梅州市2017～2019年外环境禽流感标本检测结果分析

邹勇文 陈志青

[摘要]目的 分析梅州市2017～2019年外环境禽流感标本检测结果，为预防和控制禽流感疫情提供合理依据。方法 收集梅州市2017年1月～2019年12月禽类市场外环境标本4176份，采用荧光定量PCR方法对甲型流感病毒核酸以及H5、H7、H9亚型流感病毒核酸进行检测，依据检测结果分析禽流感病毒污染情况。结果 2017～2019年梅州市禽类市场外环境标本禽流感核酸病毒检测中，2018年甲型流感病毒检出数比例呈现上涨趋势，高于2017、2019年，其中H5、H9类型呈现上涨，H7检出率呈现下降，其中案板台面、刀具砧板、禽类粪便、秤具秤盘外环境标本中甲型流感病毒各亚型检出数显著偏高。结论 梅州市禽类市场外环境检出多种亚型禽流感病毒，以屠宰、销售环境相关外环境污染状况严重，重点加强对禽类市场外环境清洁消毒制度的落实，对重点人群做好防护工作。

[关键词]梅州市;外环境;禽流感;标本;检测

[中图分类号] R44          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2020）9（c）-0247-03

[Abstract] Objective To analyze the test results of avian influenza specimens in external environment of Meizhou′s poultry market during the period from 2017 to 2019， provide reasonable basis on the disease prevention and control. Methods From January 2017 to December 2019， 4176 specimens from external environment of Meizhou′s poultry market were obtained. Fluorescent quantitative PCR was applied to detect nuclein acid， H5， H7 and H9 subtypes of avian influenza A virus. Environmental pollution conditions were examined. Results Test results indicated that the detection rate of avian influenza A virus in 2018 was higher than that in 2017 and 2019. H5 and H9 infection rate was increased while H7 rate was decreased. The cases with virus subtypes from chopping board countertops， knife sticky boards， poultry manure， weighing pans were substantially increased. Conclusion Many virus subtypes are generated in the external environment of Meizhou poultry market， especially for those of animal slaughter and selling booths. Therefore， the disinfection system of poultry market environment shall be implemented for protection of focus groups.

[Key words] Meizhou city; External environment; Avian influenza; Specimens; Detection

禽流感是指A型流感病毒感染所引起的禽類呼吸道系统传染疾病，流感病毒将禽类作为宿主，传播至禽类，不会感染人类，一旦禽流感病毒基因发生重组、突变，此时禽类之间传染禽流感病毒亚型会传播至人类引起感染，严重情况导致流感流行[1]。自2013年，人感染H7N9病例以来，影响到禽类养殖业，并造成巨大损失，对人类健康造成严重威胁。近些年来研究表明[2]，出现禽流感病毒变异，如H10N8、H5N6和H7N4等禽流感病例。部分研究表明[3]，此时人感染禽流感病毒重要因素为与禽类直接接触，因此，提高对禽类及其饲养场所外环境标本的监测，能控制禽流感发生。为了解梅州市外环境禽流感病毒污染情况，防止出现疫情，保障人民群众身体健康、生命安全，我市对2017～2019年外环境禽流感标本检测情况进行以下分析，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

收集梅州市2017年1月～2019年12月禽类市场外环境标本4176份，2017年样本收集1697份，2018年样本收集1184份，2019年样本收集1295份，按照《广东省家禽鸟类市场环境样品禽流感病毒污染监测方案》[4]及相关指引要求，收集梅州市代表性禽类交易市场，收集禽类外环境标本，每月将部分活禽批发市场、农贸市场禽类零售档口作为外环境采集样本地点，样本收集包括禽类排泄物、笼具表面、笼具放置地面、刀具表面、禽肉案板表面等环境标本，带病保存，及时送至疾病预防控制中心实验室开展检测。

1.2方法

本次研究开展，纳入样本检测，以《人感染高致病性禽流感诊断标准：WS 284-2008》[5]（附录D）中关于标本检测作为依据。提取样本中病毒核酸，研究所用仪器为西安天隆科技有限公司核酸提取仪，核酸提取试剂盒为西安天隆科技提取试剂盒，批号为19120710T014。病毒核酸检测所用仪器为ABI 7500 fast，检测所用试剂盒批号：T201908088。甲型流感病毒核酸实时荧光PCR检测试剂盒为北京卓诚惠生生物科技股份有限公司（XABT）生产，检测所用试剂盒批号：T201901001。H5/H7/H9亚型禽流感病毒核酸三重实时荧光PCR检测试剂盒为北京卓诚惠生生物科技股份有限公司（XABT）生产，检测所用试剂盒批号：T201901001。扩增反应体系及条件严格按照试剂盒说明书进行设置及操作。

2结果

2.1 2017～2019年梅州市禽类市场外环境标本禽流感病毒核酸检测情况

2017～2019年梅州市禽类市场外环境标本禽流感核酸病毒检测中，2018年甲型流感病毒检出数比例呈现上涨趋势，高于2017、2019年，其中H5、H9类型呈现上涨，H7检出率呈现下降（表1）。

2.2 2017～2019年梅州市禽类市场不同环境类型标本禽流感病毒核酸检测情况

其中案板台面、刀具砧板、禽类粪便、秤具秤盘外环境标本甲型流感病毒各亚型检出数显著偏高，占据核酸检测结果前四位（表2）。

3讨论

禽流感病毒归属至黏病毒科甲型流感病毒属，主要发病对象为禽类。1997年香港出现首例跨越物种屏障人类感染禽流感病毒，后续病毒随着时间推移出现变异，常常出现禽流感病毒致病、致死事件[6]。2013年，我国发现新型重配H7N9禽流感病毒感染，截至2017年6月30日，病毒感染流行次数达到5次以上，总计感染人数为1552例，死亡率为40.00%。至2017年春季，高致病性禽流感病毒出现，导致25人感染，给我国社会经济造成损害[7]。同时研究表明[8]，部分人禽流感病毒基因在外环境下可重组，当部分基因位点出现变异，并为跨种传播奠定基础。近些年来相關研究表明[9]，此时接触活禽、暴露于活禽市场是人类感染禽流感病毒的重要风险因素，活禽市场在禽流感病毒传播中发挥着放大的作用。因此，对禽类相关环境中禽流感病毒开展监测，对后续禽流感疫情防范起着重要的临床意义。

梅州市处于闽、粤、赣三省交接处，作为活禽交易重要地域，禽类来源范围广泛，福建、江西等地域均有活禽输入，且本地散养户众多，此时禽流感防控上，整体形势严峻[10]。本研究结果显示，通过对梅州市禽类市场外环境标本禽流感病毒核酸检测情况分析得出，梅州市禽类市场外环境普遍存在禽流感病毒污染，2017、2018、2019年甲型流感病毒检出情况分别为18.80%、25.25%、19.31%，呈现上升趋势。2017～2019年检出甲型流感病毒感染，证实上述地区中，禽流感病毒污染情况严重，并广泛存在本地区禽类市场外环境。鉴于本次调查规模仅抽取部分禽类交易市场集中区域进行监测，建议梅州市相关部门仍需加强对禽类环境长期、持续的监测，以期更准确地了解梅州市本地禽类交易市场外环境禽流感的污染情况。通过分析2017～2019年各亚型流感病毒转变情况，流行亚型为H9，其中H5、H9并存，进一步提示，禽类市场外环境中，存在禽流感病毒发生重配条件。自2018年，将H9亚型恢复，与我国农业生产活动中2015年推广应用新型禽用H5亚型禽流感疫苗、2017年大面积应用重组禽流感病毒二价疫苗相关。上述措施落实，能改善外环境高致病性禽流感污染情况，控制禽流感发生，有效防控人感染禽流感疫情[11]。对2017～2018年梅州市禽类市场不同环境类型标本禽流感病毒核酸检测情况分析，其中案板台面、刀具砧板、禽类粪便、秤具秤盘等外环境标本中甲型流感病毒各亚型检出数显著偏高。依据多年累积禽流感病毒研究分析结果表明，上述病毒生命力顽强，并广泛隐藏至污水、案板及粪便各种外环境中[12]。阳性率偏高为笼具表面、刀具砧板、禽类粪便、秤具秤盘外环境，进一步得出，禽类市场周边外环境整体感染率偏高，一旦流感病毒基因变异，出现禽传人现象，市场内爆发性流感发生率偏高。活禽农贸市场作为感染禽流感危险场所，建议相关部门重视对活禽农贸市场彻底消毒管理。加强对禽类养殖管理，加强出栏前免疫检疫，对活禽市场，落实“一天一清洗，一周一大扫除，一月一休市、活禽零存栏”制度，并积极推行“集中屠宰、冷链配送、冰鲜上市”，降低人群禽流感暴露风险[13]。同时，提高市区内对人群禽流感病原学、市场环境禽流感污染状况监测，并对禽流感病毒动态分布趋势深入分析，提高对致病力、传播能力的监测，评估风险程度，并依据结果实施干预措施[14]。同时，对禽类市场作业工作人员，积极宣传相关卫生防病知识，提高个人防护及自我保护意识，积极对其他禽类、排泄物所接触环境、地域进行清理和消毒，减少人群感染禽流感病例[15]。上述措施实施，仍然无法消除禽类市场外环境病毒污染风险。长远发展上，需转变市民直接购买活禽习惯，减少乃至杜绝与活禽接触机会。

综上所述，梅州市禽类市场外环境检出多种亚型禽流感病毒，以屠宰、销售环境相关外环境污染状况严重，重点加强对禽类市场外环境清洁消毒制度的落实，对重点人群做好防护工作。

[参考文献]

[1]吴照春，李贤相，汪金生，等.安庆市外环境中H7N9禽流感病毒应急监测分析[J].中国公共卫生，2018，34（6）：887-890.

[2]张冬艳，王吉玲，马岩，等.2013-2016年浙江省绍兴市外环境H7N9禽流感监测分析[J].现代预防医学，2017，44（15）：2861-2864.

[3]王璐璐，孙海波，孙佰红，等.辽宁省外环境禽流感病毒监测结果[J].预防医学，2019，31（3）：221-224.

[4]广东省卫生厅《广东省家禽鸟类市场环境样品禽流感病毒污染监测方案》（粤卫函[2013]275号）[Z].

[5]人感染高致病性禽流感诊断标准：WS 284-2008[S].2008.

[6]周霞，吴万里，胡澜怀，等.2015-2017年攀枝花市环境和职业暴露人群禽流感检测结果[J].职业与健康，2018，34（3）：391-394.

[7]亓云鹏，顾伟玲，富小飞，等.嘉兴市外环境禽流感病毒污染状况及职业暴露人群H5N6、H7N9和H9N2抗体水平调查[J].实用预防医学，2018，25（4）：417-420.

[8]刘静雯，刘慧，陆剑云，等.广州市2013-2015年人感染H7N9禽流感外环境监测结果分析[J].中国公共卫生，2016， 32（10）：1382-1386.

[9]王晓柳，饶国强，程晓呤等.2013-2014年浙江省武义县职业暴露人群及外环境H7N9禽流感病毒监测分析[J].实用预防医学，2016，23（6）：712-714.

[10]邓立权，范明，黄飚，等.吉林省活禽市场外环境禽流感污染情况调查[J].中国公共卫生，2017，33（3）：493-495.

[11]李灵之，黄政，叶文，等.长沙市2117份外环境标本禽流感病毒监测结果分析[J].现代预防医学，2017，44（23）：4369-4372，4390.

[12]刘文俊，吴倩，周乐，等.2012～2018年扬州市禽流感职业暴露人群抗体及外环境监测结果分析[J].国际病毒学杂志，2019，26（6）：361-364.

[13]韩志国，高枫，薛娜，等.2013-2015年乌鲁木齐市外环境标本中禽流感病毒监测结果分析[J].中华微生物学和免疫学杂志，2017，37（6）：457-460.

[14]丁惠萍，徐玉凤.2011～2018年宁夏吴忠市外环境禽流感病毒监测分析[J].宁夏医科大学学报，2019，41（9）：919-921.

[15]史伟，张蕾，李慎，等.2011-2017年陕西省外环境中禽流感病毒污染情况分析[J].中国人兽共患病学报，2018，34（10）：952-956.

（收稿日期：2020-02-14）