不同种源和不同肥料对前胡有效成分及产量的影响*

陈如兵 楼柯浪 吴晓俊 张春椿

1 浙江省中医药研究院 浙江 杭州 310007

2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

前胡是伞形科前胡属多年生草本植物白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn的干燥根，其味苦、辛，微寒，具有降气化痰，散风清热。随着临床药用逐渐加大，野生资源濒临枯竭。本研究旨在探究种源与肥料对前胡的影响，为探究更适合前胡的种植方式提供理论依据。

1 材料

1.1 仪器：Alliance e2695高效液相色谱仪（waters公司）；PDA FLR检测器（waters公司）；KQ2200DA型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AR224CN型电子分析天平［奥豪斯仪器（上海）有限公司］。

1.2 试剂：白花前胡甲素、白花前胡乙素（纯度均≥98.50%，购于曼思特生物科技公司）；甲醇（色谱纯）；三氯甲烷、二乙胺等均为分析纯，水为去离子。

2 方法

2.1 试验设计：大田试验于2018～2019年间进行，试验田位于浙江省杭州市淳安县临岐镇。试验田按两部分内容同时展开。第一部分：一年生抽薹前胡种子、两年生抽薹前胡种子、野生前胡种子以及使用前胡残留根；第二部分：CK（不施肥）、施复合肥、施有机肥。播种时间为2018年三月春播，播种方式为条播，播种时间为一年，采收时测定小区产量，转换成每公顷产量。

2.2 白花前胡甲素和白花前胡乙素的测定：分述如下。

2.2.1 色谱条件：C18色谱柱，柱温为25℃，检测波长为321nm，流动相为A（甲醇）及B（水）两相等度（75：25）洗脱，流速为1.0ml/min，采用PDA FLR检测器。理论板数按白花前胡甲素峰计算应不低于3000[1]。

2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取白花前胡甲素6mg，置于10ml棕色容量瓶中，加甲醇制成0.6mg/ml白花前胡甲素对照品的溶液；同上方法制备得到0.6mg/ml的白花前胡乙素对照品溶液，并都存于4℃冰箱备用。

2.2.3 线性关系考察：取标准溶液1ml，5ml，10ml，15ml，20ml分别置于20ml容量瓶中，加甲醇定容摇匀，按“2.2.1”色谱条件项下进样测定。以峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线。分别得到白花前胡甲素和白花前胡乙素的回归方程：白花前胡甲素Y=22381X-233494，R2=0.9999，线性范围 36～720μg/ml和白花前胡乙素Y=17048X-171386，R2=0.9999，线性范围36～720μg/ml。

2.2.4 精密度考察：精密取对照品溶液，按“2.2.1”色谱条件项测定，连续进样6次，结果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分别为为0.16%和1.28%，表明仪器的精密度良好。

2.2.5 稳定性考察：取同一供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24h时按“2.2.1”色谱条件项测定，结果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分别为为0.52%和0.91%，表明样品溶液在24h内稳定。

2.2.6 重复性考察：精密称取前胡样品6份，按“2.2.1”色谱条件项测定，结果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分别为为0.27%和1.41%，表明该方法重复性好。

2.2.7 加样回收考察：精密称取前胡样品6份，分别加入不同含量的白花前胡甲素和白花前胡乙素对照品，制得3份不同浓度的样品，并且每个平行3份，按“2.2.1”色谱条件项测定，结果白花前胡甲素和白花前胡乙素RSD分别为0.73%和1.46%，表明方法准确度好。

2.2.8 样品含量测定：取干燥的前胡样品细粉约0.50g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷25ml，塞密，称定重量，超声处理10min，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。进样前用0.45μm的微孔滤膜过滤，得供试品溶液。取供试品溶液10μl进样，根据标准曲线计算各样品中白花前胡甲素和白花前胡乙素的量。

2.3 数据处理：采用Excel2019、SPSS 25.0和Graph‐pad prism 8软件分析作图。

3 结果与分析

3.1 不同种源与不同肥料对前胡产量的影响：由图1可以看出，野生组的产量明显低于其他组别，其次是两年生组，而一年生和残留根无显著性差异，可见还是正常一年生的前胡种子产量相对较大；不施肥的CK组产量明显低于施肥组，复合肥产量稍低于有机肥组，可见施肥有助于提高前胡的产量，有机肥的产量提高相对较高。

图1 不同种源与不同肥料对前胡产量的影响

3.2 不同种源与不同肥料对前胡有效成分含量的影响：结果见图2。种子年限对白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量存在着一定的影响，年限增大两者含量有相应的降低，其中对白花前胡乙素的影响较大。野生组白花前胡甲素的含量大于一年生组，同为一年生种子来源的残留根组白花前胡甲素含量与一年生组无显著性差异，CK组的白花前胡甲素含量远高于施肥的两组。残留根组与两年生组的白花前胡乙含量明显低于低于其他组别。可见仿野生栽培能相对有效的增加前胡有效成分的含量，两年生的种子与残留根栽培的方式无利于前胡有效成分的积累，施肥也会一定程度降低前胡有效成分的积累。

4 讨论

有效成分是评价中药材质量优劣的中药指标之一[2]，产量是影响中药材经济效益的重要因素，因此本文通过测量前胡的有效成分与产量探究不同种源以及不同肥料对前胡的影响，从而寻求一种相对合适的前胡种植方式。不同的种源以及不同肥料，都会对中药材有效成分的合成产生一定的影响，导致中药材质量产生差异。[3-6]本研究结果显示，不同的种源对白花前胡乙素的影响较大，对有效成分总含量表现为野生＞一年生＞残留根＞两年生，其中一年生组与残留根组无显著性差异，野生组有效成分含量虽高但产量偏低，整体表现常规一年生种子仍然存在一定优势，笔者推测前胡种子年限增加不利于有效成分积累以及产量的提高。本文还考察了不同肥料对前胡药材的影响，结果还表明了，施不施肥对白花前胡乙素的含量无显著性差异，不施肥情况下白花前胡甲素的含量却又显著性增高，但不施肥情况下产量却不尽人意。笔者推测肥料的施加可能会影响白花前胡甲素的积累。综上所述，针对野生种子组以及不施肥组的有效成分总含量都相对较高的情况，笔者推测仿野生栽培模式可能更有利于前胡药材的质量的提升，对于仿野生栽培的研究需要更深一步的探讨。

图2 不同种源与不同肥料对前胡有效成分含量的影响