复合微生态制剂对断奶仔猪生长性能与腹泻率、盲肠与粪便微生物、免疫功能的影响

谢大识，李继仁，罗平华

(娄底职业技术学院，湖南 娄底 417000)

由于受到断奶应激的影响，仔猪在断奶后容易发生以肠道黏膜破坏、腹泻、采食量下降、生长停滞、机体抗病力和免疫力降低等为主要特征的“断奶应激综合征”[1-2]。断奶仔猪日粮中添加抗生素可在一定程度上提高断奶仔猪的生长性能和抵抗致病菌能力，在一定程度上缓解“断奶应激综合征”，但抗生素大量过度滥用可导致耐药性、药物残留、环境污染等系列问题，开发并推广应用抗生素替代品已迫在眉睫[3-4]。微生态制剂是一类利用有益微生物及其代谢产物制成的生物活菌制剂，将其作为饲料添加剂具有纯天然、不产生耐药性、不产生环境污染等优点[5-6]。研究表明，微生态制剂能改善肉鸡肠道的微生物菌落平衡，提高肉鸡、仔猪、羔羊、犊牛饲料的消化吸收利用率[7-10]，提高蛋鸡的产蛋量和蛋品质[11]，在畜禽养殖生产中将具有广阔的开发应用前景。本试验旨在研究断奶仔猪日粮中添加不同剂量的复合微生态制剂对断奶仔猪生长性能和腹泻率、盲肠和粪便微生物菌群、免疫功能的影响，为缓解“断奶应激综合征”提供一种实践方法，为微生态制剂在仔猪养殖中的开发与推广应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 复合微生态制剂

复合微生态制剂购自湖北华大某科技有限公司，主要含有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、屎肠球菌、丁酸梭菌四种益生菌，其活菌总数≥1.0×109CFU/g。

1.2 断奶仔猪

150头21日龄健康杜长大三元杂交断奶仔猪由湖南牛妈妈生态农业有限公司提供。

1.3 培养基、试剂盒

EMB琼脂培养基、LBS琼脂培养基、BL琼脂培养基，均购自上海远慕生物科技有限公司；IgG ELISA检测试剂盒、IgA ELISA检测试剂盒、IgM ELISA检测试剂盒、猪白介素-2(IL-2)ELISA检测试剂盒、猪白介素-4(IL-4)ELISA检测试剂盒、猪干扰素-γ(IFN-γ)ELISA检测试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.4 试验整体设计

将150头21日龄健康杜长大三元杂交断奶仔猪完全随机分成5组(对照组、Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组)，每组30头断奶仔猪，每组设3个重复，每个重复10头断奶仔猪。对照组仔猪饲喂基础日粮(日粮组成及营养水平见表1)，Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别在基础日粮中添加100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg、800 mg/kg的复合微生态制剂。所有试验仔猪的日常饲养管理均完全一致，均自由采食和饮水，试验期35 d。

1.5 检测样品的采集

1.5.1 血清样品的采集 试验结束时，对试验仔猪逐头采集血液1.0 mL，将采集的血液依次置于37 ℃放置2 h，4 ℃放置4 h后，5 000 r/min离心5 min，吸取上清液即为待检测的血清样品。

表1 日粮组成及营养水平Table 1 Composition and nutritional level of diet

1.5.2 盲肠与粪便样品的采集 试验结束时，试验仔猪采集血液后，于每个重复中随机挑选4头仔猪，采集所挑选仔猪的新鲜粪便。粪便采集完成后对所挑选的仔猪进行屠宰，无菌采集一段盲肠，各屠宰仔猪的盲肠截取部位均一致。

1.5.3 免疫器官样品的采集 屠宰仔猪的盲肠采集完成后，分别摘取脾脏和肝脏。

1.6 检测指标与方法

1.6.1 生长性能和腹泻率的测定 分别于试验开始和结束时对仔猪空腹称重，计算平均日增重。每天记录饲料消耗量，计算平均日采食量。每天观察仔猪的腹泻情况，计算腹泻率。

平均日增重(g)=(试验末体重-试验初体重)/试验天数

平均日采食量(g)=试验期间饲料消耗总量/试验天数

料重比=平均日采食量/平均日增重

腹泻率(%)=(腹泻仔猪数×腹泻天数)/(试验仔猪总数×试验天数)×100

1.6.2 盲肠和粪便微生物含量的测定 将无菌采集的盲肠(或粪便)准确称量1.0 g，溶解于9.0 mL灭菌生理盐水中，充分混合均匀后吸取1.0 mL溶解于9.0 mL灭菌生理盐水中，按照此种方法依次进行10-8倍稀释。取10-5～10-7倍的稀释液各0.1 mL分别接种EMB琼脂培养基于37 ℃放置24 h进行大肠杆菌的分离培养并计数。取10-7～10-9倍的稀释液各0.1 mL分别接种LBS琼脂培养基于37 ℃放置48 h进行乳酸杆菌的分离培养并计数。取10-6～10-8倍的稀释液各0.1 mL分别接种BL琼脂培养基于37 ℃放置48 h进行双歧杆菌的分离培养并计数。盲肠(或粪便)微生物含量以培养基菌落数量的对数表示，lg(CFU/g)。

1.6.3 免疫功能检测指标的测定 对采集的脾脏、肝脏进行称重，计算脾脏指数和肝脏指数。

免疫器官指数(g/kg)=免疫器官重量/体重

1.7 数据统计与分析

试验数据采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析和多重比较，结果以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 生长性能和腹泻率的测定结果

如表2所示，Ⅰ组与对照组相比较，平均日增重提高了1.51%(P<0.05)，腹泻率降低了33.07%(P<0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组与对照组相比较，平均日增重分别提高了3.17%、3.45%、2.91%，且差异显著(P<0.05)；平均日采食量分别提高了0.75%、1.08%、0.58%，且差异显著(P<0.05)；料重比均降低了1.99%(P<0.05)；腹泻率分别降低了42.19%、53.91%、39.84%，且差异显著(P<0.05)。Ⅲ组与Ⅱ组、Ⅳ组相比较，腹泻率分别降低了20.27%、23.38%，且差异显著(P<0.05)。该结果表明断奶仔猪基础日粮中添加复合微生态制剂能够提高断奶仔猪的生长性能，降低腹泻率，以400 mg/kg添加剂量的作用效果最佳。

表2 生长性能和腹泻率的测定结果Table 2 Test results of growth performance and diarrhea rate

2.2 盲肠和粪便微生物含量的测定结果

如表3所示，试验Ⅰ组与对照组相比较，盲肠乳酸杆菌数提高了2.19%(P<0.05)，粪便大肠杆菌数降低了2.04%(P<0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组与对照组相比较，盲肠大肠杆菌数分别降低了2.16%、3.30%、2.59%，且差异显著(P<0.05)；盲肠乳酸杆菌数分别提高了4.25%、6.32%、4.50%，且差异显著(P<0.05)；盲肠双歧杆菌数分别提高了2.05%、2.87%、1.91%，且差异显著(P<0.05)；粪便大肠杆菌数分别降低了3.94%、4.82%、4.09%，且差异显著(P<0.05)；粪便乳酸杆菌数分别提高了2.47%、3.45%、2.71%，且差异显著(P<0.05)；粪便双歧杆菌数分别提高了2.51%、2.93%、2.79%，且差异显著(P<0.05)。Ⅲ组与Ⅱ组、Ⅳ组相比较，盲肠乳酸杆菌数分别提高了1.98%、1.74%，且差异显著(P<0.05)。该结果表明断奶仔猪基础日粮中添加复合微生态制剂能够改善断奶仔猪的肠道微生物菌群平衡，以400 mg/kg添加剂量的作用效果最佳。

表3 盲肠和粪便微生物含量的测定结果Table 3 Determination results of cecum and fecal microbial content lg(CFU/g)

2.3 免疫功能检测指标的测定结果

如表4所示，试验Ⅰ组与对照组相比较，IgG含量和IL-2含量分别提高了8.09%和3.76%(P<0.05)，且差异显著(P<0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组与对照组相比较，脾脏指数分别提高了12.31%、16.41%、12.82%，且差异显著(P<0.05)；IgG含量分别提高了15.18%、22.85%、15.68%，且差异显著(P<0.05)；IgA含量分别提高了7.53%、9.41%、7.76%，且差异显著(P<0.05)；IL-2含量分别提高了9.04%、11.58%、9.55%，且差异显著(P<0.05)；IL-4含量分别提高了1.62%、1.74%、1.65%，且差异显著(P<0.05)；IFN-γ含量分别提高了1.95%、2.44%、2.35%，且差异显著(P<0.05)。Ⅲ组与Ⅱ组、Ⅳ组相比较，IgG含量分别提高了6.66%、6.21%，且差异显著(P<0.05)。该结果表明断奶仔猪基础日粮中添加复合微生态制剂能够提高断奶仔猪的免疫功能，以400 mg/kg添加剂量的作用效果最佳。

表4 免疫功能检测指标的测定结果Table 4 Test results of immune function test indexes

3 讨 论

3.1 复合微生态制剂对断奶仔猪生长性能和腹泻率的影响

复合微生态制剂进入仔猪体内后能够产生大量的纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶等多种消化酶以及大量氨基酸和维生素等，能够增强营养物质的消化吸收利用率，提高饲料转化利用率，增强肠道的消化吸收功能，提高仔猪生长性能并降低腹泻率。陈勇等[8]研究表明，复合微生态制剂能显著提高仔猪对营养物质的表现消化率，提高仔猪的生产性能。杨红萍等[12]研究表明，断奶仔猪饲料中添加500 mg/kg、1 000 mg/kg、2 000 mg/kg的复合微生态制剂均能显著提高仔猪的养分表观消化率。本研究中以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、屎肠球菌、丁酸梭菌四种益生菌为主要成份的复合微生态制剂均能够显著提高断奶仔猪的生长性能，降低腹泻率，研究结果与上述研究结果表现出了一致性。但不同研究学者在断奶仔猪日粮中复合微生态制剂的最适添加剂量之间存在较大差异，陈勇等[8]研究表明复合微生态制剂添加剂量为1 000 mg/kg时效果较好，杨红萍等[12]研究表明2 000 mg/kg添加剂量的复合微生态制剂作用效果最为显著，而本研究结果表明复合微生态制剂400 mg/kg添加剂量的作用效果最佳，分析不同研究结果产生的原因可能为：不同研究中的复合微生态制剂的主要成份、活菌数量、仔猪品种与饲养条件等方面均存在差异，故对于复合微生态制剂的选择应根据复合微生态制剂主要成份与活菌数量、自身猪场养殖条件等合理确定最适添加剂量。

3.2 复合微生态制剂对断奶仔猪盲肠和粪便微生物的影响

正常情况下动物肠道内各种微生物菌群处于一种微生态平衡中，仔猪在断奶前后由于饮食、饲养等环境的急剧改变，极易诱发由断奶应激导致的肠道微生物菌落失衡，导致大肠杆菌等有害菌的数量增加，乳酸杆菌等有益菌的数量减少，导致仔猪的肠道功能迅速降低，极易诱发各种疾病[13-14]。本研究中，复合微生态制剂均能够提高断奶仔猪盲肠和粪便中乳酸杆菌等有益菌的数量，降低断奶仔猪盲肠和粪便中大肠杆菌等有害菌的数量，表明复合微生态制剂能够改善断奶仔猪的肠道微生物菌群平衡。分析该试验结果产生的原因，可能为复合微生态制剂中的活菌以及代谢产物进入仔猪肠道后能够通过竞争肠粘膜定植位点、降低肠道环境pH等方式扶持乳酸杆菌等有益菌的生长繁殖，抑制大肠杆菌等有害菌的生长，调节和优化肠道的微生物菌群平衡。同时，本研究中结果还显示复合微生态制剂400 mg/kg添加剂量的作用效果明显好于100 mg/kg、200 mg/kg、800 mg/kg添加剂量的作用效果，分析该试验结果产生的原因，可能为断奶仔猪肠道对复合微生态制剂中的活菌以及代谢产物的吸收利用具有一个阈值，超过该阈值后的复合微生态制剂中的活菌以及代谢产物无法被断奶仔猪吸收利用，故对于本研究中的复合微生态制剂而言，临床中添加400 mg/kg即可。

3.3 复合微生态制剂对断奶仔猪免疫功能的影响

脾脏是动物最大的免疫器官，是产生抗体、补体等免疫物质的最主要器官；肝脏是最主要的免疫器官，是解毒和清除病原菌的重要器官[15]。本研究选择脾脏和肝脏免疫器官指数，IgG、IgA、IgM免疫球蛋白含量，IL-2、IL-4、IFN-γ细胞因子含量作为检测指标分别从免疫器官功能、体液免疫功能、细胞免疫功能3个方向全面研究探讨复合微生态制剂对断奶仔猪免疫功能的影响。研究结果表明，复合微生态制剂在提高断奶仔猪免疫器官功能，提高断奶仔猪体液免疫功能，提高断奶仔猪细胞免疫功能等方面均表现出了良好的作用效果，以添加剂量为400 mg/kg时作用效果最好。

4 结 论

在断奶仔猪基础日粮中添加100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg、800 mg/kg复合微生态制剂均能够提高断奶仔猪的生长性能，降低腹泻率，改善肠道微生物菌群平衡，提高断奶仔猪的免疫功能，以添加400 mg/kg效果最好。