血清TLR4及MFG-E8与子痫前期患者表达及发生早期肾损伤的关系

任春丽,唐兴国,张玉芳,袁晓明

(1.承德医学院附属医院 产科，河北 承德067000;2.承德护理职业学院 解剖教研室，河北 承德067000)

子痫前期(PE)是妊娠特有的疾病，在妊娠20周之后发生，病情随妊娠呈持续性进展，最常见的并发症之一就是引起急性肾损伤[1]，研究显示TOLL受体4(TLR4)和乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ(MFG-E8)均与急性肾损伤病理机制有关[2,3]，本研究探讨TLR4和MFG-E8在子痫前期患者中的表达与诊断意义，并探讨其与子痫前期发生早期肾损伤的关系。

1 资料与方法

1.1 病例资料

选取在我院住院治疗的妊娠期高血压(GH)患者30例，轻度子痫前期(mPE)患者30例、重度子痫前期(sPE)30例以及正常妊娠(NP)患者30例为研究对象。妊娠期高血压及子痫前期患者诊断及分类均符合第九版《妇产科学》诊断标准。正常孕妇的年龄(32.07±3.58)岁，高血压组孕妇年龄(32.66±3.91)岁，轻度子痫前期组孕妇年龄(34.77±3.51)岁，重度子痫前期组孕妇年龄(34.01±3.72)岁。组间比较无统计学差异(P>0.05)。

1.2 方法

两组患者均在分娩前晨起空腹采取肘正中静脉血5 ml，实验室离心10 min后取上层血清于-80°冰箱保存已备用。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)进行检测两组患者血清中TLR4和MFG-E8的表达水平，具体所有操作均按试剂盒操作说明进行。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 不同组别外周血TLR4与MFG-E8表达水平比较外周血TLR4在正常孕妇、妊娠期高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期，随病情加重呈逐渐升高趋势，多组间进行单因素方差分析，组间两两比较：各组间均有显著性差异(P<0.01)，仍具有显著性差异(P<0.01)。外周血MFG-E8在正常孕妇、妊娠期高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期，随病情加重呈逐渐降低趋势，多组间进行单因素方差分析，组间两两比较：各组间差异均有显著性差异(P<0.01)，见表1。

表1 组间外周血TLR4和MFG-E8表达水平比较

2.2 外周血TLR4与MFG-E8的相关性比较在正常孕妇组，外周血TLR4与MFG-E8表达水平呈负相关，但无统计学意义，r=-0.345，P=0.062；在妊娠期高血压组，外周血TLR4与MFG-E8表达水平呈负相关，r=-0.390，P=0.033；在子痫前期组，随着子痫前期病情进展，外周血TLR4与MFG-E8表达水平呈明显负相关，r=-0.799，P=0.000，见图1；在重度子痫前期并发早期肾损伤的病例为42例，外周血TLR4与MFG-E8表达水平呈显著负相关，r=-0.875，P=0.000，见图2。随着外周血TLR4水平逐渐升高，MFG-E8的表达水平呈下降趋势。

2.3 外周血TLR4与MFG-E8诊断子痫前期的价值外周血TLR4与MFG-E8表达水平诊断子痫前期的敏感度分别为83.33%、78.33%，特异度分别为80.00%、86.67%；TLR4联合MFG-E8诊断PE的敏感度98.00%，特异度78.57%；TLR4、MFG-E8及TLR4联合MFG-E8诊断PE的ROC曲线下面积分别是0.850、0.889及0.928，见表2；ROC曲线见图3。

表2 TLR4、MFG-E8以及TLR4联合MFG-E8对诊断子痫前期的预测价值

图1 PE患者TLR4与MFG-E8的相关性

图2 PE合并急性肾损伤的TLR4与MFG-E8的相关性

图3 TLR4、MFG-E8、TLR4联合MFG-E8的ROC曲线

3 讨论

子痫前期为妊娠代谢性疾病的一种，临床表现多样化，常导致脑、肾、肝、心血管等多个器官受累；发病机制复杂，目前公认原因之一是母胎界面炎症免疫过度激活及血管内皮细胞受损[4]。常因子痫前期患者病情隐匿而复杂，严重影响母婴生命安全。近年来，因分子诊断，影像学诊断等技术水平提高，使得子痫前期的诊断水平明显提升，但子痫前期的早期诊断仍是一个严峻的课题。本研究通过两种炎症介质TLR4与MFG-E8提高子痫前期诊断敏感性及特异性，为子痫前期的早期诊断提高理论依据。

TLR4是Toll样受体家族中重要的成员，Toll样受体是连接特异性与非特异性免疫的桥梁，识别并激活免疫细胞应答。研究显示TLR4与子痫前期发病机制的相关性可能与TLR4参与炎症反应及炎症损伤有关[5]。有研究显示子痫前期合体滋养细胞和内皮细胞中TLR4的表达也明显高于正常孕妇组；在胎盘绒毛血管内皮中，早发性子痫前期妇女胎盘中TLR4的表达高于晚发性子痫前期，表明子痫前期的严重程度与胎盘绒毛的炎症损伤程度相关[6]。有研究显示子痫前期妇女单核细胞内源性激活，并伴有TLR4的高表达及促炎细胞因子的产生[7]。这些研究均与本研究相符合，本研究提示随着子痫前期进展，TLR4表达水平呈逐渐增高趋势，且重度子痫前期>轻度子痫前期>妊娠期高血压>正常孕妇(P<0.01)。

MFG-E8又称乳凝集素，是一种糖蛋白，能够维持机体免疫稳态，具有凋亡清除、修复损伤、血管生成及减轻炎症反应等作用，是一种防御型因子[8]。目前国内外研究MFG-E8与子痫前期的关系很少，但通过对急性肾损伤、妊娠期糖尿病、自身免疫系统疾病等能够了解MFG-E8的生理作用。研究显示[9]通过对急性肾损伤的重组小鼠进行MFG-E8注射，MFG-E8对IL-1β、IL-6、TNF-α有明显抑制作用(P<0.05)。MFG-E8能够降低血清CRE、BUN，减轻急性损伤的病理变化。有人对糖尿病肾病中MFG-E8表达研究中显示：MFG-E8与肌酐、胱抑素C呈负相关，表明MFG-E8对凋亡细胞吞噬功能减弱，对炎症因子的免疫抑制作用减弱，导致肾脏损伤[10]。有研究显示[11]：系统性红斑狼疮(SLE)患者血清MFG-E8水平高于健康对照组，MFG-E8水平转阴后，MFG-E8阴性的SLE患者常表现出CRP、TNF-α、IFN-1和IL-10均显著高于在MFG-E8阳性的SLE。从而得出结论MFG-E8阳性SLE是一个更强的免疫应答。本研究中显示子痫前期患者随病情加重，血清MFG-E8表达水平呈逐渐下降趋势，且重度子痫前期<轻度子痫前期<妊娠期高血压<正常孕妇(P<0.01)。

TLR4与MFG-E8在子痫前期及子痫前期并发早期肾损伤患者中表达呈明显负相关。推断可能是由于TLR4诱导PE患者母胎介面炎症因子及单核细胞激活，而不能抵御炎症攻击的MFG-E8水平下降，导致其不能发挥正常状态下维持免疫稳定的作用，破坏了免疫平衡，从而加重子痫前期及并发急性肾损伤的发生[12]。本研究显示：随着子痫前期病情进展，外周血TLR4与MFG-E8表达水平呈负相关(r=-0.799，P=0.000)；在子痫前期并发早期肾损伤的病例中，外周血TLR4与MFG-E8表达水平呈明显负相关(r=-0.875，P=0.000)。而TLR4联合MFG-E8对诊断子痫前期敏感性明显升高，特异度略下降，敏感度98.00%，特异度78.57%，ROC曲线下面积：0.928。

综上所述，TLR4与MFG-E8均密切参与子痫前期发病机制，且随病情进展，TLR4表达水平呈逐渐升高趋势，而MFG-E8则呈下降趋势，两者之间呈负相关，PE患者并发早期急性肾损伤时TLR4与MFG-E8负相关更明显。TLR4与MFG-E8对诊断子痫前期的预测价值很高，如两者联合，诊断的敏感性明显升高，为临床上子痫前期患者的早期诊断、早期治疗提高可靠依据。