静脉血全血细胞分析的可接受样本量*

郑翠玲,李博伟,程焱,崔巍

(国家癌症中心&国家肿瘤临床医学研究中心&中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院检验科，北京 100021)

全血细胞计数结果为临床疾病诊断和治疗提供重要的参考依据，可以应用全自动血细胞分析流水线进行静脉血检测，具有速度快、精密度高、操作简单、报告时间短等优点。合格的静脉血标本是保证其结果准确性的前提。在日常工作中，由于采样困难或采样不规范而导致标本不合格的情况频繁发生，其中采血量不足是重要原因之一[1-3]。大量研究表明，采血量不足会对凝血项目、临床生化检验项目结果产生影响，但关于采血量影响全血细胞分析结果的研究少见。本研究通过评估静脉血样本量对全血细胞计数结果的影响，制定本实验室全血细胞分析可接受的样本量。

1 材料与方法

1.1研究对象 以2018年8月于中国医学科学院北京协和医院肿瘤医院就诊的20例健康志愿者为研究对象，排除1例采血不顺利，1例标本溶血，1例采血量不符合要求后，共入选17例健康志愿者，其中男9例，女8例，年龄(35.0±8.0)岁。纳入标准：自觉健康，近期未曾手术或服用药物，近期未曾献血、输血或大量失血，无慢性理化损伤(如长期暴露于电离辐射环境)或长期接触化学物质(苯等)，女性无月经量过多、未处于妊娠或哺乳期。排除标准：血液系统疾病(贫血、白血病、血小板异常疾病等)，心脑血管疾病(心肌梗死、高血压、脑梗死等)，恶性肿瘤，呼吸系统疾病(肺结核、慢性阻塞性肺疾病等)，泌尿系统疾病(尿路感染、肾小球肾炎、肾病综合征等)，消化系统疾病(肠炎、慢性腹泻、消化性溃疡等)。

1.2仪器与试剂 XN-9000全自动血细胞分析流水线及其配套的校准物、质控物和试剂(日本Sysmex公司)，2 mL乙二胺四乙酸二钾(EATD-K2)真空采血管(美国BD公司)，一次性使用蝶翼式采血针(浙江康德莱公司)。

1.3方法

1.3.1标本采集 采血前，非标准量(1.8 mL、1.6 mL、1.4 mL、1.2 mL和1.0 mL)通过校准的移液器吸取相应体积的EDTA-K2抗凝血而确定。所有受检者在晨起、空腹、静息状态下由经验丰富的采血人员用蝶翼式采血针采集标准量(2 mL)和非标准量抗凝血标本。颠倒混匀后置于室温，0.5～2 h内完成检测。

1.3.2全血细胞分析 标本检测前确保XN-9000全自动血细胞分析流水线使用状态正常，室内质控在控，室间质量评价合格。取上述17例健康志愿者不同采血量的标本充分混匀后上机检测，进行全血细胞分析。采用流式细胞术检测白细胞(white blood cell，WBC)，采用鞘流阻抗法检测红细胞(red blood cell，RBC)及血小板(platelet，PLT)，采用SLS血红蛋白法检测血红蛋白(hemoglobin，Hb)。记录全血细胞计数中的WBC、RBC、PLT、Hb、红细胞比容(hematocrit，HCT)、平均红细胞体积(mean corpuscular volume，MCV)、平均红细胞血红蛋白量(mean corpuscular hemoglobin，MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC)共计8项结果。以2.0 mL采血量的全血细胞计数结果为标准量组，将非标准量的结果与其进行比较。

1.4数据分析 比较标准量和非标准量标本的WBC、RBC、HCT、Hb、PLT、MCV、MCH和MCHC的相对偏差。WBC、RBC、HCT、Hb、PLT的相对偏差标准参照美国临床实验室改进修正法案(CLIA′88)，规定允许误差的1/2作为临床允许误差(WBC≤7.5%、RBC≤3.0%、HCT≤3.0%、Hb≤3.5%、PLT≤12.5%)；MCV、MCH、MCHC 的相对偏差标准则参照WS/T406-2012“临床血液学检验常规项目分析质量要求”，以允许误差为可接受标准(MCV≤3.5%、MCH≤3.5%、MCHC≤3.5%)[2]。各参数相对偏差符合率≥80%为临床可接受。

2 结果

2.1不同样本量全血细胞计数结果差异比较 不同样本量全血细胞计数中的WBC、RBC、HCT、Hb、PLT、MCV、MCH和MCHC指标结果见表1。非标准量标本的各项指标与2.0 mL标准量组相比，差异均无统计学意义(P均>0.05)。进一步对不同采血量的全血细胞计数结果进行组间两两比较，结果差异均无统计学意义(P均>0.05)。

表1 不同采血量的全血细胞计数结果之间的比较

2.2不同样本量全血细胞计数结果的相对偏差符合率 不同采血量的WBC、RBC、Hb、HCT、PLT、MCV、MCH、MCHC结果的相对偏差符合率见表2。在所分析的8个参数中，PLT、MCV和MCH的相对偏差符合率最高，均达到100%；WBC、Hb、MCHC的相对偏差符合率较高；而RBC和HCT的相对偏差符合率较低。

表2 全血细胞计数结果相对偏差符合率(%)

3 讨论

全血细胞分析应尽可能使用静脉穿刺方式采集样本[3-4]。国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐使用1.5～2.2 mg/mL 的EDTA-K2抗凝剂，标准采血量为2 mL，而“采血不足”最影响样本稳定性[5-6]。我院患者因放化疗导致血管损伤、部分患者病情危重或老年患者自身静脉状态不佳等原因，经常出现样本量低于2 mL的情况。因此，实验室制定可接受的样本量对于保证结果的准确性和减少检验性失血具有重要的意义。

为了减少其他因素对全血细胞分析的影响，本研究采取了以下措施：(1)由同一名抽血人员进行标本采集；(2)使用同一批号的采血针和真空采血管；(3)由同一名检测人员在XN-9000全血细胞分析流水线的同一个模块上严格按照操作规程进行检测；(4)选择健康志愿者而非患者，以排除疾病本身或治疗措施对于全血细胞计数结果的影响。本研究结果显示，非标准量与标准量相比，全血细胞计数结果的差异无统计学意义(P>0.05)，且其相对偏差均在临床可接受范围内。国内文献对于静脉血全血细胞分析样本量的结论并不一致。章小红[7]发现1.5 mL采血量与2 mL采血量的结果差异无统计学意义(P>0.05)，0.5 mL和1.0 mL与2.0 mL采血量的MCV、PLT结果差异均有统计学意义； 0.5 mL和1.0 mL的负压管其WBC、RBC、HGB和PLT的结果差异有统计学意义(P≤0.01);去除负压后0.5 mL管与2.0 mL管的MCV和PLT结果差异也具有统计学意义(P<0.01)。而张弛[8]在考虑0.5 mL采血量结果不精密度偏高以及对异常分析结果需要复查及复检等因素后,建议临床上使用1.0 mL采血量进行全血细胞分析。本实验室所使用的XN-9000全自动血细胞分析仪进行全血细胞分析的必要样本量为1 mL，结合本研究的结果，我们制定静脉血最低采血量为1.0 mL，可接受样本量为1.0～2.0 mL，<1.0 mL的标本应拒收。经过2018年9月至今的临床应用，1.0～2.0 mL的样本量对于全血细胞计数结果的影响在临床上是可以接受的。本研究也存在一些不足之处，如仅纳入健康志愿者作为研究对象，而肿瘤及其他疾病的患者未纳入，且研究例数相对较少。因此，后续应扩大样本量，同时纳入不同疾病类型的患者，进一步研究不同疾病情况下不同采血量是否会对全血细胞计数结果产生影响，从而制定不同人群的全血细胞分析的可接受采血量。在不影响检测结果准确性的情况下，尽可能减少患者尤其是慢性疾病患者的检验性失血。综上所述，采血量会影响静脉血的全血细胞计数结果，制定本实验的可接受样本量及标本拒收标准，既可确保全血细胞计数结果的准确性，又可减少检验性失血。