榆林市散养比利时兔球虫感染情况及种类调查

冯 平，折帅帅，尚 飞，张 艳，翟军军

(榆林学院 生命科学学院，陕西 榆林 719000)

根据世界粮食及农业组织(FAO)的报告，中国是世界上最大的兔产品生产国，中国每年约生产70×104t,兔肉养兔业在全国具有非常重要的经济地位，兔肉产量占全球59.46%,兔毛产量占全球90%以上。比利时兔因被毛有天然光泽、皮张大、皮板柔性和弹性好，备受国内市场青睐。比利时兔的主要优点是体型大，体质健壮，增重快，屠宰率高，尤其以肉味鲜美和皮质好而闻名于世。在我国生产性能表现比其它大型兔好，备受养殖户的欢迎。近年来，国内养殖者将比利时兔进行大面积的围栏放养，训练返祖洞穴繁殖，取得了良好的经济效益。兔球虫病是家兔中最常见的寄生虫病，主要由寄生在肠道和胆管上皮细胞中的艾美尔球虫引起，目前己发现、描述和命名超过25种艾美尔球虫。而通过单卵囊分离技术、球虫的纯培养及分子生物学手段鉴定已确定的兔艾美尔球虫共有11个种[1-3]。在分类上依据其卵囊的形态特征寄生部位及生活史特征，可将其分为大型艾美尔球虫(E.magna)、中型艾美尔球虫(E.media)、穿孔艾美尔球虫(E.perforans)、肠艾美尔球虫(E.intestinalis)、黄艾美尔球虫(E.flavescens)、梨形艾美尔球虫(E.piriformis)、维氏艾美尔球虫(E.vejdovskyi)、斯氏艾美尔球虫(E.stiedai)、无残艾美尔球虫(E.irresidua)、盲肠艾美尔球虫(E.coecicola)、微小艾美尔球虫(E.exigua)。其中斯氏艾美尔球虫、肠艾美尔球虫和黄艾美尔球虫的致病性最强[4-5]。

本试验通过饱和盐水漂浮法和重铬酸钾培养法对榆林市散养比利时兔球虫的感染情况及种类进行调查分析。通过对优势虫种的致病性及所占比例来确定兔球虫病的危害性，结合实际情况与其他地区作比较分析，为榆林市进一步研究、预防该病提供一定的数据参考和理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

随机采集榆林市散养比利时幼龄兔粪便样品21份，成年兔粪便样品33份，每份约14～20 g，分别装于一次性塑料袋中并标记，置4 ℃冰箱待检。

1.2 方 法

1.2.1 粪便检查 用饱和食盐水漂浮法对样品进行处理，在显微镜下观察。观察到球虫虫卵的玻片所对应的样品标记为“+”，没有观察到线虫卵的玻片所对应的样品标记为“-”，以便计算感染率。

借鉴司陶尔虫卵计数法对有球虫虫卵的粪样进行虫卵计数。制作三个样本玻片在10×10倍镜下以“弓”型观察所有视野，三个玻片观察完毕后，将每个玻片观察到的线虫卵进行总和，该试验重复三组取平均数，计算感染强度[6]。

1.2.2 卵囊的收集与培养 采用饱和盐水漂浮法，将每份粪便样本放入干净的烧杯中，并加适量的水捣碎，充分搅拌均匀，用100目筛纱布过滤，滤液以3 000 r/min离心10 min，倒掉上清液取沉淀，用饱和盐水漂浮，经2 000 r/min离心10 min，取上清液1/3～1/2液体，加清水4倍，经3 000 r/min离心10 min，沉积物为收集到的球虫卵囊。将收集的球虫卵囊置于培养皿中，根据培养皿体积加入适量2.5%重铬酸钾溶液混匀，液体深度3～6 mm为宜，置于27 ℃培养箱中培养。每天吹打并摇动平皿两次，保证平皿内有足够氧气[7]。

1.2.3 虫种鉴定 在显微镜40倍镜下观察球虫卵囊的大小、形态、颜色、卵膜孔的有无、内外残体的有无、孢子囊的形态和斯氏体的有无，根据有关资料进行种类鉴定[8-13]。卵囊孢子化后，观察91个孢子化卵囊，统计不同种类球虫卵囊数目并计算不同种类球虫卵囊数占所检查卵囊数的比例。

1.3 数据统计和分析

通过Excel2010软件对检测所得数据进行整理。数据表示:“平均值±标准差”。用SPSS 21.0 软件幼龄兔及成年兔球虫感染强度进行独立样本T检验。(P>0.05表示差异不显著，P<0.05表示差异显著)。

2 结果与分析

本试验共检测54份粪便样品，其中感染样品34份，感染率为62.3%。其中，成年兔样品粪便33份，感染样品19份，感染率是57.6%，感染强度为500；幼龄兔样品粪便21份，感染样品15份，感染率是71.4%，感染强度为800。幼龄兔球虫感染强度显著高于成年兔(P<0.05)。详见表1-2。

本试验共检测出8种球虫，分别为盲肠艾美尔球虫(E.coecicolaCheissin,1947)、纳格浦尔艾美尔球虫(E.nagpurensisGuil et Ray,1966)、斯氏艾美尔球虫(E.stiedaeKiss kalt et Hartmann,1907)、梨形艾美尔球虫(E.piriformisKotlan et Pospesch,1934)、肠艾美尔球(E.intestinalisCheissin,1948)、马氏艾美尔球虫(E.matsubayashiiTsunoda,1952)、小型艾美尔球虫 (E.imeriaexiguaYakimoff,1934)、中型艾美尔球虫(E.mebiaKcsscl,1929)其中盲肠艾美尔球虫、纳格浦尔艾美尔球虫、斯氏艾美尔球虫为优势种，所占比例分别为：25.3%、23.1%、14.3%，详见表3及图1。各虫种幼虫形态学调查详见表4。

表1 不同年龄比利时兔感染结果Table 1 Coccidiosis of Belgian rabbits at different ages

表2 不同年龄比利时兔球虫感染强度差异分析Table 2 Differential analysis of infection intensity of Belgian rabbits in different ages

3 讨 论

球虫病是家兔养殖中常见的一种流行性疾病，患有球虫病的家兔其他疾病的感染机率也会增加，幼龄兔的生长发育受到阻碍，且致死率高，严重时会导致批量死亡，且球虫感染一般为混合感染。本试验结果显示成年兔、幼龄兔均患球虫病，且幼龄兔感染率高于成年兔幼龄，感染强度也显著高于成年兔(P<0.05)。可能是由于外界温度差异较大、刚出生幼龄兔免疫力较低、未做到严格的消毒，导致病菌与幼龄兔之间交叉感染。兔只所排出的含球虫卵囊粪便也会污染圈舍环境、饮食设施等，使幼龄兔接触到球虫卵囊的机率增加，导致幼龄兔比成年兔更易患球虫病。张嘉等[12]对福建某场 20～90 日龄肉兔进行调查，发现以 50 日龄兔球虫感染率最高，粪便中球虫 OPG 值以 40 日龄最高，随后感染率均随日龄增大呈现下降趋势。本次调查结果与张嘉试验结果相似，建议在兔生产中应加强对幼龄兔球虫病的检测和防控。

表3 各种类球虫感染率调查结果Table 3 Results of infection rate of various coccidioides

a.中型艾美尔球虫(E.mebiaKcsscl,1929)b.梨形艾美尔球虫(E.piriformisKotlan et Pospesch,1934) c.斯氏艾美尔球虫 (E.stiedaeKiss kalt et Hartmann,1907) d.纳格浦尔艾美尔球虫(E.nagpurensisGuil et Ray,1966) e.肠艾美尔球虫(E.intestinalisCheissin,1948) f.盲肠艾美尔球虫(E.coecicolaCheissin,1947) g.马氏艾美尔球虫(E.matsubayashiiTsunoda,1952) h.小型艾美尔球虫 (E.imeriaexiguaYakimoff,1934)

吴昌标等[1]研究表明，致病性较强的球虫主要有斯氏艾美尔球虫、肠艾美尔球虫、松林艾美尔球虫和中型艾美尔球虫,其中斯氏艾美尔球虫致病性最强。本试验共检测出8种球虫，其中盲肠艾美尔球虫、纳格浦尔艾美尔球虫、斯氏艾美尔球虫为优势种，所占比例分别为：25.3%、23.1%、14.3%，其中致病性较强的斯氏艾美尔球虫、盲肠艾美尔球虫，本试验结果与吴昌标研究结果相似。建议针对优势虫种制定相应驱虫方案，可提高驱虫效率。

为控制兔球虫病的发生,应做好以下几点工作:改善饲养管理条件以提高兔的非特异性抵抗力；在夏秋两季可在饮水中按时按量投服抗球虫药物注意抗球虫药的轮换使用，避免产生抗药性；在药物预防的同时可应用兔球虫疫苗对兔球虫病进行预防。

表4 幼虫形态学调查结果Table 4 Results of larval morphological investigation