浙江省供精者精液分析参考区间的建立

吴 颖， 宋银莉， 沈晓芳

（浙江省妇幼和生殖保健中心，浙江 杭州 310012 ）

临床实验室需建立精液分析参考区间，但参考区间会受多种因素影响而产生差异。例如：人群个体之间可能会存在较大的生物学变异，特别是我国地域广阔，会存在地域性差异[1]；采用不同检测方法检测相同项目，参考区间不同[2-3]。在各种对精液质量的研究中，精液检查方法各不相同，有的使用精子动力分析仪，有的是人工分析；另外，大多临床实验室且缺少对仪器的质量控制和检验工作人员的标准化操作规程培训。这些都是造成目前精液分析结果不一致的重要原因。

2010年，世界卫生组织（World Health Organization，WHO）第5版《人类精液检查与处理实验室手册》（简称WHO第5版）[4]对正常生育男性精液参考区间进行了修订，确定的精液分析参考区间与前一级数据[5]有较大差异，在临床医生中引起困扰。有学者认为，WHO第5版数据来源大部分都是白种人，黄种人数据极少，不能直接用于中国人群。

临床实验室应建立自己的参考区间，而不是简单套用文献给定的参考区间。建议临床各实验室根据其使用的检测方法，建立适用于自己实验室的精液分析参考区间，为临床诊断、治疗、监测提供可靠的实验依据。

本研究是以浙江省人类精子库供精志愿者（简称供精者）作为研究对象，建立浙江省健康人群精液分析参考区间。

1 材料和方法

1.1 一般资料

收集2017年1月—2019年8月到浙江省人类精子库进行初筛的供精者精液标本4 122份，供精者年龄22～45岁，平均28.6岁。职业分布：学生占18.2%，职员占81.8%。根据不同年龄分为3组：20～29岁组3 383例，占82%；30～39岁组665例，占16%；40～45岁组74例，占2%。本研究所有对象均签署知情同意书，并经其他辅助检查，无传染病史、无遗传病家族史，一般体格检查及生殖器检查均无异常。

1.2 方法

按WHO第5版要求，对所有初次筛查供精者禁欲3～7 d，手淫法取精后，于37 ℃恒温箱内自然液化；精液体积测量采用称重法；精子浓度、前向运动精子百分比采用MAKLER精子计数板手工计数法，计数超过200个精子后，计算其精子浓度和前向运动精子百分比；精子形态学染色采用WHO第5版巴氏染色法，形态分析标准采用WHO第5版标准。

1.3 质量控制

所有实验技术人员参加WHO第5版手册操作方法标准化培训，要求实验室室内质控和室间质评达标。本研究所有精液分析均由同组实验技术人员完成。形态学涂片由同组实验技术人员进行评估。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析。根据WHO第5版方法，数据分布采用百分位数进行描述，每项精液分析数值与WHO第5版中表A1-2中数值进行比较。

2 结果

2.1 基本情况

先对4 122份精液标本的各项数据进行正态性检验，其中精液体积、精子正常形态率均呈近似正态分布，精子总数、精子浓度、前向运动精子百分比呈非正态分布。因此，采用非参数百分位法描述2017年1月—2019年8月初筛供精者精液分析数值分布，并按美国临床实验室标准化协会C28-A2文件要求建立参考区间。出于对检测项目临床意义的考虑，不考虑性别、年龄因素。由于精液分析结果判读的特殊性，各项精液分析数值只有降低才有意义。因此，本研究按WHO第5版要求，取P5单侧作为参考区间。

2.2 精液体积参考区间

本室精液体积参考区间为≥1.8 mL，略高于WHO第5版P5参考值（1.5 mL），数值百分位分布与WHO第5版大致相同，偏差幅度很小。不同年龄组中，＞40岁组与其他2组相比，精液体积在低百分数上（P5以下）显著下降。见表1。

表1 精液体积参考区间比较 mL

2.3 精子总数参考区间

本研究精子总数参考区间为≥51×106/次射精，高于WHO第5版P5参考值（39×106/次射精），数值百分位分布与WHO第5版有差异，越是高百分位数数值差异越大，特别是在P50以上。不同年龄组中，40～45岁组与其他2组相比，精子总数在低百分数上（P5以下）显著下降。见表2。

表2 精子总数参考区间比较 ×106/次射精

2.4 精子浓度参考区间

本研究精子浓度生物参考区间为≥16×106/mL，略高于WHO第5版P5参考值（15×106/mL），数值百分位分布与WHO第5版有所差异，且越是高百分位数数值差异越大，特别是在P50以上。不同年龄组中，40～45岁组与其他2组相比，精液浓度在低百分数上（P5以下）显著下降。见表3。

表3 精子浓度参考区间比较 ×106/mL

2.5 PR精子百分比参考区间

本研究PR精子百分比参考区间为≥20%，显著低于WHO第5版P5参考值（32%），数值百分位分布与WHO第5版相比也整体偏低。不同年龄组中，40～45岁组与其他2组相比，精液浓度在低百分数上（P25以下）显著下降。见表4。

表4 PR精子百分比参考区间比较 %

2.6 精子正常形态率参考区间

本研究精子正常形态率参考区间为≥5%，略高于WHO第5版P5参考值（5%），数值百分位分布与WHO第5版大致相同，偏差幅度很小。不同年龄组中，精子正常形态率之间无显著性差异。见表5。

2.7 精液pH值参考区间

本研究精液p H值参考区间（取P2.5～P97.5）为7.4～8.6。不同年龄组中，精液pH值之间无显著性差异。见表6。

表5 精子正常形态率比较 %

表6 本研究精液pH值

3 讨论

临床需知道精液检查结果是否“正常”，而“正常”的这个词可以有多种解释。根据MURPHY[6]的定义，“正常”精子浓度可能指：由均值定义最有代表性的精子浓度；由参考区间定义最常见精子浓度（实验室参考区间）；表明有生殖能力的精子浓度；委员会达成共识的精子浓度；理想精子浓度。在WHO第5版中，正常参考区间来源于特殊参考人群：近12个月内使配偶妊娠的男性，那么这个参考区间应为该特殊人群所用，且可能与普通人群参考区间不同[7]。

精液质量差异不仅在不同国家、不同民族之间存在，即使在同一国家不同地方也有显著差异。有学者[8]对来自4个欧洲城市（哥本哈根、巴黎、爱丁堡和图尔库）的1 082名可育男性精液样本进行了研究，结果发现这4个城市可育男性精子浓度、精子活力和精子总数间均有显著性差异。IWAMOTO等[9]对来自日本4个地区（札幌、大阪、金泽和福冈）792名可育男性进行精液质量分析，发现该地区可育男性精液质量非常好，可与欧洲地区可育男性精液质量相媲美；而在他的另一项研究中，对来自日本另外4个地区（川崎、大阪、金泽和长崎）1 559名青年男性进行精液质量分析，发现该地区有相当一部分青年男性精液质量下降[10]。哥本哈根4 867名男性精液分析横断面研究结果表明，1996—2010年间，该地区男性精子浓度和精子总数有所增加，而活动精子和异常形态精子没有变化[11]。这一研究结果与人们通常认为的20世纪以来人类精液质量下降并不一致[12-13]。因此，了解特定地区精液质量情况具有重要意义，不仅可为该地区提供更可靠的男性生殖健康资料，也可为健康教育方案的制定提供良好参考。

本调查中样本来源于浙江省人类精子库供精者，与WHO第5版参考区间比较后发现，浙江省健康男性精液体积、精子总数、精子浓度和精子正常形态率均达到或超过WHO第5版参考区间下限，PR精子百分比则明显低于WHO第5版参考区间下限，这一结果与耿可亭等[14]、李玉山等[15]、石汉振等[16]的实验结果相类似；而与黄静等[17]的实验结果不一致。这也进一步说明了各临床实验室建立本实验室生物参考区间的必要性和重要性。

本研究健康男性各项精液分析数值百分位分布与WHO第5版有所差异，且越是高百分位数数值差异越大，特别是在P50以上。其中，精液体积偏差幅度最小，偏差幅度由大到小居前3位分别是精子总数上限，精子浓度上限和精子正常形态率上限。产生这一变化的可能原因是人种差异：WHO第5版数据来源主要是西方白种人，黄种人数据来源非常少，目前也没有相关学者对这2个人种进行精液质量对照研究。希望本研究能为今后各实验室建立中国男性精液质量参考区间提供参考。