HPLC 法同时测定前列消胶囊中9 种成分

焦 健 董 伟 赵善冬 任维鑫 张 超

（1.济南市人民医院， 山东 济南271199； 2.山东中医药大学中药学院， 山东 济南250355）

前列消胶囊由虎杖、土茯苓、泽泻、鹿茸、金樱子等11 味药材加工而成，临床上主要用于尿频、尿急、尿涩痛、小便淋漓不尽、腰膝酸软等前列腺炎属下焦湿热证的治疗［1］，可明显缓解慢性前列腺炎患者临床症状，疗效显著［2］。但该制剂现行质量标准仅对大黄酸进行定量分析，而该成分来源广泛，专属性不强，难以全面控制质量。

中药及其制剂组成多样，作用机理复杂，通过多种成分之间的协同作用来达到临床疗效，故多指标成分检测模式近年来已逐步应用于其质量控制中。虎杖苷为虎杖特征成分，具有保护心血管系统、抗氧化、提高机体免疫力的作用［3⁃4］；落新妇苷、花旗松素、黄杞苷等黄酮为土茯苓主要成分，具有利尿、镇痛、抗炎、抗氧化、免疫抑制、抗肿瘤等作用［5⁃6］；泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇B 等三萜为泽泻药效成分，具有利尿、降脂、降糖、降血压等药理作用［7⁃8］。本实验参考中药质量标志物确定原则，采用HPLC 法测定前列消胶囊中君药虎杖特征成分虎杖苷，臣药土茯苓主要活性成分落新妇苷、花旗松素、黄杞苷，佐药泽泻代表性成分泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇B 的含有量，以期为全面评价该制剂质量提供依据。

1 材料

1.1 仪器 UltiMate3000 型高效液相色谱仪（美国赛默飞世尔科技公司）；XPR205D5／AC 型电子天平（瑞士梅特勒⁃托利多公司）；SB⁃800DT 型超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 试剂与药物 23⁃乙酰泽泻醇B（批号111846⁃201705，纯度99.7%）、落新妇苷（批号111798⁃201805，纯度93.6%）、花旗松素（批号111816⁃201102，纯 度98.9%）、黄杞苷（批 号111906⁃201102，纯度93.7%）对照品均购自中国食品药 品检定 研究院；虎杖苷（批 号PRF8071241，纯 度98.8%）、泽泻醇A（批 号14112903，纯度98.5%）、24⁃乙酰泽泻醇A（批号PRF8050342，纯度99.6%）对照品均购自成都普瑞法科技开发有限公司；泽泻醇 F（批号CFS201701，纯 度 98.0%）、泽泻醇 G（批 号CFS201702，纯度98.0%）对照品均购自武汉天植生物技术有限公司。前列消胶囊（每粒装0.3 g，批号20190107、20190302、20190405）购自吉林省德商药业股份有限公司。乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备 精密称取虎杖苷、落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇B 对照品适量，60% 乙醇制成各成分质量浓度分别为1.568、3.092、0.476、1.318、0.132、0.354、0.182、0.116、1.172 mg／mL 的贮备液，各精密吸取2.5 mL，置于同一50 mL 量瓶中，60%乙醇定容至刻度，即得（各成分质量浓度分别为78.4、154.6、23.8、65.9、6.6、17.7、9.1、5.8、58.6 μg／mL）。

2.2 供试品溶液制备 取胶囊数粒，倾出内容物后研成细粉，精密称取2.0 g，精密加入25 mL 60%乙醇，称定质量，超声提取30 min，放冷，60%乙醇补足减失的质量，滤过，即得。

2.3 阴性样品溶液 按胶囊处方工艺，分别制备缺虎杖、缺土茯苓、缺泽泻的阴性样品，按“2.2” 项下方法制备，即得。

2.4 色谱条件 Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）⁃0.1%冰醋酸（B），梯度洗脱（0～12.0 min，20.0% A；12.0～18.0 min，20.0%～25.0% A；18.0～34.0 min，25.0%～30.0% A；34.0～39.0 min，30.0%～55.0% A；39.0～58.0 min，55.0%～80.0% A；58.0～65.0 min，80.0%～20.0% A）；体积流量1.0 mL／min；柱温30 ℃；0～34.0 min 在291 nm波长处检测虎杖苷、落新妇苷、花旗松素、黄杞苷［9⁃10］，34.0～65.0 min 在208 nm 波长处检测泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇B［11⁃12］；进样量10 μL。

2.5 方法学考察

2.5.1 专属性试验 取对照品、供试品、阴性样品溶液适量，在“2.4” 项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，各成分色谱峰峰形对称，与相邻峰均能有效分离，分离度均大于1.5，理论塔板数按各成分计均不小于4 000，阴性无干扰。

2.5.2 线性关系考察 精密吸取“2.1” 项下贮备液2.0 mL，60%乙醇定容至20 mL，精密吸取适量，60%乙醇依次稀释2、5、10、15、20 倍，在“2.4”项色谱条件下进样测定。以溶液质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，结果见表1，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表1 各成分线性关系Tab.1 Linear relationships of various constituents

图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.5.3 精密度试验 精密吸取“2.1” 项下对照品溶液，在“2.4” 项色谱条件下进样测定6 次，测得虎杖苷、落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇B 峰面积RSD 分别为0.63%、0.57%、0.92%、0.69%、1.20%、0.99%、1.07%、1.15%、0.76%，表明仪器精密度良好。

2.5.4 重复性试验 取同一批胶囊，按“2.2”项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.4” 项色谱条件下进样测定，测得虎杖苷、落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇含有量RSD 分别为1.07%、0.96%、1.53%、1.11%、0.61%、1.36%、1.42%、0.79%、1.23%，表明该方法重复性良好。

2.5.5 稳定性试验 取同一份供试品溶液，于0、2、4、6、12、24 h 在“2.4” 项色谱条件下进样测定，测得虎杖苷、落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇峰面积RSD 分别为0.65%、0.59%、0.89%、0.71%、1.18%、1.01%、1.06%、1.14%、0.78%，表明溶液在24 h 内稳定性良好。

2.5.6 加样回收率试验 取各成分含有量已知的同一批胶囊数粒，倾出内容物，研成细粉，精密称取9 份，每份1.0 g，每3 份为1 组，按2015 年版《中国药典》 四部要求精密加入对照品溶液（虎杖苷1.152 mg／mL、落新妇苷2.298 mg／mL、花旗松素0.316 mg／mL、黄杞苷0.978 mg／mL、泽泻醇F 0.092 mg／mL、泽泻醇A 0.226 mg／mL、24⁃乙酰泽泻醇A 0.138 mg／mL、泽泻醇G 0.082 mg／mL、23⁃乙酰泽泻醇B 0.848 mg／mL）0.5、1.0、1.5 mL，使待测成分加入量分别约为样品含有量的50%、100%、150%，按“2.2” 项下方法制备供试品溶液，在“2.3” 项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，虎杖苷、落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇平均加样回收率分别为99.58%、100.09%、97.88%、99.73%、96.94%、98.93%、98.77%、97.81%、99.98%，RSD 分别为1.03%、0.77%、1.42%、0.99%、1.21%、1.14%、1.28%、1.39%、0.87%。

2.6 样品含有量测定 取3 批胶囊，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，每批平行3 份，在“2.3” 项色谱条件下进样测定，计算含有量，结果见表2。

表2 各成分含有量测定结果（mg／g， n＝3）Tab.2 Results of content determination of various constituents（mg／g， n＝3）

3 讨论

3.1 提取方法筛选 本实验比较了提取溶剂（甲醇［13］、95% 乙 醇、60% 甲 醇、60% 乙 醇［9⁃10，14］）、提取方式（超声［9⁃13］、加热回流［14］）、提取时间（15、30、45 min）对各成分综合提取率的影响，发现60%乙醇超声提取30 min 时最高，而且杂质干扰较小。

3.2 洗脱系统筛选 本实验首先考察了乙腈⁃水［9，11⁃12，14］流动相，发现色谱图基线有漂移，虎杖苷、落新妇苷、黄杞苷色谱峰峰形不理想，存在拖尾现象。再考察了乙腈⁃0.1% 冰醋酸［10，13］、乙腈⁃0.1%甲酸［8］，发现以乙腈⁃0.1% 冰醋酸洗脱时色谱图基线平稳，各成分峰形对称，与相邻峰的分离效果良好。

3.3 含有量分析 表2 显示，不同批次前列消胶囊中各成分含有量存在一定差异，以24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G 更明显，可能与原药材产地、采收季节等因素有关。

4 结论

本实验采用HPLC 法同时测定前列消胶囊中虎杖苷、落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、泽泻醇F、泽泻醇A、24⁃乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、23⁃乙酰泽泻醇B 的含有量，该方法操作便捷，结果准确，可为该制剂质量控制提供依据，并有助于生产企业完善原药材质量标准，降低批次间差异，从而达到产品质量的稳定性和临床疗效的一致性。