樟帮法泡吴茱萸炮制工艺研究

温慧玲，廖梅香，陈娇婷，张道英，黄 浩

（赣南医学院药学院，江西 赣州341000）

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth、石虎Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.Var.officininalis（Dodo）huang和疏毛吴茱萸Euodia Rutaecarpa（Juss.）Benth.Var.bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟果实［1］。吴茱萸是常用的温里中药，常用于治疗厥阴头痛、寒病腹痛、经行腹痛、朊腹胀痛等症。历代中医药文献均记载本品因其性温燥有毒［2］，传统中医药理论认为吴茱萸通过合理的炮制能起到减毒增效的作用，故多以炮制品入药。

樟帮传统中药炮制始于东汉时期，药祖葛玄在樟树阁皂山洗药炼丹，守药行医，开创了樟帮药业的先河，后经南宋著名药师侯逢丙来樟树设药加工，开店经营，奠定了樟帮药业的基础，至明代逐渐形成了完整的樟帮药业发展体系，该过程前后历时1 800多年［3］。樟树中药炮制，不论炒、浸、泡、炙或烘、晒、切、藏均十分考究，独树一帜，成为南北药材集散和炮制中心。樟树药帮的先贤通过千百年的努力，赢得了“药不到樟树不齐，药不过樟树不灵”的美誉，成为海内外药界同仁认可的中国药都，形成了独具特色的樟帮法炮制饮片工艺［4］。樟帮法中药炮制虽炒、浸、泡、炙或烘、晒、切、藏十分考究，但千百年来这些做法只是作为一种经验传承下来，大部分只是停留于口头，尚未形成科学可循的“炮制规范”。

吴茱萸药材是江西省传统的道地药材之一。樟帮法炮制吴茱萸有别于中国药典法，该炮制过程是以其独特的泡制为其特色。吴茱萸的泡制方法始见于汉代著名医家张仲景所著的几部书中。如《金匮玉函经》和《注解伤寒论》中都提到“洗”法，这是一个比较笼统和模糊的概念［5］。不过，在其同一时期成书的由后人辑录的《新辑宋本伤寒论》中明注：“洗，汤洗七遍”为较具体方法。汤，古人称热水为汤。这也是张氏首次提出用热水来炮制吴茱萸的方法。以后的晋、齐、梁等代都是承袭此法而无甚发展。可见樟帮泡吴茱萸法历史悠久。如2008版《江西省中药炮制规范》记载的泡吴茱萸炮制工艺为取吴茱萸，用开水泡约1 h至顶端开口，再置于锅中炒热，洒入盐水至发香气，焙干。每100 kg吴茱萸，用食盐3 kg［6］。炮制工艺中虽然有些参数规定，但是不完全。为了使炮制更加具有可操作性，现对樟帮法炮制工艺进行优化研究。以期为建立樟帮泡吴茱萸的最佳炮制工艺，为后续的炮制机理研究提供稳定的样品。

1 仪器与材料

戴安3000高效液相色谱仪（UV检测器），UNICO-2000紫外可见分光光度（尤尼康检测仪器有限公司），Sartorius BS214-D（万分之一），Mettler AE240天平（十万分之一），KQ3200超声波清洗器（昆山超声仪器厂），FW100高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司），CFP-110X50型报喜龙电炒锅（报喜龙电器厂），TN408LC型红外测温枪（上海仪迷杰光电技术有限公司），TDGC-2型接触式调压器（环宇集团公司），GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司），HH-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），自动双重蒸馏水器（上海亚荣生化仪器有限公司）；吴茱萸碱，吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对照品（中国药品生物制品检定所提供110802-200504，110801-200505，110800-20040）；乙腈（色谱纯，TEDIA），甲醇（色谱纯，TEDIA），双蒸馏水（自制），甲醇（分析纯，上海振兴化工厂一厂），其他试剂均为分析纯。吴茱萸药材购于江西省樟树庆仁饮片公司，经药学院李加林副教授鉴定为吴茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth。

2 方法与结果

2.1 吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil ODS（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈∶水=50∶50；检测波长，225 nm；柱温：室温；流速：1 mL·min-1；进样量为：20μL（见图1）。

2.1.2 对照品溶液的配制取吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对照品适量，精密称定，分别加入甲醇制成质量浓度分别为0.490、0.580、0.760 mg·mL-1的对照品储备液。

2.1.3 供试品溶液的制备通过对提取溶剂、提取方式、提取时间提取容量的单因素考察，综上确定了供试品的制备方法为：精密称取吴茱萸炮制品粉末（粉碎，过40目筛）约0.2 g，置于锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称重，超声提取60 min，放冷，加甲醇补重，摇匀，过滤，0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.1.4 线性关系考察精密吸取各对照品溶液适量，分别配制成不同浓度的对照品溶液，以色谱峰面积对进样量进行回归分析，得到回归方法：Y吴茱萸碱=4.465 3X+0.983 8，r=0.999 7，Y吴茱萸次碱=1.916 7X－0.471 2，r=0.999 6，Y吴茱萸内酯=0.061 8X+0.020 9，r=0.999 7。结果表明，吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯分别在2.45～34.08μg·mL-1、1.45～58μg·mL-1、22～760μg·mL-1范围内，与峰面积的值呈良好线性关系（见表1）。

2.1.5 精密度试验分别精密的吸取吴茱萸内酯，吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品溶液，重复进样6次，测得吴茱萸内酯的峰面积分别为1.363 8、1.371 2、1.410 8、1.401 7、1.375 2、1.380 7，RSD%为1.33%；吴茱萸碱的峰面积分别为40.910 0、42.249 0、42.244 4、41.162 2、41.115 7、41.209 5，RSD%为1.45%；吴茱萸碱的峰面积分别为8.396 7、8.652 4、8.678 4、8.496 4、8.569 7、8.808，RSD%为1.69%。结果表明精密度良好。

图1吴茱萸供试品色谱图

表1测定成分的线性关系和线性范围

2.1.6 稳定性试验精密称取同一批的吴茱萸（炮制品）样品一份，按照“供试品溶液制备”项下方法制备样品溶液，在0、2、4、6、12、24 h进样，每次进样20μL，结果吴茱萸内酯含量分别为3.143%、3.062%、3.115%、3.143%、3.062%、3.115%，RSD%为1.20%；吴茱萸碱含量分别为0.445%、0.436%、0.446%、0.445%、0.436%、0.456%，RSD%为1.67%；吴茱萸次碱含量分别为0.147%、0.144%、0.144%、0.147%、0.144%、0.148%，RSD%为1.09%。结果表明，样品在24 h内稳定。

2.1.7 重复性试验精密称取同一批的吴茱萸（炮制品）样品6份，按照“供试品溶液制备”项下方法制备样品溶液，准确吸取20μL进样分析，进行含量测定。计算得吴茱萸内酯含量分别为2.543%、2.462%、2.542%、2.552%、2.554%、2.463%，RSD%为1.75%；吴茱萸碱含量分别为0.302%、0.303%、0.310%、0.301%、0.304%、0.302%，RSD%为1.05%；吴茱萸次碱含量分别为0.227%、0.230%、0.224%、0.228%、0.228%、0.230%，RSD%为0.98%。结果表明重复性良好。

2.1.8 加样回收率试验精密称取樟帮炮制品粉末6份，每份约0.1 g，分别精密加入相当于样品中指标成分量100%的3种成分对照品溶液即吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯，按“供试品溶液制备”方法处理并测定，计算回收率。结果显示吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的回收率均在95%～105%，RSD值均小于2%，符合加样回收率要求（见表2）。

2.2 樟帮泡吴茱萸炮制工艺的优选

2.2.1 净选工艺取吴茱萸，拣净果梗，筛去灰屑，备用。

2.2.2 正交表的设计通过樟帮法泡吴茱萸的预试验，确定以吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量为指标，以开水泡制时间（注：指加入开水后放置凉处的时间），加盐的量，炒制温度及炒制时间为考察因素（因素水平表见表3），每个因素选取4个水平，按L16（45）正交表设计实验（正交表设计见表4）。

2.2.3 样品的炮制取大小均匀，色泽均一的吴茱萸16份，每份50 g，按照1∶4（1份药材，4份水的量浸泡），按表4的工艺条件进行炮制，控制温度和时间，出锅后放凉，筛去灰屑，即得。

2.2.4 指标测定选用正交表L16（45）安排试验，以吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量为指标，引用综合指标“隶属度”［7］，将各个指标统一综合考察。因试验测定的三种成分指标越大越好，故指标隶属度=（指标值－指标最小值）／（指标最大值－指标最小值），因为各指标的重要性一样，故综合分数（Y）就直接将各指标隶属度相加（Y=吴茱萸内酯的隶属度+吴茱萸碱的隶属度+吴茱萸次碱的隶属度）。以综合指标来优选最佳炮制工艺参数。采用同樟帮泡吴茱萸（甘草水泡制）炮制品相同数据处理方法优选最佳炮制工艺参数。炮制品按照“吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量测定方法的建立”项下的“供试品溶液的制备”方法制备样品。精密吸取样品20μL进样进行含量测定。结果见表4。

表2吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯加样回收率实验结果

表3樟帮法泡吴茱萸（开水泡制）的因素水平表

表4 L16（45）樟帮法泡吴茱萸（开水泡制）的正交实验及结果表

由表4得到A（开水泡的时间）对于吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱均有显著性的影响，B（盐水的量）对于3个指标无显著性的影响，C（炒的时间）对吴茱萸内酯有显著性的影响，D（炒的温度）对于吴茱萸碱有显著性的影响。由直观分析得到最佳泡制工艺为：A2B4C4D3，考虑到盐的用量对于指标没有显著性的影响，还有成本考虑，故盐水的用量定为水平一，即最佳泡吴茱萸工艺为：A2B1C4D3，即取净吴茱萸一定量，用开水泡1 h（按照1份药材，4份水的量浸泡），然后取出放入250℃的炒锅中加盐一定量，炒18 min，炒干后捞出，放冷，筛去灰屑。每100 kg吴茱萸，加盐3 kg。

2.2.5 工艺验证实验取大小均匀，色泽均一的吴茱萸3份，每份500 g，按照2.2.4的优选工艺制备3批样品，分别测定各指标成分的含量，求出综合评价值Y′，结果见表5。

结果表明，验证实验样品综合评价值Y′与优选结果Y相近，说明优选工艺条件稳定可行。

表5三批样品验证实验各指标含量测定结果

3 讨论

泡吴茱萸为江西樟帮特色炮制饮片，尚未见其炮制工艺的报道。虽然对于吴茱萸其他炮制品的炮制工艺的研究报道较多［8-12］，但是对于樟帮法泡制吴茱萸的炮制工艺研究却报道很少。2015年版《中国药典》收载吴茱萸炮制品有吴茱萸和制吴茱萸。全国部分省市中药饮片炮制规范均收录了吴茱萸和制吴茱萸，其中仅广东、福建和江西三个省份的中药饮片炮制规范收载了泡吴茱萸的炮制方法［13］。有文献研究表明吴茱萸经过不同方法炮制后其酚酸类及黄酮类成分均有所减少。而生物碱类成分因炮制方法的不同有所差异。比如，甘草制吴茱萸中生物碱的含量大于生品中的含量。但是热水浸泡吴茱萸中生物碱的含量低于生品中的含量［8］。其中甘草制吴茱萸中生物碱的含量大于生品中的含量，推测可能是因为甘草中甘草酸和甘草次酸等酸性成分能促进生物碱类成分的溶出［14］。而泡制对吴茱萸饮片中酚酸、黄酮和生物碱类成分均有降低的作用，可能提示泡制品独特炮制的原因。该炮制工艺稳定、可靠、可操作性强，为后续的樟帮泡吴茱萸炮制机理研究提供稳定可靠的样品。