育发类化妆品中甾体激素含量的不确定度评价

付金凤，朱晓雯

(常州市食品药品监督检验中心，江苏 常州 213000)

随着现代生活节奏日益加快，社会压力与日俱增，生态环境逐渐恶化，脱发患者越来越多，各种标识具有防脱、生发功效的育发类化妆品也应运而生。然而，部分不法商家为获取利润，盲目追求产品的有效性，向其中非法添加甾体类激素成分。甾体激素中的糖皮质激素，如氢化可的松、醋酸曲安奈德等，在临床中常被用于治疗斑秃，而雌性激素，如雌酮，黄体酮等具有促进毛发生长的作用，已被临床应用于治疗雄性激素源脱发。但甾体激素具有一定程度的毒副作用，雌性激素有潜在的致癌风险，糖皮质激素会引起向心性肥胖，感染等[1-3]。《化妆品安全技术规范》(2015年版)[4]中明确规定禁止在化妆品中添加上述几种药物。

本研究采用液质联用法对育发化妆品中氢化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黄体酮含量进行测定，参考JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[5]，对育发类化妆品中上述四种成分检测的不确定度进行分析与评价，以期为育发类化妆品非法添加检测提供参考与依据。

1 实 验

1.1 仪 器

Shimadzu LCMS-8050液质联用仪，Shimadzu公司；XPE105电子天平(d=0.01 mg)，Mettler-Toledo公司；计量检定合格的A级玻璃量器。

1.2 试 剂

氢化可的松(100152-201707，99.2%)；雌酮(100849-200501)；醋酸曲安奈德(100125-201406，99.1%)；黄体酮(100027-201810，99.6%)，以上标准品均购自中国食品药品检定研究院；样品为霸王育发液(KM11H8)。

1.3 仪器分析条件

色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(2.1×100 mm，3.5 μm)，流动相A：0.2%甲酸水溶液，流动相B：甲醇(含0.2%甲酸)，柱温30 ℃，流速0.3 mL/min，梯度洗脱程序：0～2 min：5%～25%B，2～4 min：25%～55%B，4～11 min：55%～80%B，11～18 min：80%～90%B。以三重四极杆串联质谱仪检测，电喷雾离子源(ESI)，扫描方式：正离子扫描，检测方式：MRM。

1.4 混合标准储备溶液的制备方法

精密称取氢化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黄体酮标准品各10 mg，置10 mL量瓶中，加入甲醇使溶解，稀释定容，得混合标准储备溶液Ⅰ(1 mg/mL)。精密吸取标准储备溶液Ⅰ 5 mL，置100 mL量瓶中，90%乙腈稀释定容，得标准储备溶液Ⅱ(50 μg/mL)。精密吸取标准储备溶液Ⅱ 1 mL，置50 mL量瓶中，90%乙腈稀释定容至刻度，得标准储备溶液Ⅲ(1 μg/mL)。

1.5 混合标准系列溶液的制备方法

用1 mL、1 mL、5 mL、1 mL、2 mL移液管精密吸取标准储备溶液Ⅲ至100 mL、50 mL、100 mL、10 mL、10 mL量瓶中，用1 mL、1 mL、3 mL移液管精密吸取标准储备溶液Ⅱ至100 mL、50 mL、100 mL量瓶中，用90%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，得到浓度为10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0、1500.0 ng/mL的混合标准系列溶液。

1.6 供试品溶液的制备方法

精密称取本品1 g(精确到0.001 g)于10 mL容量瓶中，加入1 mL饱和氯化钠溶液，涡旋30 s后加入乙腈，定容至刻度，涡旋30 s，超声提取30 min，涡旋1 min，4500 rpm离心5 min，取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为待测液备用。

1.7 测定方法

精密吸取上述混合标准系列溶液及供试品溶液各5 μL，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定峰面积，以标准曲线法计算供试品中相当于氢化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黄体酮标准品的浓度。

2 结果与讨论

2.1 数学模型

式中：ω为化妆品中4种甾体激素的质量分数，ng/g；D为样品稀释倍数(不稀释则为1)；ρ从标准曲线得到待测组分的质量浓度，ng/mL；V为样品定容体积，mL；m为样品取样量，g。

2.2 不确定度来源分析

由上述数学模型可知，不确定度来源主要包括：标准溶液引入的不确定度、供试品溶液引入的不确定度、实验仪器及环境引入的不确定度[7-9]。

2.3 不确定度分量的评定

2.3.1 供试品制备过程引入的不确定度

(1)供试品称量过程

表1 样品称量引入的不确定度

(2)供试品稀释过程

2.3.2 标准品溶液制备过程引入的不确定度

(1)标准品称量过程引入的相对不确定度

表2 标准品称量引入的不确定度

(2)制备标准系列溶液的玻璃器皿引入的相对标准不确定度

表3 标准系列溶液配制引入的不确定度

标准系列溶液浓度为：10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0、1500.0 ng/mL，配制过程中引入的相对不确定度分别0.00637、0.00637、0.00522、0.00645、0.00579、0.00481、0.00481、0.00389，取其中最大的不确定度值，则urel(v0)=0.00645。

2.3.3 液质联用仪引入的不确定度

2.3.4 样品前处理引入的不确定度

表4 样品前处理引入的不确定度

2.4 样品的合成标准不确定度、扩展不确定度及结果表述

表5 不确定度分量及合成相对标准不确定度

样品的合成标准不确定度为：u(Cx)=C×urel(Cx)，在95%的置信区间下，取包含因子k=2，则扩展不确定度为：U(Cx)=k×u(Cx)，样品中四种甾体激素含量见表6。

表6 样品合成标准不确定度、扩展不确定度及结果表述

3 结 论

本研究对育发类化妆品中非法添加甾体激素类成分检测的不确定度进行了较为全面的分析，由表5可知，标准品称量、标准曲线系列溶液的配制、仪器进样精密度及样品回收率对不确定度贡献较大。因此，在实验过程中，应定期对电子天平及液质联用仪进行检定和维护保养，对玻璃器皿进行校准，对实验操作人员进行专业培训与考核，对检测过程进行严格的质量控制，尽量减少实验过程中的不确定性，以提高检测结果的准确度和可靠性[13-14]。