非配套生化检测系统酶类项目吸光度阈值与自动稀释重测设定的临床应用*

蔡永梅 刘 京 毛东英 王志伟*

在临床生化检验中，当样本中待测物浓度大于检测系统线性范围(analytical measurement range，AM R)时，需要稀释重测(rerunon dilution)，尤其是在进行丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)、γ-谷氨酰基转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase，GGT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase，LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(alpha-hydroxybutyric dehydrogenase，HBDH)和肌酸激酶(creatine kinase，CK)等酶类项目检测，当待测物浓度超过检测系统线性区间时，出现底物耗尽导致结果不可靠[1]。使用配套生化系统时，制造商根据检测系统的特点，在大量实验数据的基础上事先确定吸光度阈值和自动稀释重测条件，实现超出线性范围检测结果的自动识别、筛选并通过稀释重测(手动或自动)，获得准确检测结果[2]。使用第三方试剂组成非配套生化检测系统时，往往忽视吸光度阈值和自动稀释重测的设定，采用系统默认参数，存在潜在质量风险、影响检验工作效率。非配套生化检测系统也应当根据所使用试剂特点正确设置吸光度阈值，自动识别并标记底物耗尽时的异常检测结果，具备自动稀释重测功能的全自动生化分析仪，还应正确设置稀释倍数和稀释重测条件，实现自动稀释重测，避免异常高值结果漏检和误检。本研究通过吸光度阈值和自动稀释重测的设定和应用，保证酶类项目检测结果的准确性，提高检验工作效率，实现对酶类反应过程的监控，使非配套生化检测系统具备媲美配套系统的检测质量。

1 材料与方法

1.1 一般材料

选取2017年6-9月在宁夏医科大学总医院住院或门诊患者，检测其ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK7个项目结果接近试剂说明书提供线性高限(±10%)的样本各10份；另选取超过线性上限的高值结果样本各30份。

1.2 仪器与试剂

SIEMNES ADVIA 2400型全自动生化分析仪(德国西门子医学诊断产品有限公司)，酶类项目检测试剂、标准品(北京利德曼生化股份有限公司)。

1.3 检测方法

利德曼酶类项目试剂检测范围分别为：ALT和AST各为0～600 U/L，ALP为25～750 U/L，GGT为10～500 U/L，CK为25～1000 U/L，LDH和HBDH各为25～750 U/L。将各项目大于线性上限结果按自动稀释与手动稀释方式分为两组，并上机检测。

1.3.1 吸光度阈值的获取与设置

选取ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK接近说明书提供线性高限(±10%以内)各10份样本上机检测，读取各项目起始读点时主波长的吸光度并计算均值，将其设为北京利德曼试剂在ADVIA 2400型全自动生化分析仪吸光度阈值。ADVIA 2400设置样品上升反应上限为“u”，下降反应下限为“d”。

1.3.2 吸光度阈值的验证

将另选取并检测的ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK的7个项目大于线性上限样本各30份，确认所有超过线性的结果均被有效识别，验证所设吸光度阈值的正确性。

1.3.3 自动稀释重测设置

ADVIA 2400型全自动生化分析仪具有自动稀释重测功能，根据实验室验证的不同项目最大稀释倍数，进行自动稀释重测倍数和自动稀释重测条件的设置。分别用手工稀释和自动稀释的方式检测ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK的7个项目大于线性上限样本各30份，进行两种稀释方式结果的比较。

1.4 统计学方法

采用SPSS16.0软件进行数据统计分析，将两种稀释方式结果进行成对双样本均值分析的t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 吸光度阈值

正确设置北京利德曼生化试剂和ADVIA2400型全自动生化分析仪组成的非配套检测系统酶类项目吸光度阈值参数后，仪器自动识别所有超线性上限的结果，上升反应结果并附带警示标志“u”，下降反应结果并附带警示标志“d”，提示检测结果超过线性上线，可能存在底物耗尽而不可靠，需要稀释重测。各检测项目的吸光度阈值见表1。

表1 各检测项目的吸光度阈值

2.2 自动稀释与手工稀释浓度比较

设置吸光度阈值可实现超高限酶类检测结果自动识别，在此基础上设置自动稀释重测倍数和自动稀释重测条件，可完成此类结果的自动识别、自动稀释重测，重测过程不需要人为干预，进一步提高工作效率。所有项目P值均＞0.05，自动稀释结果与手动稀释结果无显著性差异，一致性良好，可优先选用自动稀释方式重测酶类超高限异常结果。仪器自动稀释与手工稀释浓度见表2。

表2 仪器自动稀释与手工稀释浓度比较()

表2 仪器自动稀释与手工稀释浓度比较()

注：表中ALT为丙氨酸氨基转移酶；AST为天门冬氨酸氨基转移酶；GGT为γ-谷氨酰基转肽酶；ALP为碱性磷酸酶；LDH为乳酸脱氢酶；HBDH为α-羟丁酸脱氢酶；CK为肌酸激酶

3 讨论

国内许多临床实验室选用由进口全自动生化分析仪和国产第三方试剂组成非配套(开放)生化检测系统。第三方试剂应用于不同制造商多种型号仪器，其工程技术人员只能给用户提供基本分析参数设置，仅满足第三方试剂在各种分析仪上的基本使用要求，而不能针对每种分析仪的特征更进一步对相关参数进行优化设置，一些高阶参数均选用仪器默认值，不能对分析检测过程进行有效监控，这是目前非配套系统应用存在的普遍问题和主要缺陷[3]。基于此，本研究开展非配套生化检测系统酶类项目吸光度阈值与自动稀释重测设定和临床应用。

全自动生化分析仪速率法一般设定在固定循环点读取吸光度，由于方法学及检测系统的限制，当待测物酶活度高于检测线性上限时，吸光度每分钟的变化率急剧增大，底物迅速耗尽、反应提前结束进入平台期，读点区间内反应曲线不成线性而“失真”，导致结果计算错误[4-5]。这种异常高值结果约占每日检测数的千分之几，在非配套系统应用中若无设置吸光度阈值参数，实验室工作人员通过查阅历史结果、查看仪器反应曲线以及仪器结果是否有异常标志[6-7]以及临床诊断并结合工作经验等措施，进行超线性异常检测结果的筛选与复查，工作效率低，容易漏检，导致检验结果错误报告[8]。针对此现象，高小文等[9]报道，设置检测项目的线性范围上限值进行拦截或通过反应曲线斜率进行结果的纠正计算，但仍存在漏检或误差。依据酶类检测项目的反应原理，进行吸光度阈值参数的优化设置，通过设定上升反应(u)或下降反应(d)[10]进行超高限结果的识别，拦截效率高，可杜绝漏检和误检。

ADVIA 2400全自动生化分析仪具有自动稀释重测功能，根据ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH及CK检测方法的反应类型，设置自动稀释重测倍数和条件[12]。结合吸光度阈值的应用，实现超限结果自动识别、拦截，自动稀释重测，提高了检验工作效率[13]。通过仪器自动稀释与手动方式稀释比较，证实两者结果无显著性差异，一致性良好，保证检测结果的正确性[13-14]。

4 结论

通过吸光度阈值的设定和应用，有效拦截、标识超过线性上限酶类结果的同时，实现对非配套生化检测系统酶类项目反应过程的监控，结合自动稀释重测，实现自动识别、自动稀释重测。杜绝异常高值结果的漏报、误报，保证检测结果准确、可靠，提高检验质量；有效自动筛选出高于限值的检测结果减少繁复、无必要的工作，降低工作人员劳动强度，缩短样本TAT，提高检验工作效率，使非配套生化检测系统具备媲美配套系统的检测质量和检测效率。