不同枇杷花提取液抗氧化能力研究

（福建农林大学生命科学学院，福州市，350002） 卢庆铮

枇杷是蔷薇科枇杷属植物，主要分布在福建、江苏、广东、浙江等地区。枇杷的花期较长，每个花絮上的花较多，最多的花絮上的花超过200 朵[1]，为了减少过剩枇杷花对营养的消耗，提高枇杷的产量和质量，在生产过程中会对枇杷进行大量的疏花处理，枇杷花具有丰富的氨基酸、黄酮类、酚类、三萜类物质，具有清肺润喉、提神养气、化痰止咳等功效[2]。目前已有大量关于枇杷花的相关研究，主要集中在枇杷花生物活性成分[3]、功能性成分[4，5]和枇杷花的开发利用[6]等方面，关于枇杷花抗氧化活性方面的研究，闫永芳等[7]通过采用DPPH、FRAP ABTS 和福林酚（F-C）方法测定了枇杷花酚类化合物的抗氧化活性；芦艳等[8]通过ABTS、硫酸铝比色法、普鲁士蓝法、F-C法等对不同花期醇提物的抗氧化活性进行研究。目前尚未有枇杷花不同提取液抗氧化能力研究的相关报道，因此本研究利用水、70%乙醇、无水乙醇三种溶剂对枇杷花进行提取，采用DPPH 和ABTS 自由基清除能力法对提取液的抗氧化能力进行研究，以期为枇杷花的开发利用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

枇杷花，2019年10月采于福建漳州市。

1.2 试验试剂和仪器

无水乙醇、维生素C（Vc）、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2，2-氨基-二（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）、过硫酸钾。

电热鼓风干燥箱（DHG-9240A，上海一恒科学仪器有限公司）；电子天平（Denver TP-214，丹佛仪器有限公司）；手提式粉碎机（HK-04A，广州市旭朗机械设备有限公司）；紫外-可见分光光度计（T6 新世纪，北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 枇杷花提取液制备

将新鲜枇杷花置于60℃烘箱中烘干至恒重，用手提式粉碎机打成粉末（80 目），取5g 枇杷花细粉，按料液比1:10回流2h，选用水、70%乙醇、无水乙醇三种溶剂，抽滤后浓缩，加相应溶剂溶解定容至50mL（100mg/mL），用0.45um 的微孔滤膜过滤后保存于-20℃中。实验时用相应溶剂稀释成10mg/mL、1mg/mL、0.1mg/mL。

1.3.2 对照品溶液的制备

取Vc用水稀释0.1mg/mL。

1.3.3 清除DPPH自由基试验

（1）配制质量浓度为39.40μg/mL 的DPPH 自由基无水乙醇溶液；存放冰箱，30天内有效。

（2）取100uLDPPH 溶液和100uL 样品混合，静置30min后，于517nm波长检测吸光度。

（3）公式：

式中：A0为DPPH自由基乙醇溶液与纯水混合液的吸光度；Ai 分别表示DPPH 自由基乙醇溶液加等体积样品测得的吸光度；每个样品重复3次，取平均值。

表1 不同枇杷花提取液DPPH自由基清除能力

表2 不同枇杷花提取液ABTS+自由基清除能力

1.3.4 清除ABTS自由基试验

（1）取76mgABTS和13mg过硫酸钾，加20mL水溶解，常温下暗室反应16h，将此溶液稀释50 倍待用。

（2）将待测溶液和配置好的ABTS 自由基溶液等体积混合，静置30min后，于734nm波长测其吸光度。

（3）公式：

式中：A0 为ABTS 自由基溶液与等体积纯水等体积混合液的吸光度；Ai 分别表示ABTS 自由基溶液加等体积测试液；每个样品重复3次，取平均值。

2 结果与分析

2.1 不同枇杷花提取液DPPH自由基清除能力

通过对不同枇杷花提取液的DPPH自由基清除能力进行测定，得到表1。由表1可以看出，枇杷花不同溶剂提取液均具有清除DPPH 自由基的能力。且在枇杷花提取液浓度为10mg/mL 和1mg/mL 时，清除DPPH自由基的能力为：无水乙醇提取液＞70%乙醇提取液＞水提取液；在枇杷花提取液浓度为0.1mg/mL时，清除DPPH自由基的能力为：70%乙醇提取液＞无水乙醇提取液＞水提取液。

2.2 不同枇杷花提取液ABTS自由基清除能力

通过对不同枇杷花提取液的ABTS自由基清除能力进行测定，得到表2。由表2可以看出，枇杷花不同溶剂提取液均具有清除ABTS 自由基的能力。且在枇杷花提取液浓度为10mg/mL 和1mg/mL 时，清除ABTS自由基的能力为：无水乙醇提取液＞70%乙醇提取液＞水提取液；在枇杷花提取液浓度为0.1mg/mL时，清除ABTS自由基的能力为：70%乙醇提取液＞无水乙醇提取液＞水提取液。

3 讨论与结论

枇杷花中酚类、黄酮类物质都具有良好的抗氧化能力，酚类物质能够预防癌症、心血管疾病和神经性疾病等，黄酮类化合物具有保护血管、活化大脑、疏通微循环、预防动脉硬化等多种功能[9]，本研究的结果也表明不同枇杷花提取液均具有一定的抗氧化能力。

不同提取溶剂和不同浓度提取的枇杷花提取液抗氧化能力也不同，闫永芳等[7]的研究结果表明枇杷花提取物抗氧化能力测试中DPPH 法和ABTS法测得的实验结果总体趋势非常相似，这与本研究得出的结果一致。本研究结果表明在枇杷花提取浓度为 10mg/mL 和 1mg/mL 时，清除 DPPH 和 ABTS自由基的能力为：无水乙醇提取液＞70%乙醇提取液＞水提取液；在枇杷花提取液浓度为0.1mg/mL时，清除DPPH和ABTS自由基的能力为：70%乙醇提取液＞无水乙醇提取液＞水提取液。

因此，可以根据枇杷花提取物的功效作用开发出特色产品，比如枇杷花茶、枇杷花酒等等，充分利用生产中剩余的枇杷花，创造附加价值。本研究为枇杷花的开发利用提供理论依据。