高效液相色谱-串联质谱在兽药残留分析中的应用
2020-12-04许笑绉来利杰中谱安信杭州检测科技有限公司
□ 姚 媛 许笑绉 来利杰 中谱安信(杭州)检测科技有限公司
HPLC—MS/MS 全称为种高效液相色谱—串联质谱技术,该技术可对多组分进行定性、定量综合分析,在应用中可以对高沸点、非挥发性等进行准确的分离鉴定。在分离检测的过程中主要利用电喷雾电离和大气压化学电离技术将待测物中的成分分离出来,在送入质谱检测系统中进行检测,便可以较为精准地测量出母离子的特征碎片。
1 动物药物残留分析简介
常用的兽药残留量检测方法有微生物法和色谱法。前者为筛选方法,该方法的原理是抗原抗体反应,在对动物药物残留进行测定的过程中难以对同类型的药物进行区分。对于禁用兽药(A 类),如硝基呋喃等,残留限度(PED)在4%以下;而禁用兽药(B 类),如磺胺类,残留限度(PED)在3%以下。质谱分析技术可以准确检测食品中的动物药物残留,进而为解决兽药残留问题提供有效的解决途径。
2 液相色谱质谱联用技术在兽药残留检测中的应用
β—内酰胺类在动物医疗中被广泛应用,这种抗生素可以抑制动物细菌性感染,同时还可以对动物体内的细菌细胞合成、抗革兰氏阳性菌等进行阻断隔离,其主要的代表化合物有青霉素、氨苄青霉素。徐伟、耿士伟等利用电喷雾离子阱技术,对牛奶中7种β—内酰胺类抗生素进行了检测,用乙腈提取和沉淀蛋白质,经C18柱净化浓缩后供LC—MS/MS 分析,再利用正离子模式监测,多级离子捕捉器可以提供更多的碎片离子结构信息,获得高灵敏度。使用LC—MS/MS 测量牛奶中的阿莫西林、邻氯青霉素、青霉素G 等,并使用内标物d7—青霉素G,样品经高速离心脱脂后,样品过C18柱(pH 值过柱时大于6),每一种药物选择3 个离子来提高检测的灵敏度。然后他们将这一方法运用到生奶检测中,以青霉素V 为内标,测定了10 种牛乳中β—内酰胺类抗生素的残留检测方法[1]。郭盈岑教授在负离子扫描模式下监测牛肝、肾和肌肉中的6 种青霉素含量,用LC—MS/MS 测定,定量限为50 μg/kg。通过LC—MS/MS 法测定β—内酰胺、皮质激素、氯霉素等药物的实验研究发现,认为液质结合技术是解决兽药残留分析的有效手段[2]。
3 其他药物分析
同时LC—MS/MS 也广泛应用于其他兽药残留检测中。如采用离子阱LC—MS/MS 法检测动物肝脏中的药物残留时,可以发现通过该LC—MS/MS 药剂可以检测出动物肝脏中的克伦特罗、溴布特罗等4 种β—兴奋剂的含量。此外在进行检测过程中,该药剂的检出限达到0.1 μg/kg[3]。用LC—MS/MS 测定动物肝脏中的莱克多巴胺含量时,试验人员首先需要用相关试剂对动物组织中的莱克多巴胺进行提取,使用葡萄糖对所提取的药剂酶解,在酶解过后,需要采用SPE 净化的方式,对所确认的检测试剂进行分析和定量测定[4]。山东大学生物系方秋华教授采用的方法中,猪和牛组织中的莱克多巴胺检出限为1 μg/kg。在检测过程中,需要先对样品进行酶解和双固相萃取净化,再用LC—MS/MS 进行测定[5]。
4 结语
质谱技术作为一种高效的分离和定性、定量准确的检测方法,在兽药残留分析中有着显著优势。在利用质谱技术对兽药残留成分进行分析时,可以发现该技术的预处理工艺较为简单且所需样品量较少,技术人员可以同时对多种药物进行检测。尤其是MRM 模式下,药物试剂的灵敏度通常会比其他检测器高百倍。此外由于LC—MS/MS 的数据谱图受仪器参数类型影响较大,目前尚无标准图库可供检索,因此在全过程扫描中,需要先进行预先检测,再根据药物检测所得出结果绘制出化合物质谱。此外还需在LC—MS/MS 全扫描测定中,严格根据我国现有的标准物质校正方法对化合物的结构进行校正检验。