杀伤细胞联合化疗治疗中晚期肺癌的效果及对免疫功能、B7H4蛋白水平的影响

黄 岚 刘继斌

上海昶芯医院管理有限公司医务部，上海 210000

肺癌是临床上常见的恶性肿瘤，病死率位居我国恶性肿瘤首位[1]。手术治疗肺癌是临床上常见的方法，但由于肺癌早期病情隐匿，无显著特征，多数患者确诊时已至中晚期，错过了手术治疗最佳时期[2]。对于中晚期肺癌患者而言，缓解临床症状、延长生存期、提高生活质量是治疗的关键所在。化疗是治疗中晚期肺癌的常见方法，其能够延长患者的生存时间，但化疗周期漫长，化疗过程中易引起多种不良反应，患者往往难以耐受[3]，故需寻找有效的治疗方案以提高其生活质量。杀伤细胞（CIK）作为新型的治疗手段，被广泛应用于恶性肿瘤的治疗中，能显著提高患者的免疫力[4]。但对CIK 联合化疗能否显著改善中晚期肺癌患者的免疫功能，学界鲜有研究。基于此，本研究选取上海市某医院收治的110 例中晚期肺癌为研究对象，旨在探讨CIK 细胞联合化疗治疗的临床应用价值，现将结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年5月～2019年4月上海市某医院肿瘤科收治的110 例中晚期肺癌患者为研究对象，采用双盲法将入选患者分为联合组与化疗组，每组各55例。联合组中，男37 例，女18 例；年龄35～70 岁，平均（61.12±7.81）岁；肿瘤分期：Ⅲ期30 例，Ⅳ期25 例；病理类型：腺癌29 例，鳞癌16 例，腺鳞癌4 例，小细胞癌6例。化疗组中，男35 例，女20 例；年龄35～71 岁，平均（61.23±7.97）岁；肿瘤分期：Ⅲ期32 例，Ⅳ期23 例；病理类型：腺癌28 例，鳞癌17 例，腺鳞癌5 例，小细胞癌5 例。两组患者的一般资料如年龄、性别、病理分型及肿瘤分期等比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经患者及家属知情同意，且经医院医学伦理委员会批准同意。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：①经病理活检确诊为肺癌；②符合美国国立综合癌症网络（NCCN）指南相关诊断标准[5]；③Karnofsky 功能状态评分（KPS）＞60 分；④临床资料完整；⑤心电图结果显示正常。排除标准：①精神疾病者；②合并其他恶性肿瘤者；③凝血功能障碍；④自身性免疫性疾病者；⑤入组本实验前接受放化疗者；⑥妊娠期女性；⑦哺乳期女性；⑧本实验化疗药物过敏者。

1.3 方法

化疗组给予1000 mg/m2的吉西他滨 （南京正大天晴制药有限公司，国药准字H20093404，生产批号：20100303）治疗，静脉注射，1 h 内注射完成；第1 天和第8 天，给予75 mg/m2的顺铂（齐鲁制药有限公司，国药准字H37021362，生产批号：2015613）治疗，静脉注射，第1～3 天。每3 周重复上述治疗方法1 次，21 d为1 个疗程，连续治疗4 个疗程。

联合组在化疗的基础上联合CIK 治疗，在无菌层流实验室进行CIK 的制备，抽取患者空腹外周血5 ml，从血液中提取单核细胞，依据细胞计数结果调整刺激细胞活化扩增混合培养液的体积，将接种细胞的浓度保持在1×106/ml。进行培养细胞，48 h 后，等体积补加含白介素-2（IL-2）的无血清培养基，以后根据细胞取样计数结果，补充适量含IL-2 的无血清培养基。7 d后，细胞表型变化情况采用流式细胞仪进行检测，并对细胞密度进行调整，在细胞培养14 d 后收获细胞。在化疗的基础上给予患者CIK 治疗，分次给患者回输CIK，每次回输的细胞数量在3×109/ml 以上，回输后，根据患者的免疫状态给予其适量的皮下注射IL-2 及胸腺肽，每周给患者回输CIK 细胞1 次，4 次为1 个疗程，连续治疗3 个疗程。

1.4 观察指标及评价标准

比较两组的疗效，观察两组患者治疗前后的免疫功能、B7H4 蛋白水平，具体如下。

1.4.1 疗效判定标准 治疗后，肿瘤完全消失为完全缓解；治疗后，肿瘤消退50%以上，未产生新病灶为部分缓解；治疗后，肿瘤消退在50%及以下为稳定；治疗后，肿瘤增大24%以上或产生新病灶为进展[6]。总有效率=（完全缓解+部分缓解）例数/总例数×100%。

1.4.2 免疫功能 抽取患者治疗前后的外周血5 ml，采用流式细胞仪（美国BD 公司）对两组患者的CD4+、CD4+/CD8+指标水平进行检测，比较患者的免疫功能。同时采用酶联免疫吸附试验对肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）进行检测。

1.4.3 B7H4 蛋白 采用酶联免疫吸附试验（海哈灵生物科技有限公司）对两组患者治疗前后外周血中B7H4蛋白水平进行检测。

1.5 统计学方法

采取SPSS 22.0 统计软件对数据进行分析。其中，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t 检验，计数资料采用频数或百分率表示，采用χ2检验，等级资料采用秩和检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者疗效的比较

联合组的总有效率高于化疗组，疗效优于化疗组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 两组患者疗效的比较[n（%）]

2.2 两组患者治疗前后免疫功能及CEA 水平的比较

两组患者治疗前的CD3+、CD4+/CD8+水平及CEA水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，联合组患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于本组治疗前及化疗组，CEA 水平低于本组治疗前及化疗组，差异有统计学意义（P＜0.05）；化疗组治疗后的CD3+、CD4+/CD8+水平高于治疗前，CEA 水平低于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05）；化疗组治疗前后的CD4+水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

表2 两组患者治疗前后免疫功能及肿瘤标志物CEA 水平的比较（±s）

表2 两组患者治疗前后免疫功能及肿瘤标志物CEA 水平的比较（±s）

联合组（n=55）治疗前治疗后t 值P 值化疗组（n=55）治疗前治疗后t 值P 值t 两组治疗前比较值P 两组治疗前比较值t 两组治疗后比较值P 两组治疗后比较值53.74±6.93 62.95±3.29 8.904＜0.001 53.97±6.73 58.27±5.32 3.717＜0.001 0.177 0.860 5.549＜0.001 27.93±4.92 34.75±3.30 8.538＜0.001 27.63±4.80 27.07±5.23 0.585 0.56 0.324 0.747 9.210＜0.001 0.97±0.63 1.59±0.34 6.423＜0.001 0.84±0.45 1.44±0.20 9.036＜0.001 1.245 0.216 2.820 0.006 7.30±0.76 3.42±0.82 25.737＜0.001 7.31±0.85 6.16±1.66 4.573＜0.001 0.065 0.948 10.975＜0.001组别 CD3+（%） CD4+（%） CD4+/CD8+ CEA（ng/ml）

2.3 两组患者治疗前后B7H4 蛋白水平的比较

两组患者治疗前的B7H4 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组患者治疗后的B7H4 水平低于治疗前，且联合组治疗后的B7H4 水平低于化疗组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表3）。

表3 两组患者治疗前后B7H4 蛋白水平的比较（±s）

表3 两组患者治疗前后B7H4 蛋白水平的比较（±s）

联合组化疗组t 值P 值55 55 60.23±10.65 60.15±10.42 0.040 0.968 53.95±7.67 57.04±8.05 2.061 0.042 3.549 1.752 0.001 0.013组别 例数 治疗前 治疗后 t 值 P 值

3 讨论

肺癌属于恶性肿瘤，约占总体癌症的11.6%[7]，本病死亡率也较高，约占总体癌症死亡总数的18.4%。研究统计显示，在新增肺癌210 万例中，有180 万人死亡。肺癌中，约85%的患者为非小细胞肺癌，肺腺癌及鳞状癌均是最常见的亚型[8]。肺癌病因较为复杂，考虑与环境、激素、基因变异、吸烟等密切相关，但其主要发病因素与患者的吸烟史有关。研究显示，约有80%以上的肺癌患者存在长期吸烟行为[9]。手术是治疗肺癌的有效方法，随着社会的发展，虽然治疗肺癌技术日益成熟，但由于本病早期无显著特征，一经确诊，患者已到中晚期，手术治疗无法将肿瘤完全切除[10-12]，故化疗成为了术后常见的治疗方法。化疗主要以吉西他滨、卡铂、顺铂类等药物作用于肿瘤部位，可延长患者生存期，但化疗过程较为痛苦，易产生多种不良反应，故需寻找有效的治疗方法。

CIK 具有T 淋巴细胞强大的抗肿瘤活性与限制性杀死肿瘤的特点[13]，其与化疗联合应用能减轻毒副作用，提高患者的生活品质，在肝癌、肺癌、宫颈癌等各类癌症中均得到了广泛的应用，且疗效显著[14]。本研究显示，与化疗组相比，联合组的总有效率显著提高，提示在化疗的基础上联合CIK 治疗中晚期肺癌效果显著。

有研究显示，肿瘤患者外周血的T 淋巴细胞亚群数量存在明显异常，其中CD3+、CD4+数量明显减少[15]。肿瘤患者的细胞免疫功能受到抑制，无法识别和杀死肿瘤细胞，故造成肿瘤的复发与转移，提示有效评价T 淋巴细胞亚群有助于了解患者自身的免疫状态，可以帮助医师进行合理的后续治疗。本研究显示，两组治疗前的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，联合组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均高于化疗组（P＜0.05），提示CIK 联合化疗可显著提高中晚期肺癌患者的免疫功能。究其原因在于CIK 输注后，T 淋巴细胞比例显著增高或接近正常，患者免疫功能显著增强。

B7H4 蛋白在各种肿瘤组织中呈现高表达[16-17]，其与T 细胞表面受体相结合，使得T 细胞活化功能产生抑制，导致机体免疫功能下降[18]。研究显示，B7H4 表达与肿瘤预后成负相关[19-20]，故检测B7H4 蛋白水平可有效评估肿瘤患者的预后情况。本研究显示，治疗后，化疗组的B7H4 蛋白水平呈现下调趋势，与化疗组比较差异显著（P＜0.05），提示CIK 联合化疗能显著下调B7H4 蛋白水平，改善患者预后。

综上所述，CIK 联合化疗应用于中晚期肺癌中具有理想的疗效，能显著提高患者的免疫功能，促进患者预后。