TTF-1、Ki67及P63蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义 *

黄花英，刘 洋，周 莹，魏 溪，阳 韬，张 金

江苏大学附属人民医院：1.呼吸与危重症医学科；2.病理科，江苏镇江 212002

肺癌是源自支气管黏膜或腺体的恶性肿瘤。在我国，其发病率居于所有恶性肿瘤的首位，患者被发现时多已处于晚期，预后较差。临床上将肺癌按病理学表现分为非小细胞肺癌(NSCLC)与小细胞肺癌，其中NSCLC更常见，主要包括鳞状细胞癌、腺癌等。流行病学研究表明，NSCLC的发病率为23.3/10 000～55.4/10 000[1]。目前，临床上以外科手术、化疗及生物靶向药物等作为NSCLC的主要治疗手段，但部分患者预后较差，易发生远处转移。肺癌确诊与分型的金标准为病理检查。对于中-高分化的NSCLC一般不难诊断，但是对于分化差肿瘤的分型,有时十分困难，甚至不能在光镜下鉴别，特别在CT引导下经皮肺穿刺、经纤维支气管镜针吸活检术或超声支气管镜引导下经支气管针吸活检术检查中，由于标本取材少、组织挤压、细胞坏死或其他原因导致诊断困难。这就需要寻找适合NSCLC诊断的免疫组化检测指标。

甲状腺转录因子-1(TTF-1)是一种相对分子质量为40×103的核蛋白，属于NKX2转录基因家族的主要成员，在肺泡上皮细胞和甲状腺上皮细胞的分化中发挥着重要的作用。其还可调节肺泡表面蛋白A、B和支气管无纤毛分泌细胞抗原基因表达，在患者病情进展过程中起着至关重要的作用[2]。细胞核相关抗原Ki-67(Ki67)是近年来广大医务人员公认的有效评估肿瘤细胞增殖活性的一种标志物，在肺癌中的作用已得到广泛认可，且随着肺癌患者病情的不断加重以及淋巴结转移，其表达明显上升[3]。P63蛋白常表达于上皮组织基底层，在正常上皮组织的形成中发挥重要作用。P63蛋白在鳞状细胞源性的各种良恶性肿瘤组织中表达，尤其在鳞状细胞癌组织中表达增强，且表达水平及分布与鳞状细胞癌细胞的癌变程度显著相关[4]。在正常肺组织中，P63蛋白表达于支气管储备细胞中，不表达于肺泡上皮细胞、纤毛细胞或非上皮细胞。为了进一步揭示TTF-1、Ki67和P63蛋白在NSCLC患者中的表达情况以及这3种蛋白同患者临床病理表现的关系，本研究收集了相关病例进行研究，以期为NSCLC的临床诊断和预后评价提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择128例经病理检查确诊为NSCLC且于2013年9月至2019年5月在江苏大学附属人民医院接受手术切除的患者，其中男93例，女35例；年龄30～86岁，平均(65.52±70.04)岁；组织学分级：中-高分化56例，低分化72例；远处转移78例，无远处转移50例；淋巴结转移73例，无淋巴结转移55例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期61例，Ⅲ～Ⅳ期67例。术前与术后，每例患者都未行化疗、放疗干预，且无肺以外的原发肿瘤。

1.2方法 采集研究对象NSCLC组织进行病理检查，4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续切片(厚度4 μm)后进行免疫组化染色(SP法)。鼠抗人TTF-1单克隆抗体、鼠抗人Ki67单克隆抗体以及鼠抗人P63单克隆抗体均购自南京凯基生物制剂有限公司。

1.3判断指标 TTF-1、Ki67及P63蛋白均定位于细胞核，阳性表达为棕色或黄色颗粒。在高倍镜下进行观察，取5个视野共计数100个细胞，按照染色强度及阳性细胞所占比例进行评分，具体标准如下：染色后细胞无着色或肿瘤细胞阳性表达<10%为阴性；肿瘤细胞阳性表达10%～25%为“+”；肿瘤细胞阳性表达>25%～50%为“++”；肿瘤细胞阳性表达在50%以上为“+++”。

1.4统计学处理 采用SPSS23.0统计软件进行数据处理和分析。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1TTF-1、P63蛋白与Ki67在NSCLC组织内SP法染色结果 选取3张具有代表性的染色图片，从图1中可以观察到TTF-1、Ki67和P63蛋白均定位于细胞核，呈棕褐色或棕黄色，灶性、片状或弥漫分布。

2.2不同临床特征NSCLC患者TTF-1、Ki67和P63蛋白阳性率的比较 这3种蛋白在NSCLC组织中都呈阳性表达。TTF-1表达与TNM分期、分化程度以及远处转移均有关(P<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期患者NSCLC组织TTF-1阳性率明显低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，中-高分化患者NSCLC组织TTF-1阳性率明显低于低分化患者(P<0.05)，有远处转移患者NSCLC组织TTF-1阳性率明显高于无远处转移的患者(P<0.05)，而TTF-1阳性率与淋巴结转移无关患者(P>0.05)。Ki67表达与TNM分期、远处转移、淋巴结转移以及分化程度均有关(P<0.05)。P63蛋白表达与TNM分期、远处转移有关(P<0.05)，与淋巴结转移及分化程度无关(P>0.05)。见表1。

注：A为TTF-1阳性表达；B为Ki67阳性表达；C为P63蛋白阳性表达。

表1 不同临床特征NSCLC患者TTF-1、Ki67与 P63蛋白阳性率比较[n(%)]

3 讨 论

肺癌是常见的恶性肿瘤，其发病率和病死率在恶性肿瘤中较高。虽然肺癌的治疗手段不断更新，患者的生存率有所提高，但总体疗效仍不理想，5年生存率并没有明显提高。近年来随着分子生物学技术的发展和对肺癌发生、发展机制认识的不断深入，分子靶向治疗逐渐成为肺癌治疗的主要手段，而且也取得了较为满意的治疗效果，但有些靶向治疗或联合治疗方案与肿瘤组织学类型密切相关。在实际工作中，有些肺癌的组织学类型仅靠光镜难以确诊，必须借助免疫组化法来确诊。随着免疫组化法在肺癌诊断中的应用，研究表明，多种抗体联合检测在肺癌组织学分类中的诊断意义远远优于单一抗体[5]。并且肺癌的组织学类型和免疫表型比较复杂，寻找一套简单而特异的抗体组合显得尤为重要。本文通过检测TTF-1、Ki67、P63蛋白在128例NSCLC患者中的表达，发现这3种蛋白对于NSCLC的鉴别诊断具有重要意义。

TTF-1由常染色体14q13的单一位点基因所编码，能参与调控许多基因的表达，主要分布于甲状腺、间脑和呼吸道上皮[6]。近年来，TTF-1被认为是肺腺癌中最敏感、特异的标志物，已被广泛用于原发性肺癌和转移性肺癌的鉴别诊断。汪潜云等[7]研究发现，在58例NSCLC患者中，TTF-1阳性是一个不良的预后因素，并且与性别、年龄、肿瘤部位、组织分级、淋巴结转移及TNM分期均无关(P>0.05)。本研究发现，TTF-1表达与TNM分期、分化程度以及远处转移均有关(P<0.05)，但是与淋巴结转移无关(P>0.05)。

Ki67基因定位于第10号染色体，其蛋白质产物定位于细胞核，由相对分子质量为345×103和395×103的两条多肽链组成，其在G1后期开始出现，在S期和G2期逐渐升高，M期达到高峰，有丝分裂结束后迅速降解消失，G0期无表达[8]。研究表明，多种实体恶性肿瘤中Ki67的阳性率要远远高于正常组织，并且与肿瘤的发生发展、浸润转移及预后有关，Ki67表达的高低，对评价细胞增殖活性，研究肿瘤的生物学行为和预后具有重要意义[9]。纪勇等[10]研究发现，在67例肺癌手术患者中，淋巴结转移组Ki67的表达高于无淋巴结转移组;TNM分期Ⅲ期组Ki67的表达高于Ⅰ、Ⅱ期组；低分化组的表达高于高分化组。这提示Ki67的表达可能与肿瘤的浸润转移、TNM分期和分化程度有关。本研究发现，Ki67表达与TNM分期、远处转移、淋巴结转移以及分化程度均有关(P<0.05)。这提示Ki67表达越高，肿瘤组织细胞增殖越活跃，分化程度越低，患者预后差。

P63基因是P53基因家族成员之一，在人和鼠的上皮组织(包括表皮、宫颈、泌尿道及前列腺等具有鳞状上皮分化潜能的基底层细胞、副基底层细胞及肌上皮细胞)中广泛而有选择性地表达[11]。P63基因可能对肺鳞状细胞癌的发生、发展起着特别的作用。在本组128例NSCLC组织内，P63蛋白表达与TNM分期、远处转移有关(P<0.05)，与淋巴结转移及分化程度无关(P>0.05)。GURGUS等[12]研究发现，检测P63蛋白和TTF-1 的表达可用于区分小细胞肺癌和低分化的NSCLC。因此，TTF-1、Ki67和P63蛋白可能是诊断NSCLC的有效生物标志物，对于判断NSCLC的恶性程度和预后具有一定的临床意义。