清肺排毒汤体外抗菌作用研究

李荣宇，林少玲，骆月姬

(广州中医药大学第一附属医院，广东 广州 510405)

2019年底，爆发了一场由新型冠状病毒(COVID-19)引起的全球性急性呼吸道传染病。由于COVID-19传染性强、传播途径广、可感染不同人群[1]，且从未在人类史上出现过，因此对其缺乏认知，给病患的治疗带来巨大困难。

自古以来，中医治疗疫病(如瘟疫等)具有悠久历史，在疫病病因分析、辨治施药等方面已有深入研究。国家中医药管理局在开展“中医药防治新冠肺炎有效方剂临床筛选研究”工作中发现，清肺排毒汤对河北、山西、黑龙江、陕西四省 214例确诊患者的临床救治总有效率达90%以上[2]。因此，将清肺排毒汤收录于《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》(试行第六、七版)中，并在全国大力推广使用。

清肺排毒汤来源于《伤寒杂病论》，参考麻黄汤、橘枳姜汤、射干麻黄汤、小柴胡汤和五苓散等经典名方，处方由麻黄、炙甘草、杏仁、生石膏、桂枝等21味中药配伍组成[3]。作为全新药方，其药效、有效成分、作用机制等诸多方面尚无相关研究，因此，本研究从体外抗菌的角度进行清肺排毒汤的药效研究，以期为其临床应用提供科学的理论依据，为清肺排毒汤的进一步开发和应用提供实验基础。

1 材料

1.1 药材组成

清肺排毒汤：麻黄9 g、炙甘草6 g、杏仁9 g、生石膏30 g、桂枝9 g、泽泻9 g、猪苓9 g、白术9 g、茯苓15 g、柴胡16 g、黄芩6 g、姜半夏9 g、生姜9 g、紫苑9 g、冬花9 g、射干9 g、细辛6 g、山药12 g、枳实6 g、陈皮6 g、藿香9 g，以上药材(除生姜购自于市场外)均购于大参林医药集团股份有限公司。

1.2 菌株

标准菌种：金黄色葡萄球菌(CMCC26003，S.aureus)、肺炎克雷伯氏菌(ATCC10031，K.pneumoniae)、普通变形杆菌(CMCC49027，P.vulgaris)、铜绿假单胞菌(ATCC27853，P.aeruginosa)，均由广东省微生物菌种保藏中心提供。

1.3 培养基

营养肉汤(广东环凯生物科技有限公司，批号：1072861)，M-H琼脂(青岛高科园海博生物技术有限公司生产，批号：20191015)。

1.4 仪器

LX-B50L型立式自动电热压力蒸汽灭菌器，合肥华泰医疗设备有限公司；SW-CJ-2FD双人单面净化工作台，苏州净化设备有限公司；DHP-9082恒温培养箱，上海一恒科技有限公司。

2 方法

2.1 清肺排毒汤的制备

2.1.1 提取 ①将生石膏先置于圆底烧瓶中，加入8倍药材量水，加热回流提取0.5 h，再加入处方中余下药材，继续提取1.0 h，药液以200目筛过滤；②药渣加入6倍药材量水，加热回流提取1.0 h，药液以200目筛过滤，合并两次滤液。

2.1.2 浓缩 采用真空减压浓缩，在80 ℃下浓缩至药液浓度为1.0 g生药/mL。

2.1.3 药液配制 以水为溶剂，将清肺排毒汤(1 g生药/mL)按2倍递减稀释，配制成11个梯度浓度(1 000.0～0.98 mg生药/mL)的药液。

2.2 菌液制备

将金黄色葡萄球菌等菌种解冻后于M-H琼脂板上划线，放置恒温培养箱中37 ℃培养18～24 h；挑选单菌落，接种于营养肉汤中，放置恒温培养箱中37 ℃培养18 h，以比浊管为参照，先用营养肉汤稀释至0.5麦氏比浊度(约为1×108cfu /mL)，再稀释成浓度为1×106cfu/mL的菌液。

2.3 最低抑菌浓度MIC的测定

采用微量稀释法[4]，取无菌96孔平底微量培养板，于每排第1～12孔各加入菌液100 μL，接着按浓度高低往每排第1～11孔加入相应浓度的清肺排毒汤药液100 μL，每排第12孔只加水作为阴性对照，平行操作3份。将96孔培养板置于恒温培养箱中37 ℃培养18 h，取出，于黑色背景下肉眼观察，阴性对照孔呈浑浊(表明细菌生长良好)，其他孔中以溶液清晰透亮者为该药物的MIC。若药液与菌液刚混合则出现浑浊难以判断，可在培养后进行涂片，于显微镜下观察无菌的孔便为MIC。

2.4 最低杀菌浓度MBC测定

取1～12孔的培养物，分别吸取1接种环，于M-H琼脂平板上划线，置于恒温培养箱中37 ℃培养18 ～24 h，以菌落数少于5个者为该药的MBC。

3 结果

实验结果表明，清肺排毒汤对呼吸道致病菌具有一定的抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌的作用较强，MIC、MBC值均为250.0 mg/mL；对肺炎克雷伯菌及普通变形杆菌则较弱，MIC、MBC值均>500.0 mg/mL。见表1。

表1 清肺排毒汤对呼吸道致病菌的MIC和MBC值

4 讨论

本研究通过体外抑菌实验，发现清肺排毒汤对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的抗菌活性较强，但对于肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌较弱，表明其具有一定的抗菌作用。

根据清肺排毒汤方解[3-5]可知：麻黄汤与五苓散相配，祛寒邪闭阻、健脾祛湿；配射干麻黄汤、橘枳姜汤以舒缓胸憋、气短；配小柴胡汤以和解少阳；加藿香以化湿辟邪；用石膏防郁而化热。同时，纵观方中药材，黄芩[6]、生姜[7]、冬花[8]、射干[9]、细辛[10]、枳实[11]、陈皮[12]、藿香[13]等具有一定的抗菌作用，占方中药味数的38.10%、方中药材重量的24.90%。因此，结合其体外抗菌效果，推测该方以对人体肺部的综合调理为主、抗菌为辅。