HBV感染相关慢性肝损伤性肝病患者anti-CCP定量水平变化研究

徐翠玲 汪方园 银广悦 钱成荣 刘继勇

carcinoma

乙型肝炎病毒在全世界范围内流行，其感染严重威胁人类健康。HBV感染引起肝损伤慢性化的确切机制尚未完全阐明。目前多数研究认为，宿主免疫调控紊乱是导致HBV感染慢性化的重要原因[1-3]。抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibodies，anti-CCP)是类风湿的一项检测指标，但近年来发现anti-CCP也存在于非RA的患者血清中[4]，且其检测多为定性检测，而定量检测报道则少见[5]。本研究旨在通过观察HBV感染相关慢性肝病不同阶段anti-CCP水平变化情况，分析其与HBV感染慢性肝损伤之间的关系以及对肝免疫损伤的预测价值，为临床治疗和预后研究提供免疫学指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2017年5月至2018年1月在我院就诊的慢性乙型病毒性肝炎患者89例为慢乙肝组、乙型病毒性肝炎肝硬化患者73例为肝硬化组、原发性肝细胞癌患者32例为肝癌组和30例健康体检者为对照组。慢性乙型病毒性肝炎和乙肝肝硬化患者诊断均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[6]的诊断标准，原发性肝癌患者诊断符合《原发性肝癌诊疗规范(2017年版)》[7]的诊断标准。患者在3个月内均未经免疫调节剂及抗病毒治疗，并排除合并其他肝炎病毒感染、酒精性肝炎等非病毒性肝炎、免疫系统疾病及其他系统严重疾病。4组一般资料，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准，所有受试对象均签署知情同意书。见表1。

表1 4组一般资料比较

1.2 方法 采集受试者空腹时肘静脉血样本5 ml，入离心机，以4 000 r/min转速离心5 min，分离获取血清，并在-70℃条件下保存，且开展anti-CCP定量检测、肝功能、肿瘤标志物、凝血功能的检查，其中，检测主要仪器及试剂：(1)anti-CCP定量检测：采用美国BEKMAN COULTER AU5800全自动生化分析仪检测，试剂采用宁波美康生物科技股份有限公司生产的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)进行检测。(2)肝功能，检测，检测仪器与anti-CCP定量检测相同，统计指标：①天门冬氨酸氨基转移酶(AST)；②谷氨酸氨基转移酶(ALT)；③总胆红素(TBIL)；④直接胆红素(DBIL)。(3)肿瘤标志物，采用罗氏Cobas E601全自动电化学发光仪，并联合配套试剂以酶联免疫分析法进行检测，检测指标：①糖抗原125(CA125)；②癌胚抗原(CEA)；③甲胎蛋白-L3(AFP-L3)。在试验过程中，所有检测项目均严格按照仪器操作规程和试剂盒说明书要求进行检测。

2 结果

2.1 4组anti-CCP水平比较 慢性乙肝组、肝硬化组及肝癌组anti-CCP水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；慢性乙肝组、肝癌组均低于肝硬化组，差异有统计学意义(P<0.05)；慢乙肝组anti-CCP水平与肝癌组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 4组anti-CCP浓度水平比较

2.2 4组肝功能水平比较 慢乙肝组、肝硬化组、肝癌组AST、ALT、TBIL、DBIL水平均高于对照组(P<0.05)；慢乙肝组、肝硬化组AST高于肝癌组(P<0.05)；慢乙肝组TBIL、DBIL低于肝硬化组及肝癌组(P<0.05)；肝硬化组AST、TBIL、DBIL水平高于肝癌组(P<0.05)，而ALT水平低于肝癌组(P<0.05)。见表3。

2.3 4组肿瘤标志物比较 慢乙肝组、肝硬化组、肝癌组、对照组AFP-L3水平、CA199水平，组间两两比较，差异有统计学意义(P<0.05)；慢乙肝、肝硬化组、肝癌组CA125水平均高于对照组(P<0.05)；慢乙肝CA125水平低于肝癌组、肝硬化组(P<0.05)；肝硬化组CA125水平与肝癌组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

3 讨论

anti-CCP系环状聚丝蛋白多肽片段。Schellekens等[8]依据丝集蛋白 (Filaggrin)的CDNA序列合成由21个氨基酸残基组成的环瓜氨酸肽，该多肽即为抗CCP抗体的靶抗原。anti-ccp在2010年被美国风湿病学会列为RA的分类诊断标准之一[9]，但也有研究发现，HBV感染可以引起抗 CCP抗体的升高，其产生机制可能与HBV感染诱发炎症，肝细胞被破坏，蛋白肽段的瓜氨酸化有关[10]。

表3 4组肝功能水平比较

表4 4组肿瘤标志物比较

本研究结果发现，慢性乙型肝炎组anti-CCP水平高于对照组，其原因可能是由于在慢性乙型病毒性肝炎患者中，HBV感染不直接引起肝细胞病变，而与感染后引起机体的免疫应答状态有关[11,12]，机体的免疫应答致肝细胞损伤,HBV在肝细胞内复制增殖，肝细胞抗原结构发生变化，肝细胞细胞内成分释放,血清中形成针对瓜氨酸化的蛋白肽段的抗体，因此乙肝病毒性肝炎患者中anti-CCP水平存在中度表达。本次研究涉及肝病的患者体内存在免疫应答、聚集炎性反应情况，其中，免疫应答与细胞免疫关系密切，而细胞免疫主要是Th1细胞及Th2细胞。据文献报道，乙肝感染不同阶段，患者免疫水平也随之下降[13]。另外，肿瘤标志物也是反映慢乙肝、肝癌及肝硬化肝功能的重要指标[14]。

本研究发现，慢性乙肝组CCP浓度水平低于乙肝肝硬化组，提示随着乙肝病程进展，CCP浓度水平随之升高，这一点与本研究中乙型肝炎肝硬化组患者的anti-CCP水平显著高于其他各组的结果相一致。随着CCP浓度升高，炎症程度增加，乙肝病程随之进展，随着肝细胞炎症程度增加，肝脏损伤程度随之提升，anti-CCP水平也增高，同时我们认为存在随着自身免疫反应的加剧，乙肝病程亦随之进展的过程，两者间存在相互促进的关系。其机制可能由于在乙肝肝硬化患者中，由于HBV在肝细胞内的持续慢性感染及复制，肝细胞的破坏不断进行，肝细胞炎症增加，肝脏内皮细胞逐渐坏死，肝小叶的正常结构被破坏，一方面随着炎症程度增加，血清中产生的针对瓜氨酸化的蛋白肽段的抗体浓度增加，另一方面，与肝硬化时肝小叶的正常结构被破坏，肝代谢功能下降，机体内产生的抗体累积增加有关，因此，在肝硬化患者中，anti-CCP水平存在较高表达。本研究中，慢乙肝、肝硬化及肝癌患者AST、ALT、TBIL、DBiL水平均与健康对照组间差异均存在统计学意义(P<0.05)。本研究还发现，原发性肝癌患者anti-CCP的水平低于肝硬化组和慢性乙肝组，但与肝硬化组有统计学性差异，而与慢乙肝组无统计学差异，其原因由于HBV对肝细胞的长期反复损害，HBV DNA整合到肝细胞DNA引起突变，从而引起肝细胞的恶变[15,16]，导致原发性肝癌的发生，而HBV复制所需的生物学环境日趋恶化，机体免疫应答下降，产生的抗体随之下降。因此，对于未使用免疫调节剂且持续anti-CCP高水平表达的肝硬化患者，动态监测anti-CCP水平如呈下降趋势时是否可以提示患者有恶变的可能性，这有待我们进一步去研究。

综上所述，anti-CCP的水平与HBV感染后机体肝免疫损伤以及机体的免疫状态有关，对临床了解肝脏的损伤程度，观察疗效，判断预后具有重要意义。

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