方法，见图5。XN9100相关散点图见图6。

图5 四种方法PLT比较

图6 血浆置换法前后PLT直方图血小板碎片对比

(5)WBC比较：采用XN9100网织通道检测法、ADVIA2120检测法、37 ℃水浴法和血浆置换法的4种方法进行WBC比较，4种方法检测结果整体水平无明显差异，见图7。

图7 四种方法WBC比较

2.2 血浆置换法为参考方法的比较

以血浆置换法为参考方法对其他3种方法比较：①XN9100检测法，XN9100型自动血细胞分析仪上研究参数RBC-O超过允许偏差分别为1例RBC、3例MCHC、1例MCV及1例PLT；WBC在允许偏差内；②ADVIA2120检测法，ADVIA2120型自动血细胞分析仪上的参数CH，通过(HGB/CH)反算得到RBC、MCHC和MCV结果，其均在允许偏差内，超过允许偏差分别为1例WBC、1例PLT；③37 ℃水浴法，超过允许偏差分别为87例RBC、4例MCHC、1例MCV、1例PLT；WBC在允许偏差内。血浆置换法与其他3种方法比较见表1。

3 讨论

冷凝集素又称冷型自身抗体，于低温时造成红细胞凝集，以IgM为主，罕见情况下为IgA或IgG[1]。血清中冷凝集素的滴度，即在冷却状态下仍可见到红细胞凝集的血清标本的最大稀释度在不同患者中差异很大，但在同一患者中通常相当恒定。正常情况下，几乎所有个体都有低滴度的冷凝集素(＜1∶64，通常＜1∶10)，并且无年龄和季节性差异[2]。冷凝集现象大多是因为冷凝集素效价异常增高引起，其中多为继发性，也可见于冷凝集素效价不高，但活性强的情况[3-4]。冷凝集现象常见于支原体肺炎、传染性单核细胞增多症，也可见于慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤等，该类患者的血液离体后，温度降低导致高效价或高活性的冷凝集素与RBC表面的相应抗原结合，使RBC自身发生凝集，导致血常规红系参数受到干扰，有时甚至会影响到WBC及PLT计数[5]。除冷凝集素外，冷球蛋白、冷纤维蛋白原等也可产生冷凝集现象，对血常规检测结果产生影响[6]。在体外RBC与冷凝集素发生特异性结合的最大反应温度在4 ℃，复温到37 ℃时该反应消退[7]。

冷凝集标本在电阻抗方法的血液分析仪上检测时，聚集的RBC通过细胞计数孔常被认为是大红细胞，或不计入有效体积红细胞，引起RBC总数减少。正常体积范围内测得的红细胞MCV值，因此MCV会受到较小影响。

实验室处理冷凝集标本常用的方法有37 ℃水浴法，血浆置换法。37 ℃水浴法是将有冷凝集现象的血常规标本在37 ℃作用下使聚集的RBC散开，血浆置换法是通过生理盐水置换血浆从而降低血中冷凝集素的含量，本实验室使用的XN9100型自动血细胞分析仪研究参数RBC-O、ADVIA2120型自动血细胞分析仪研究参数CH对于冷凝集干扰的排除均有帮助。

本研究以血浆置换的结果为标准，比较其他3种方法。试验数据显示，采用37 ℃水浴法排除冷凝集现象干扰的结果中共有8例标本不符合允许偏差，大多数冷凝集标本经过37 ℃水浴后就能得到满意结果，表明37 ℃水浴法仅能排除部份冷凝集现象的干扰，但是高效价冷凝集素等原因引起的较为严重的冷凝集现象，37 ℃水浴法并不能解决干扰[3，8]。

利用XN9100型自动血细胞分析仪RET通道上的RBC-O研究参数得到的红系结果，有3例不符合允许偏差，此方法较37 ℃水浴法及血浆置换法快捷，效果优于37 ℃水浴法但是仍有少部分标本未能排除冷凝集现象的干扰。

XN9100型自动血细胞分析仪因为RET通道有40 ℃液体加热器硬件[9]的特性，因此其测出的研究参数RBC-O，可以帮助排除冷凝集干扰，但仍有部分标本干扰未能排除，所以RBC-O是否可以作为最终的RBC结果仍需判断。通过工作中的摸索，本研究发现可以将RET通道的另一个研究参数HGB-O(血红蛋白作为一个判断条件，RET通道的HGB-O与正常HGB无明显差别(cv＜3.5%)，RBC-O结果可采用。

ADVIA2120型自动血细胞分析仪测量RBC的方法为二维光散射法，其原理为当RBC一个一个通过激光照射区时，在两个角度进行测定，高角度(5°～15°)主要测细胞折射指数，其和细胞密度相关，低角度(2°～3°)主要测细胞大小[10]。由于其测定的多角度，一些较弱冷凝集现象的标本可直接排除干扰，由于其RBC CH直方图不受细胞体积影响，是按每个细胞中存在的血红蛋白含量显示RBC分布，因此利用直方图的参数CH反推(HGB/CH)得RBC及MCHC与血浆置换法相比较，均可接受。本研究发现，ADVIA2120型自动血细胞分析仪的MCV因为方法学优势基本不受冷凝集现象干扰。

在实验过程中发现血浆置换法对RBC参数虽能很好地纠正，却会导致PLT的丢失。血浆置换法PLT虽然与其他各法比较，除1例PLT增高以外，都符合允许偏差，但与其他相比都偏低，这可能与血浆置换过程中吸弃血浆时PLT被吸掉有关，因为血液离心后，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层和红细胞层，且离心力较低时，上层血浆富含PLT，本研究试验中存在的1例PLT异常标本，分析数据得知是因为血浆置换法的PLT高于其他3种方法所致。本研究通过观察其散点图发现，可能是因为部分破碎的细胞碎片导致PLT结果增多。由于血浆置换法主要影响PLT，因此，PLT值可采用置换前的检测数值，通过以上的处理能得到满意的效果。

4 结论

在处理血常规检测中遇到的冷凝集标本时，37 ℃水浴法适用于弱冷凝集现象的标本；血浆置换法是目前排除冷凝集干扰结果的传统方法，但其易受操作手法的干扰，如能测研究参数CH值，通过计算可以得到消除干扰的RBC值；如能测研究参数RBC-O值，可用RBC-O替代RBC，但是否直接采用需对相关参数进行判断；两者相对传统的37 ℃水浴法及血浆置换法更省时省力，有较好的应用价值。