Anti-MCV、14-3-3η蛋白和anti-RA33等在类风湿关节炎检测中的意义①

谭立明 张 倩 卢晓霞 宫阳阳 张皓承 刘宇晗 余建林 曾婷婷 彭卫华

(南昌大学第二附属医院，南昌 330006)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以慢性炎症为表现形式的自身免疫性疾病，它以可致长期关节损伤的顽固性滑膜炎为主要特征，常导致慢性疼痛、功能丧失和残疾，这种疾病在世界范围内的发生率为0.5%～1%，可发生于任何年龄[1]。大多数RA患者体内会产生许多种自身抗体，自身抗体是一组错误地以机体特定组织或器官为靶目标的抗体，免疫系统一旦产生可攻击自身细胞、组织或器官的抗体，往往会导致炎症和损伤，如抗瓜氨酸化蛋白抗体(anti-citrullinated protein antibodies,ACPA)，这类抗体在体内存在得越多，关节破坏就越严重，同时自身抗体和抗原形成复合物成为外源性致热源，因此患者常有发热症状[2，3]。现有的RA的诊疗依据主要为临床表现、实验室诊断和影像学检查，由于RA的表现多样、检查指标的灵敏度不一，因此临床工作中对RA的诊断仍存在着不足。抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(anti-mutated citrullinated vimentin antibody，anti-MCV)是ACPA的成员之一，RA患者中anti-MCV的有效价值与疾病活动评分(disease activity score,DAS)密切相关[3]。14-3-3η蛋白是广泛表达于真核生物的酸性可溶性二聚体蛋白，其浓度在RA患者血清与关节滑液中显著升高[4,5]。与之相似的还有anti-RA33，在RA早期诊断中有较好的应用价值[6]。类风湿因子(rheumatoid factor,RF)和anti-RA33同为自身抗体，并且是首个应用于RA检测的血清学指标，其灵敏度较高[7]。本研究对南昌大学第二附属医院161名RA患者、151名非RA患者和40名健康体检者进行了以上指标的检测，探究其对诊断RA的意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1资料

1.1.1主要仪器 Anti-MCV、14-3-3η蛋白和anti-RA33试剂分别购自上海科新生物技术股份有限公司、美国Flarebio 生物技术有限责任公司和德国IMTEC公司；采用美国贝克曼公司 IMMAGE 800 型全自动特定蛋白分析系统及配套试剂。

1.1.2研究对象 受试者均为2018年1月至2019年10月南昌大学第二附属医院门诊及住院的确诊患者或健康体检者。RA组为161例RA患者，男33例，女128例，年龄19～84岁，平均(53.94±12.32)岁，入选标准均符合欧洲抗风湿病联盟(EULAR)最新提出的RA诊断标准[8]；non-RA组为151例非RA患者，其中SS组35例，男1例，女34例，年龄29～81岁，平均(56.40±13.23)岁，SLE组36例，男5例，女31例，年龄18～65岁，平均(41.86±12.15)岁，AS组40例，男27例，女13例，年龄17～70岁，平均(35.10±13.56)岁，痛风性关节炎患者组40例，都为男性，年龄25～81岁，平均(56.60±14.25)岁；健康对照组为40例，男17例，女23例，年龄21～64岁，平均(35.50±11.45)岁，均为该院体检中心健康体验者。所有患者均符合相关指南诊断标准，并经相关科室医生确认。所有标本均在患者知情同意条件下获得，并获得南昌大学第二附属医院伦理委员会批准许可。

1.1.3纳入标准 研究对象签署知情协议书，并且自愿参与；患者诊断明确，影像、临床学资料明确；对入选患者的资料再次评估，排除合并其他自身免疫性疾病；健康体检者各系统常规检查无异常。

1.1.4排除标准 合并甲状腺疾病、慢性肝脏疾病、肾脏疾病、肺部疾病、严重心脑血管疾病、糖尿病及血液病；妊娠或哺乳期妇女。

1.2方法

1.2.1标本来源 对所有入选对象均采集空腹静脉血标本3.00 ml，静置30 min，3 000 r/min离心15 min，备用。

1.2.2检测方法 Anti-MCV、14-3-3η蛋白和anti-RA33水平均采用ELISA 法测定。RF水平通过速率散射比浊法测定。计算各指标的灵敏度(sensitivity,Se)、特异度(specificity,Sp)、约登指数(youden index,YDI)、阳性预测值(positive predict value,PPV)、阴性预测值(negative predict value,NPV)、阳性似然比(+LR)和阴性似然比(-LR)，评价各指标对RA 的诊断价值。以上操作均严格遵循各试剂或仪器说明书及南昌大学第二附属医院质量管理标准进行。

2 结果

2.1各组anti-MCV、14-3-3η蛋白、anti-RA33和RF水平比较 RA组血清各指标水平均显著高于非RA组和健康对照组，结果经非参数Kruskal-Wallis检验统计分析并进行成对比较，显示组间差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 Anti-MCV、14-3-3η蛋白、anti-RA33和RF检测水平比较Tab.1 Serum levels of anti-MCV,14-3-3η protein,anti-RA33 and

2.2标志物检测结果临床评价 各标志物中，对RA诊断的灵敏度、 约登指数和阴性预测值最高的是anti-MCV，14-3-3η蛋白对RA诊断的阳性预测值最高，anti-RA33对RA诊断的灵敏度最低但特异度最高，RF对RA诊断的灵敏度居中但特异度最低。见表2。

表2 Anti-MCV、14-3-3η蛋白、anti-RA33和RF对RA的检测结果临床评价Tab.2 Clinical evaluation of anti-MCV,14-3-3η protein,anti-RA33 and RF for RA

2.3标志物的ROC曲线分析 根据各组指标所测得水平绘制ROC 曲线。结合各标志物诊断RA的ROC曲线以及曲线下面积可知，anti-RA33对RA的诊断价值较低，RF对RA有一定的诊断价值，14-3-3η蛋白和anti-MCV对RA有较高的诊断价值，其中anti-MCV的诊断价值更高。见图1、表3。

图1 各标志物诊断RA的ROC曲线Fig.1 ROC curves of each marker in diagnosis of RA

表3 各组标志物的ROC曲线参数Tab.3 Parameters of markers of each group′s ROC curve

3 讨论

RA患者血清中能够检测到多种自身抗体。这些自身抗体的存在是患者多器官受累的主要原因，患者的症状通常为关节肿胀，在超声检测结果显示血流信号丰富的部位，患者常主诉疼痛，当炎症危重时，全身关节疼痛的症状将会出现，不经治疗的话将致残甚至致死，因此有必要早期诊断此疾病从而方便做一些治疗或调理来改善患者的生存质量[9,10]。大多数RA患者体内会产生许多种自身抗体，例如ACPA，它包括抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide,anti-CCP)和anti-MCV等等，它们在对有关节痛、关节肿胀或者是关节畸形这些症状的患者的鉴别诊断上起着至关重要的作用[3]。anti-MCV在RA患者的关节滑液组织中易见，近年来的研究指出，anti-MCV在早期RA病人的诊断中体现出明显的高灵敏度优势，这优势的来源是MCV抗原的结构特点[11]。14-3-3η蛋白也是RA患者滑液组织中可见的蛋白，是细胞内能与超过200种配体蛋白相结合的重要信号转导蛋白，能产生抗14-3-3η蛋白自身抗体[12]。研究发现14-3-3蛋白家族水平的异常改变对肺癌的开端、形成和发展起着一定的作用[13]。同时，14-3-3η蛋白水平和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)-1的表达水平正相关，而MMPs已被大量证实与RA患者关节软骨的骨质破坏相关，由此可得14-3-3η蛋白的水平可以反映RA患者的骨侵蚀情况[14]。和14-3-3η蛋白一样，anti-RA33和RF是另外两种自身抗体。RA33是异质性核糖核蛋白的核心蛋白A2,能与分子量33 KD的核酸蛋白发生反应，所以由此蛋白产生的抗体被称作anti-RA33。RF作为最早用于风湿疾病的观测指标，具有检测方法简便快速、阳性率高等特点[15]。

本研究证实，anti-MCV、14-3-3η蛋白、anti-RA33和RF都是RA患者血清中浓度显著升高的指标。在RA组，anti-MCV浓度的均值是331.43U/ml，该抗体浓度的正常水平是0～20 U/ml，有关节腔积液的RA患者中的anti-MCV浓度明显增高，这是因为一方面，瓜氨酸波形蛋白可结合到破骨细胞表面，刺激破骨过程和骨的吸收，诱导骨质破坏,另一方面瓜氨酸化蛋白能刺激IFN-γ和IL-17分泌细胞增殖,从而导致RA患者发生炎症反应，刺激滑膜液的分泌而且影响滑膜液的吸收，从而导致关节腔积液。本研究对anti-MCV的临床评价所得结果都较高，相对而言anti-RA33的灵敏度最低，但特异度最高。有文献表明，anti-RA33对于早期且轻微的RA和其他波及全身的互相关联的组织炎症有诊断意义[16]。其发挥诊断RA作用的重要特性是其特异度高，这与本研究的结果是相似的。RF作为一个经典的诊断RA的指标，其灵敏度和特异度都较高，不过其诊断效能不及anti-MCV，RF在RA组的阳性率为73.29%，在非RA组的阳性率为20.53%，资料显示，RF在多种感染性疾病以及其他自身免疫性疾病甚至健康老年人血清中都可以检测出阳性，导致其对RA诊断的特异度低，与本研究结果相符[17]。从ROC曲线中看，anti-MCV的AUC是最高的，次之为14-3-3η蛋白，再次为RF,最小为anti-RA33，再次证明anti-MCV与14-3-3η蛋白对RA有较高的诊断价值，RF对RA有一定的诊断价值，anti-RA33对RA有较低的诊断价值，anti-MCV在本研究中诊断价值最大[18，19]。本研究的结果和Barouta G等[20]的结果相似，anti-MCV可作为检测RA的1个高效指标。

综上所述，anti-MCV、14-3-3η蛋白、anti-RA33和RF都是在检测RA中有意义的指标，其中anti-MCV 灵敏度与诊断价值最高，因此有理由认为anti-MCV水平升高是确诊疑似RA患者的重要依据，临床医生可以将此依据与14-3-3η蛋白、anti-RA33和RF的水平相结合辅助检测RA。