miRNA-409-3p/Beclin-1信号轴在小细胞肺癌化疗耐药的作用及分子机制研究*

韩忠诚，苏莹，张玲玲，柳江，徐腾飞

830000 乌鲁木齐，新疆维吾尔自治区人民医院 肿瘤科(韩忠诚、苏莹、张玲玲、柳江);848000 新疆 和田，新疆维吾尔自治区人民医院皮山医院 全科医疗科(徐腾飞)

肺癌是目前世界范围内严重的公共健康卫生问题。小细胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)约占所有确诊肺癌的17%，其恶性程度高，转移速度快，患者5年生存率低于10%[1]。目前，化疗依旧是SCLC治疗的重要手段，而依托泊苷(VP16)和顺铂(DDP)的药物联合(VP16-DDP)则是临床应用最广的化疗方案[2]。临床研究显示，SCLC患者在治疗期间耐药速度快，且耐药患者早期复发率高，5年生存率低于5%[3]。因此，探究SCLC对VP16-DDP的耐药机制，提高VP16-DDP的治疗效果，是临床亟待解决的重要问题。近年研究发现，miRNA与肿瘤化疗耐药密切相关。例如，申利等[4]发现miRNA-409-3p可增加宫颈癌对DDP化疗的敏感性；Cheng等[5]发现miRNA-409-3p通过阻断Fip200介导的自噬，增强卵巢癌细胞对DDP的化疗敏感性。这些研究提示，miRNA-409-3p与肿瘤自噬及化疗耐药密切相关。但miRNA-409-3p在SCLC细胞自噬及耐药机制中的作用尚未见报道。Tan等[6]研究发现，miRNA-409-3p通过靶向Beclin-1影响结肠癌细胞的自噬作用和对奥沙利铂的药物敏感性。Beclin-1是哺乳动物特有的自噬相关蛋白，包括N端BH3结构域、中心卷曲螺旋结构域(coiled-coil domain,CCD)和进化保守结构域(evolutionarily conserved domain,ECD)。其中CCD域可与Beclin-1调节自噬相关基因中的激活分子相互作用，而ECD和CCD域则与Beclin-1下游通路PI3KC3/Vps15相互作用，以此调控肿瘤的自噬及发生发展[7]。研究显示，Beclin-1在耐药SCLC细胞中表达显著增高[8]，且DDP治疗后Beclin-1表达上调，导致肿瘤细胞自噬活性增强，进而提高了肿瘤细胞的耐药性[9]。这说明Beclin-1与SCLC细胞的耐药密切相关。因此，本研究通过探究miRNA-409-3p与Beclin-1在VP16-DDP耐药SCLC细胞中的表达，阐明miRNA-409-3p与Beclin-1的靶向关系及SCLC的耐药机制，以期为克服SCLC耐药提供实验参考依据。

1 材料与方法

1.1 组织样本、细胞株及主要试剂

15例耐药肿瘤组织样本和15例药物敏感性肿瘤组织样本，均来自我院于2017年5月至2019年5月收治的SCLC病例。所有患者均以4～8疗程EP方案化疗为主(VP16：100 mg/m2,DDP：60 mg/m2)。SCLC患者根据RECIST 1.1实体瘤疗效判定标准判断治疗敏感性：完全缓解(complete response,CR)、部分缓解(partial response,PR)、稳定(stable disease,SD)和进展(progressive disease,PD)。化疗结束6个月后，判定化疗效果。VP16-DDP化疗敏感患者是化疗结束后6个月未出现肿瘤复发(CR+PR+SD)；VP16-DDP化疗耐药患者为肿瘤在化疗过程中出现进展，或化疗结束后6个月出现肿瘤复发。所有患者年龄在45～65岁，其中男性23例，女性7例。术后病理诊断皆为SCLC，术前未行化疗或放疗，且所有患者均已签署知情同意书。本研究试验获得本院伦理委员会的批准(批号：KY2019051518)。组织样本均保存于-80℃。人SCLC细胞系SBC-5购自中国科学院上海细胞生物学研究所。DMEM培养基、胎牛血清、胰酶、实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)试剂盒购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司。Trizol试剂购自上海联迈生物工程有限公司。GFP-LC3慢病毒质粒购自上海兴拓生物医药科技有限公司。mimic NC和miRNA-409-3p mimic由Genepharma公司合成。pcDNA3.1质粒购自云舟生物科技有限公司。LipofectamineTM2000购自美国Invitrogen公司。CCK8检测试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司。BCA 蛋白定量试剂盒购自中国晶彩生物科技有限公司。双荧光素酶活性检测试剂盒北京平皓生物技术有限公司。Beclin-1抗体、LC3I、LC3II、P26、PI3KC3和Vpsl5抗体购自Abcam公司，二抗(羊抗兔)购自美国CST公司。3-MA(PI3KC3抑制剂)购自美国Sigma公司。

1.2 细胞培养、转染及分组

SBC-5细胞用含有15%胎牛血清的DMEM培养基在37 ℃、5% CO2的条件下于培养箱中培养。人SCLC VP16-DDP耐药细胞株为本课题组采用逐步升高药物浓度的方法构建：体外逐步增加VP16(初始作用浓度：0.05 μg/mL)与DDP(初始作用浓度：0.01μg/mL)维持作用浓度 ，连续诱导培养SBC-5细胞13个月，VP16-DDP耐药的SBC-5细胞可稳定耐受1.5 μg /mL的VP16和1.25 μg /mL的DDP。耐药细胞命名为SBC-5/EP，与亲本细胞相对应。SBC-5/EP细胞用含有15%胎牛血清的DMEM培养基在37 ℃、5% CO2的条件下于培养箱中培养，每1～2 d更换培养基，并加入相应浓度药物。将Beclin-1基因序列克隆进入pcDNA3.1载体。SBC-5/EP细胞转染前一天胰酶消化计数，以每孔3.5×106个SBC-5/EP细胞接种于6孔板内过夜培养。根据LipofectamineTM2000转染试剂说明书将40 ng的miRNA-409-3p mimic(mimic组)、mimic NC(mimic NC组)分别转染SBC-5/EP细胞，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养24 h，更换新鲜培养基。将45 ng的pcDNA3.1空载体和pcDNA3.1-Beclin-1质粒分别转染SBC-5/EP细胞(已转染miRNA-409-3p mimic)，分别标记为mimic pc组和mimic-pc-Beclin-1组，将转染的细胞置于37℃、5% CO2的培养箱中培养24 h后，更换新鲜培养基。将5 mM的3-MA作用mimic-pc-Beclin-1组细胞20 h，更换新鲜培养基，标记为mimic-pc-Beclin-1-3-MA组。

1.3 qRT-PCR

Trizol试剂提取细胞的RNA，紫外分光光度计检测RNA含量。反转录实验流程根据qRT-PCR试剂盒说明进行。将逆转录产物进行qRT-PCR检测，反应体系为：cDNA模板2 ng，上下游引物各0.4 μL(表1)，SYBR Primix Ex TaqTM 5 μL，ddH2O补充至10 μL。扩增结果根据2-△△Ct法计算miRNA-409-3p和Beclin-1 mRNA的相对表达量。

表1 qRT-PCR引物序列Table 1. Primer Sequences in qRT-PCR

1.4 Western blot

蛋白提取裂解液裂解细胞，利用BSA法检测细胞蛋白浓度。SDS-PAGE凝胶电泳分离等量蛋白后转膜。利用5%脱脂牛奶4℃封闭1 h，加鼠抗人的Beclin-1、LC3I、LC3II、P62、PI3KC3和Vps15抗体(1∶3000)摇床4℃孵育过夜，TBST洗膜5 min，4次，加入HRP标记的兔抗鼠二抗(1∶2 000)37 ℃孵育1 h，TBST洗膜5 min，4次。显影曝光，通过Image-Pro Plus系统分析蛋白条带灰度值。

1.5 克隆形成实验

胰酶消化细胞，完全培养基重悬细胞后计数。以每孔1 000个细胞接种于6孔板内，置于37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中培养，每3天更换培养基并观察细胞，且在6孔板底部对单克隆细胞标记。培养9天后观察细胞，弃上清，PBS洗涤细胞2次，加入1 mL 4%多聚甲醛，4℃固定细胞1 h，PBS洗涤细胞3次，加入1 000 μL结晶紫染色液作用细胞2 min，ddH2O洗涤细胞3次，晾干后拍照且计数。

1.6 荧光素酶活性分析实验

Beclin-1的3’UTR WT/MUT分别克隆至荧光素酶报告载体pmirGLO载体。miRNA-409-3p mimic和mimic NC分别与pmirGLO-Beclin-1-WT或pmirGLO-Beclin-1-MUT共转染HuH-6细胞。48 h后收取处理细胞，通过荧光素酶活性检测试剂盒检测荧光素酶的活性。

1.7 GFP-LC3绿色荧光融合蛋白实验

慢病毒GFP-LC3质粒转染细胞24 h，PBS洗涤细胞3次，3.7%的甲醛中固定20 min,PBS洗涤3次，甘油固定细胞，荧光显微镜下观察细胞荧光斑点。

1.8 流式细胞术

将转染细胞胰酶消化离心，收集细胞后预冷的PBS洗涤细胞。避光条件下，加入FITC-Annexin V和碘化丙钠，静置15 min，加入Binding Buffer混匀置于冰上，利用流式细胞仪检测细胞凋亡。

1.9 MTT实验

胰酶消化SBC-5细胞、未转染的SBC-5/EP细胞和已转染的SBC-5/EP细胞，培养基重悬细胞计数。以3×104个/孔接种至96孔板，待细胞生长融合至65%时，按1.2方法进行细胞转染。培养72 h后，每孔加入20 μL 的MTT溶液，在37°C，5% CO2的培养箱中孵育4 h后，弃上清，每孔加入150 μL的DMSO，振荡10 min使结晶物溶解。置于自动酶标仪内，检测在490 nm波长的吸光度。

1.10 统计学处理

实验数据采用SPSS 20.0软件进行分析，实验均重复三次，数据表示均为平均值±标准差。利用GraphPad Prism 6软件制图。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 miRNA-409-3p和Beclin-1在VP16-DDP耐药SCLC组织和SCLC细胞SBC-5细胞中的表达情况

qRT-PCR实验结果显示，VP16-DDP耐药的SCLC组织中miRNA-409-3p的表达显著低于VP16-DDP敏感的SCLC组织(P<0.01)，见图1A；VP16-DDP耐药的SCLC组织中Beclin-1的表达显著高于VP16-DDP敏感的SCLC组织(P<0.01)，见图1B。我们建立了VP16-DDP耐药的SBC-5细胞(SBC-5/EP)。SBC-5/EP细胞中miRNA-409-3p的表达显著低于SBC-5细胞(P<0.05)，见图1C；SBC-5/EP细胞中Beclin-1的表达显著高于SBC-5细胞(P<0.05)，见图1D。Western blot实验结果显示，SBC-5/EP细胞中Beclin-1的蛋白表达水平显著高于SBC-5细胞(P<0.05)，见图1E。

图1 miRNA-409-3p和Beclin-1在耐药小细胞肺癌组织和耐药SBC-5/EP细胞系中的表达Figure 1. Expression of miRNA-409-3p and Beclin-1 in Drug-Resistant Small Cell Lung Cancer and Drug-Resistant SBC-5/EP Cell LineA. Expression of miRNA-409-3p in drug-resistant small cell lung cancer and drug-sensitive small cell lung cancer (compared with drug-sensitive small cell lung cancer, **P<0.01); B. Expression of Beclin-1 in drug-resistant small cell lung cancer and drug-sensitive small cell lung cancer (compared with drug-sensitive small cell lung cancer, **P<0.01); C. Expression of miRNA-409-3p in drug-resistant SBC-5/EP cell line and drug-sensitive SBC-5/EP cell line (compared with the SBC-5 cell, △P<0.05); D. Expression of Beclin-1 in drug-resistant SBC-5/EP cell line and drug-sensitive SBC-5/EP cell line (compared with SBC-5 cell, △P<0.05); E. The level of Beclin-1 protein in drug-resistant SBC-5/EP cell line and drug-sensitive SBC-5/EP cell line (compared with the SBC-5 cell, @P<0.05).

2.2 SBC-5/EP细胞自噬作用增强

Western blot实验结果显示，SBC-5/EP细胞中的LC3II/LC3I的比值升高，P62蛋白表达显著低于SBC-5细胞(P<0.01)，见图2A。MTT检测结果显示，SBC-5/EP细胞的IC50值明显高于SBC-5细胞(P<0.05)，见图2B。GFP-LC3绿色荧光融合蛋白实验显示，SBC-5细胞中出现绿色斑点，而SBC-5/EP细胞中出现明亮的绿色荧光小点，表明SBC-5/EP细胞自噬增强，见图2C。克隆形成实验结果显示，SBC-5/EP细胞的增殖能力显著高于SBC-5细胞(P<0.05)，见图2D。

图2 VP16-DDP耐药的SBC-5细胞自噬作用增强Figure 2. Enhanced Autophagy in VP16-DDP-Resistant SBC-5 CellsA. Western blot was used to detect the effect of VP16-DDP on autophagy-related protein LC3I, LC3II and P62 (compared with the SBC-5 cell, **P<0.01); B. MTT assay was used to detect the effect of VP16-DDP on cell viability (compared with the SBC-5 cell, △P<0.05); C. GFP-LC3 dot formation was used to detect the effect of VP16-DDP on punctate GFP+ cells; D. Colony formation assay was used to detect the effect of VP16-DDP on cell proliferation (compared with the SBC-5 cell, @P<0.05).

2.3 miRNA-409-3p靶向抑制Beclin-1的表达

通过将miRNA-409-3p mimic和mimic NC分别转染SBC-5/EP细胞，检测miRNA-409-3p对Beclin-1表达的影响。qRT-PCR及Western blot实验结果显示，与mimic NC相比，miRNA-409-3p抑制Beclin-1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)，见图3A、3B。通过靶基因预测网站TargetScan进行生物学信息预测，结果显示miRNA-409-3p与Beclin-1 mRNA的3’UTR之间存在互补配对序列，见图3C。为了证实miRNA-409-3p靶向调控Beclin-1表达，构建Beclin-1野生型及突变型质粒进行双荧光素酶报告基因实验，结果显示与mimic NC组相比，转染miRNA-409-3p mimic的野生型组SBC-5/EP细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)，而较转染miRNA-409-3p mimic的突变型组SBC-5/EP细胞的荧光素酶活性无显著改变，见图3D。

图3 miRNA-409-3p靶向抑制Beclin-1的表达Figure 3. Inhibition of Beclin-1 via Targeted miRNA-409-3pPanel A and B show miRNA-409-3p mimic and miRNA-409-3p NC transfected SBC-5/EP cell, respectively. Total RNA and cell lysates were extracted at 24 hours after transfection and were used to detect the expression of Beclin-1 at both mRNA and protein levels by qRT-PCR and western blot (compared with mimic NC, **P < 0.05). Panel C shows the binding site between miRNA-409-3p and Beclin-1 predicted by TargetScan. In panel D, luciferase activity assay demonstrated that miRNA-409-3p targeted Beclin-1’s 3’UTR-WT (compared with the wild-type SBC-5/EP cell in the mimic NC group, **P < 0.01).

2.4 miRNA-409-3p抑制自噬调节SBC-5/EP细胞对VP16-DDP的耐药性

Western blot实验结果显示，与mimic NC相比，miRNA-409-3p mimic组的LC3II/LC3I的比值降低，P62蛋白表达升高(P<0.01)，见图4A。GFP-LC3绿色荧光融合蛋白实验显示，与mimic NC相比，miRNA-409-3p mimic组的SBC-5/EP细胞出现绿色荧光斑点，表明自噬降低，见图4B。克隆形成实验结果显示，与mimic NC相比，miRNA-409-3p mimic抑制SBC-5/EP细胞的增殖(P<0.05),见图4C；流式细胞术实验结果显示，与mimic NC相比，miRNA-409-3p mimic促进SBC-5/EP细胞凋亡，见图4D；Western blot实验结果显示，与mimic NC相比，miRNA-409-3p mimic促进SBC-5/EP细胞凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9表达(P<0.05)，见图4E。MTT实验结果显示，与mimic NC相比，miRNA-409-3p mimic降低了SBC-5/EP细胞的的IC50值(P<0.05)，见图4F。

图4 miRNA-409-3抑制SBC-5/EP细胞的自噬对VP16-DDP耐药性的影响Figure 4. Effect of miRNA-409-3p on Drug Resistance of VP16-DDP by Inhibiting Autophagy of SBC-5/EP CellsA. Effect of miRNA-409-3p on autophagy-related proteins (LC3II and P62) detected by Western blot (compared with mimic NC, **P<0.01); B. Effect of miRNA-409-3p on punctate GFP+ cells detected by GFP-LC3 dot formation; C. Effect of miRNA-409-3p on cell proliferation detected by colony formation assay (compared with mimic NC, △P < 0.05); D. Effect of miRNA-409-3p on apoptosis detected by flow cytometry; E. Expressions of apoptotic proteins (caspase-3 and caspase-9) analyzed by Western blot (compared with mimic NC, @P<0.05); F. Effect of miRNA-409-3p on cell viability detected by MTT assay (compared with mimic NC, &P<0.05).

2.5 miRNA-409-3p/Beclin-1对SBC-5/EP细胞的自噬和VP16-DDP耐药性的影响

Western blot实验结果显示，与mimic pc相比，mimic pc-Beclin-1组LC3II/LC3I的比值升高，P62蛋白表达降低(P<0.05)，见图5A。GFP-LC3绿色荧光融合蛋白实验显示，与mimic pc相比，mimic pc-Beclin-1组的SBC-5/EP细胞中出现明亮的绿色荧光小点，表明自噬增强，见图5B。克隆形成实验结果显示，与mimic pc相比，mimic pc-Beclin-1促进SBC-5/EP细胞的增殖(P<0.05)，见图5C。流式细胞术实验结果显示，与mimic pc相比，mimic pc-Beclin-1抑制SBC-5/EP细胞凋亡，见图D；Western blot实验结果显示，与mimic pc相比，mimic pc-Beclin-1抑制SBC-5/EP细胞凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达(P<0.05)，见图E。MTT实验结果显示，与mimic pc相比，mimic pc-Beclin-1提高了SBC-5/EP细胞对VP16和DDP的耐药性(P<0.05)，见图5F。

2.6 miRNA-409-3p/Beclin-1对SBC-5/EP细胞的PI3KC3/Vpsl5信号通路的影响

Western blot实验结果显示，与mimic NC相比，miRNA-409-3p mimic抑制SBC-5/EP细胞中的PI3KC3和Vpsl5蛋白的表达(P<0.05)；与mimic pc相比，mimic pc-Beclin-1促进SBC-5/EP细胞中的PI3KC3和Vpsl5蛋白的表达(P<0.05)；与mimic pc-Beclin-1组相比，mimic pc-Beclin-1-3-MA可抑制SBC-5/EP细胞中的PI3KC3和Vpsl5蛋白的表达，见图6。

3 讨 论

肺癌是死亡率最高的恶性肿瘤之一，其组织学类型分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)和SCLC。与NSCLC相比，SCLC具有较高核质比，且核染色质颗粒细小[10]。临床研究显示，SCLC患者发生癌细胞的转移几率较高，且SCLC的病理特征与临床结果之间的关系复杂，致使SCLC的治疗进展缓慢[11]。目前，化疗仍然是SCLC治疗策略的基础。其中VP16+DDP是SCLC治疗的一线化疗药物[2]。但临床研究显示，由于耐药性的出现，接受二次化疗的患者治疗效果并不理想。而且不同患者在临床表现、预后、治疗反应、耐受性等方面存在个体差异，导致化疗耐药表型形成的机制尚不明确[12]。因此，寻找VP16-DDP的耐药机制一直是SCLC研究领域的热点。

研究显示，耐药机制包括多种因素，例如多药耐药蛋白家族的调控、细胞凋亡、自噬、细胞内药物代谢酶系统、肿瘤干细胞、miRNA调控网络、稳态变化、DNA损伤修复等表观遗传调控[13]。Wang等[14]研究发现，Etk与PFKFB4的相互作用可调节自噬，从而影响调节小细胞肺癌的化疗耐药性；Yu等[15]研究发现，内质网应激通过促进细胞自噬和凋亡，可逆转小细胞肺癌细胞的化疗耐药性。本研究发现，VP16-DDP耐药的SCLC细胞SBC-5自噬活性增强，导致耐药的SBC-5细胞的增殖能力提高，细胞凋亡能力降低，对VP16-DDP的敏感性降低。这说明，SBC-5细胞的VP16-DDP耐药机制可能与细胞自噬相关。

自噬是化疗后维持细胞内环境稳定的促生存反应，与多种癌症的耐药发展相关[16]。近年研究发现，miRNA可改变SCLC细胞的自噬及凋亡，进而影响SCLC对化疗药物的敏感性。例如，张云等[17]研究发现，miR-200b在多药耐药细胞株H69AR中呈低表达，上调其表达通过改变H69AR细胞的自噬，降低细胞对ADM、DDP和 VP-16等化疗药物的耐药性；申利等[4]研究发现，miRNA-409-3 p与宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性相关；Cheng等[5]发现miRNA-409-3p通过调控卵巢癌细胞自噬，影响肿瘤细胞对DDP的化疗敏感性。本研究发现，miRNA-409-3p在VP16-DDP耐药的SCLC组织和SBC-5细胞中低表达，上调miRNA-409-3p可抑制SBC-5/EP细胞自噬，促进SBC-5/EP细胞的凋亡，抑制SBC-5/EP细胞的增殖，提高SBC-5/EP细胞对VP16-DDP的药物敏感性，表明miRNA-409-3p可通过抑制自噬增加SBC-5/EP细胞对VP16-DDP的敏感性。最新研究显示，miRNA-409-3p靶向Fip200可调节卵巢癌细胞对顺铂的敏感性[5]，miRNA-409-3p靶向Beclin-1介导的自噬使结肠癌细胞对奥沙利铂敏感[18]。这些研究提示，miRNA-409-3p可通过靶向mRNA，影响肿瘤细胞的药物敏感。本研究结果显示，miRNA-409-3p可靶向抑制Beclin-1的表达。

Beclin-1是自噬调控的核心分子，分布在细胞质膜、细胞质和细胞核内[19]。研究发现，Beclin-1与肺腺癌的DDP耐药性相关[20]；沉默Beclin-1基因可增加人肺癌细胞A549对DDP的敏感性，促进细胞凋亡[21]。这些研究提示，Beclin-1在肿瘤细胞耐药机制中扮演重要角色。本研究发现，Beclin-1在VP16-DDP耐药的SBC-5/EP中的高表达，且过表达Beclin-1可逆转miRNA-409-3p对SBC-5/EP细胞自噬及VP16-DDP的药物敏感性的影响。这说明，miRNA-409-3p通过Beclin-1调节SBC-5/EP细胞自噬及VP16-DDP的药物敏感性。Kang等[7]研究显示，Beclin-1通过与辅因子PI3KC3相互作用，调节脂质激酶蛋白表达，促进Beclin-1/Vps15核心复合物的形成，从而诱导肿瘤细胞自噬。任爽等[22]研究发现，Beclin-1/PI3K信号通路与肺癌的阿霉素耐药性相关。这些研究提示，Beclin-1/PI3KC3/Vps15信号通路可能参与调控肿瘤细胞的自噬与耐药性。本研究发现，上调Beclin-1可逆转miRNA-409-3p对PI3KC3/Vps15信号通路蛋白的抑制作用，且通路蛋白抑制剂3-MA可改变miRNA-409-3p/Beclin-1轴对PI3KC3/Vps15信号通路蛋白的影响。这不仅表明Beclin-1/PI3KC3/Vps15信号通路与小细胞肺癌的VP16-DDP耐药性相关，而且说明miRNA-409-3p负向调控Beclin-1，可抑制PI3KC3/Vps15信号通路的激活。

综上所述，本文初步探究了miRNA-409-3p与Beclin-1在VP16-DDP耐药的SCLC中的作用，验证了miRNA-409-3p与Beclin-1的靶向关系，以及通过靶向Beclin-1而调控SBC-5/EP细胞自噬及VP16-DDP的药物敏感性。本研究不仅丰富了Beclin-1在SCLC的VP16-DDP耐药机制中的作用，而且还为VP16-DDP耐药SCLC的分子靶向治疗和化疗药物敏感性研究提供了新的策略。

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