胃癌患者组织中p53、axin蛋白表达与hp感染和病理特征的关系分析

梁仁杰,卫利民,徐 斌,赵治国，乔 亮

(河南科技大学第一附属医院 肿瘤外科,河南 洛阳471000)

胃癌是临床中常见的恶性肿瘤之一，以食欲下降、体重减轻、疼痛、饱胀等为主要临床表现，具有发病率及死亡率高的特点，对人类的生命健康危害极大[1]。据流行病学调查资料显示[2]，目前我国每年约有67.9万新发胃癌病例，其中约有49.8万因胃癌死亡。胃癌的发生发展是较为复杂的病变过程，一般与多种原癌及抑癌基因的表达及调控有关。P53是人体中一种常见的抑癌基因。据报道[3]，P53基因参与胃癌的发生、发展过程。轴蛋白(Axin)是一种Axin基因编码的构架蛋白。有研究显示[4]，Axin与细胞的分化、增殖和凋亡均有密切关系，甚至可能参与肿瘤转移及浸润。幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种生存于人体胃幽门部位的螺旋形、微厌氧的细菌病原体之一，具有较强的潜伏性、侵袭性。另有研究指出[5]，Hp感染是胃癌发生过程的启动及促进因子。结合上述研究可知，P53、Axin蛋白及Hp感染均与胃癌的发生过程存在关联，但目前关于胃癌患者组织中P53、Axin蛋白表达与Hp感染和病理特征的具体关系尚不明确，仍需深入探讨。鉴于此，本研究通过回顾性分析医院收治的88例经病理证实的胃癌患者的临床资料，以期为胃癌发生的分子机制、早期诊断及预后判定等提供相关依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2017年2月-2019年5月医院收治的88例经手术切除并病理证实的胃癌患者的临床资料，男48例，女40例，年龄30-80岁，平均(65.86±13.19)岁，胃癌组织学分类：高、中分化56例，低分化32例，浸润深度：黏膜/黏膜下层52例，肌层/浆膜层36例。

纳入标准：均符合胃癌诊断标准者[6]，均实施P53、Axin蛋白及Hp感染检测，均有完整的临床资料。

排除标准：伴有精神疾病及语言沟通障碍者；存在其他重要器官疾病或肿瘤史者；家属拒绝对其资料回顾分析者；术前放化疗者。

1.2 方法

Hp感染检测方法：采用Warthin-Starry银染法检测Hp感染情况，所用试剂由上海生工生物技术公司提供。具体操作：收集新鲜组织，采用Warthin-Starry银染液对组织染色，并对染色结果观察，其中观察粘膜浅层可见呈弧形或S形Hp小短杆状菌，且呈棕黑至黑色者，记为阳性。

P53蛋白、Axin蛋白的检测方法：采用免疫组化SP法检测P53蛋白、Axin蛋白的表达水平，所用试剂为北京天根生物公司提供。具体操作：收集新鲜胃癌组织及癌旁组织(距胃癌组织边缘5 cm以上的正常胃黏膜组织)，用4%体积分数的甲醛固定，并石蜡包埋。将蜡块进行4 μm/片的切片，免疫组化SP染色依据试剂盒说明书操作。采用已知的阳性片作为阳性对照。P53阳性细胞及Axin阳性细胞判断标准：P53定位于细胞核，Axin定位于细胞浆，通过显微镜观察，细胞核或细胞浆中发现棕黄色颗粒沉淀的细胞记为阳性细胞。随机选取10个视野，以阳性染色细胞占比≥10%者记为对应蛋白阳性表达。

1.3 观察指标

①统计本组受试者胃癌组织及癌旁组织中P53、Axin蛋白表达情况；②对比Hp感染者和未感染者胃癌组织P53、Axin蛋白表达情况；③对比不同病理特征患者胃癌组织中P53、Axin蛋白表达情况。

1.4 统计学分析

将SPSS25.0软件作为统计学工具，计数资料以“n/%”描述，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 本组受试者胃癌组织及癌旁组织中P53、Axin蛋白表达情况

胃癌组织中P53蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)，胃癌组织中Axin蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。见表1及图1，2。

表1 P53、Axin蛋白在胃癌组织及癌旁组织中表达情况(%)

图1 P53蛋白免疫组化检测图(A：癌旁组织中P53蛋白的阴性表达，B：胃癌组织中P53蛋白的阳性表达，40倍)

图2 Axin蛋白免疫组化检测图(C：癌旁组织中Axin蛋白的阳性表达，D：胃癌组织中Axin蛋白的阴性表达，200倍)

2.2 Hp感染者和未感染者胃癌组织P53、Axin蛋白表达情况对比

所有入选患者中共50例(56.82%)发生Hp感染，38例(43.18%)未发生Hp感染。Hp感染者的P53蛋白阳性表达率显著高于未感染者(P<0.05)，Axin蛋白阳性表达率显著低于未感染者(P<0.05)，见表2。

表2 Hp感染者和未感染者P53、Axin蛋白表达情况对比(%)

2.3 不同病理特征患者胃癌组织中P53、Axin蛋白表达情况对比

低分化程度、有淋巴结转移、浸润肌层/浆膜层的患者的P53蛋白表达率显著高于高、中分化程度、无淋巴结转移、浸润黏膜/黏膜下层的患者的P53蛋白阳性表达率(P<0.05)，低分化程度、有淋巴结转移、浸润肌层/浆膜层的患者的Axin蛋白阳性表达率显著低于高、中分化程度、无淋巴结转移、浸润黏膜/黏膜下层的患者的Axin蛋白阳性表达率(P<0.05)，肿瘤直径(肿瘤直径≤4 cm或肿瘤直径>4 cm)的患者的P53、Axin蛋白阳性表达率相近(P>0.05)，见表3。

表3 不同病理特征患者胃癌组织中P53、Axin蛋白表达情况对比

3 讨论

胃癌在我国各种恶性肿瘤中发病率居前几位，且因胃癌早期并无明显的特异性症状，多数患者在就诊时已处于进展期，故此类患者的5年生存率低，危害严重[7]。胃癌常见的病因包括遗传因素、环境因素、Hp感染、原癌基因激活及抑癌基因缺失突变等，均可导致细胞增殖与凋亡失控，进而诱导病情进展[8,9]。胃癌患者之所以出现细胞增殖与凋亡的失控，根本原因在于基因突变所致的细胞增殖和凋亡调控蛋白的异常表达，致使癌细胞大量增殖和分化[10]。P53、Axin是人体重要的抑癌基因，P53、Axin蛋白可以抑制细胞凋亡、促进细胞分化，与胃癌的发生和发展之间关系密切[11]。另有研究显示[12]，Hp感染所引发的胃黏膜慢性炎症加之环境因素可以加速胃黏膜上皮细胞的过度增殖，最终导致胃癌的发生。但是，目前关于胃癌患者组织中P53、Axin蛋白表达与Hp感染和病理特征的关系认识尚浅，仍需要深入研究。

本研究发现，经免疫组化检测出胃癌组织中P53蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织，Axin蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织，提示胃癌患者组织中存在P53、Axin蛋白异常表达情况，同时也说明P53、Axin蛋白参与胃癌的发生发展过程。与既往研究相符[13,14]。正常情况下P53蛋白的半衰期短，并且极不稳定，非常容易失活，常规的蛋白检测方法很难测出[15]，若结果检出P53蛋白则意味着该基因已经发生突变，而突变型的基因所表达P53蛋白可参与恶性肿瘤细胞的增殖，促进细胞分化，对胃癌的发生和病情进展有重要的推动作用。Axin作为重要的抑癌基因，含有多个功能结构域，为目前公认的抑癌基因，采用基因干扰技术增强其表达水平可抑制恶性肿瘤细胞的增殖、促进凋亡[16]，且在多种恶性肿瘤组织中均被证实其表达水平下降[17-19]，推测Axin表达被抑制，可参与胃癌的发生与发展，并增强胃癌细胞的恶性生物学行为。此外Axin可以与P53结合参与P53信号通路，并通过同源结构域结合蛋白激酶2激活野生型P53，从而促进抑癌基因P53的转录活性和细胞凋亡作用。此外，Axin与突变型P53相互作用，共同下调β-catenin的表达，协同发挥肿瘤抑制因子的作用。通过上述分析可知，突变型P53与Axin呈负相关作用，二者共同参与胃癌的发生发展过程。

本研究发现，胃癌组织中Hp感染阳性率高，且Hp感染者的P53蛋白及Axin蛋白阳性表达率显著高于未感染者，提示胃癌患者多伴有Hp感染，且伴Hp感染者存在P53、Axin蛋白表达异常情况。Hp是诱发胃癌的启动因子，能够诱导加速细胞有丝分裂，损伤细胞DNA，并激活原癌基因，使抑癌基因失活，导致胃癌基因的异常表达，从而增加癌变风险。有研究显示[20]，Hp感染可引发胃黏膜上皮细胞出现慢性炎症反应而损伤胃黏膜上皮细胞，进而促进P53、Axin基因突变，致使胃黏膜上皮细胞的凋亡能力降低，并导致胃黏膜上皮细胞增殖及凋亡功能发生紊乱，引发细胞堆积，从而导致肿瘤的形成。由此推测Hp感染可能导致胃黏膜上皮细胞P53基因及Axin基因发生突变，从而使P53表达增强，Axin蛋白表达降低，进而参与胃癌的发生与发展。

此外，本研究还显示，P53蛋白在有淋巴结转移、低分化、浸润肌层/浆膜层的胃癌组织中阳性表达率高，Axin蛋白在有淋巴结转移、低分化、浸润肌层/浆膜层的胃癌组织中阳性表达率低，提示伴Hp感染胃癌患者组织中P53、Axin蛋白表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、浸润深度等病理特征关系密切。姜志新[21]等人研究显示，P53蛋白在有淋巴结转移、低分化的胃癌组织中表达量高。赵磊[22]研究发现，Axin蛋白在有淋巴结转移、低分化的胃癌组织中表达量减少或者缺失，与本研究结果相符，证实胃癌伴Hp感染者组织中P53、Axin蛋白均呈异常表达，P53、Axin核蓄积可能为胃癌发生及发展的病理过程中重要组成部分，二者可作为胃癌发生早期的评价指标之一。通过上述分析可知，伴Hp感染胃癌组织中P53、Axin蛋白表达情况与不同病理特征关系密切，且P53基因突变可能下调Axin蛋白的表达，进而增加胃癌的扩散及转移发生几率，但具体机制仍有待研究。

综上所述，胃癌伴Hp感染者组织中P53蛋白阳性表达率高、Axin蛋白阳性表达率低，且二者阳性表达率与胃癌组织分化程度、有无淋巴结转移、浸润深度的病理特征存在关联。因此，建议临床上对伴有Hp感染的胃癌前病变患者加强P53、Axin蛋白的检测，并及时给予针对治疗，以降低胃癌的发生。