食品微生物检验中培养基的质量控制探讨

2020-12-03何嘉明佛山市食品药品检验检测中心

食品安全导刊 2020年21期

□ 何嘉明佛山市食品药品检验检测中心

食品微生物培养基种类繁多、原料复杂、品牌批次差异大，目前常见的问题：显色培养基特殊色泽不明显、血平板溶血圈不明显、pH值偏离、培养基选择性不佳与洗涤剂残留影响荧光反应等。为了提升食品卫生微生物检验质量，需要做好培养基的质量控制。

1 可参考标准

目前涉及培养基质量控制的标准有 CNAS—CL01—A001：2018、SN/T 1538.1—2016、GB 4789.28—2013 与GB/T 27405—2008等。这些标准均明确要求实验室应结合实际工作设立相应的培养基质量控制程序，包括厂家材料核查、培养基的技术验收（拒收）、储存条件核对与配置使用等，并对关键信息进行有效记录，做到溯源和控制。

2 质量控制措施

2.1 培养基采购与厂家材料验收

如今培养基生产厂家繁多，产品质量差异很大，因此在采购培养基时要对生产厂家的资质进行认定。需要求培养基生产企业提供相应材料，主要包含以下内容：培养基、独立成分、添加剂名称和产品编码，培养基最终pH，储藏信息和有效期，质控证书和所用的测试菌株，性能测试结果和验收标准，技术数据清单以及必要的安全、危害数据等。同时，应检查每批次产品的批号、合格证明、包装完整性、品牌规格与有效期；记录产品验收日期、首次开封日期、感官评价，保留有效的培养基目录清单，如果采购后发现培养基存在问题，一律不能投入到食品卫生微生物检验中。

2.2 存储条件核对

目前实验室常采用脱水合成培养基和商品化即用型培养基，这些培养基应保存在供应商要求的贮存条件下，需根据实际保质期制订购买计划，保证使用效果。目前培养基有以下储存条件：粉末（颗粒）脱水合成培养基常温保存2～3年；商品化即用型平板在2～8 ℃保存3个月（血平板夏季2个月）；即用型液体培养基在2～8 ℃保存6个月；血制品在2～8 ℃保存7～14天。接收时需留意物流箱内温度，偏离过大应予以拒收[1]。

2.3 配置灭菌和保存

配置培养基的实验用水中的微生物不应超过103CFU/mL，应按照实验室规范和生产厂商提供的使用说明配置，记录所有相关数据。每次灭菌应使用湿热灭菌指示条进行监测，关键培养基可采用湿热灭菌生物指示剂同时监测。高压锅运行结束后，应及时取出培养基冷却至室温，长时间高温闷热环境会使培养基出现颜色变深、水分蒸发、pH偏离等问题。错误使用灭菌条件会造成培养基成分破坏或灭菌不彻底等后果，大部分培养基需在121 ℃湿热灭菌15 min，需留意部分特殊条件：121 ℃灭菌20 min（TTB、PDA），115 ℃灭菌20 min（GB8538中的 EC、EC—MUG），115 ℃ 灭菌10 min（3%NACL碱性胰蛋白胨水、含铁牛奶培养基），加热煮沸（VRBA、KF链球菌琼脂、显色培养基等）[2]。

2.4 关键培养基的性能测试

CNAS—CL01—A001:2018 中规定培养基是外部提供的产品和服务，对于关键培养基和试剂，要求进行技术性验收，可参考ISO/TS 11133、CNAS—CL01—A001、SN/T 1538.1—2016、GB 4789.28—2013、B/T 27405—2008、SN/T1538等标准。对于即用型培养基和脱水合成培养基，每批培养基除用标准菌株行测试验收；含有指示剂或选择剂的培养基，应使用能证明其指示或选择作用的菌株进行试验。

对于即用型培养基，SN/T1538.1—2016要求，若生产商已通过ISO9000体系认证，应在适当位置有质量声明并提供品质证书，使用者至少要求进行定性测试；GB 4789.28—2013验证必需的质量控制要求外，还需要抽取至少一个（或1%）平板和试管，置于37 ℃培养箱培养18 h，以控制微生物污染。脱水合成培养基的实验室验收标准 SN/T 1538.1—2016 和 GB 4789.28—2013要求基本一致，根据培养基特性采用目标菌和非目标菌对培养基进行定量、半定量或定性测试。

3 GB 4789.28-2013在应用中遇到的问题

GB 4789.28—2013实行期间，在实际工作中存在以下问题：①标准中培养基种类有限，对部分常用培养基暂无覆盖：如假单胞菌CN培养基（饮用水）；②霉菌和蜡样芽胞杆菌等菌落较大，在半定量划线法中难以判断；③弧菌显色培养基测试使用霍乱弧菌，在2006年发布的《人间传染的病原微生物名录》中的危害等级分类为第二类，需严格规范其使用期间的生物安全性；④标准菌株和培养基性能测试是互为验证的关系，当出现异常，需要采取进一步手段判断问题，例如金黄色葡萄球菌标准菌株在血平板上没有β溶血环，需采用多品牌对比，以判断菌株退化或培养基该性能不合格。