五种消毒剂杀菌效果实验

李燕 赵玮 石海春 张孝兰

摘  要：本实验选择5种消毒剂分别对5种细菌杀菌效果进行评估，结果表明，卫可稀释至1600倍、聚醇醚碘稀释至200倍、苯扎溴铵稀释至5000倍、过氧乙酸稀释至3000倍、戊二醛稀释至100倍，作用10 min，可完全杀灭肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌和绿脓杆菌。

关键词：消毒剂;细菌;杀菌效果

中图分类号：S859.79+9.1     文献标识码：B     文章编号：1673-1085（2020）9-0051-03

养鸡场利用化学消毒剂对鸡舍及其周围环境进行消毒是做好生物安全措施的关键环节[1]，化学消毒剂根据其作用机制和化学结构，可以分为碱类、氯类、碘类、溴类、醛类、醇类、过氧化物类、酚类、季铵盐类、双胍类等，其作用机理主要是改变微生物结构，干扰细胞代谢，导致微生物死亡[2-3]。

为反映不同种类消毒剂对不同致病菌的杀灭效果，本实验采用细菌悬液定量法，选取生产中常用的5种消毒剂作为研究对象，分别就其对沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌等5种常见致病菌的杀菌效果和有效灭菌浓度进行研究，为生产场区选择有效消毒液提供参考。

1  材料

1.1  菌株  肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌和绿脓杆菌，均为从鸡场环境和孵化场毛蛋中分离到的菌株，用鉴别培养基纯化，再用营养肉汤培养后冻存备用。

1.2  消毒剂  卫可、聚醇醚碘、苯扎溴铵、过氧乙酸和戊二醛。

1.3  其它试剂和实验材料  营养肉汤、生理盐水、18 mm×180 mm 带塞试管、棉签、100 μL吸头、 1 mL吸头、10～100 μL单道移液器、100～1000 μL单道移液器、5 mL单道移液器、超净工作台、37 ℃恒温培养箱、麦氏比浊管、分光光度计、高压灭菌锅等。

2  方法

2.1  制备菌液  将纯化的细菌用灭菌棉签涂布到琼脂板上，24 h后用灭菌生理盐水把菌苔洗下来，用麦氏比浊管法和分光光度计法调整细菌浓度为2×108 CFU/mL。

2.2  消毒剂溶液的配制  每种消毒剂按厂家提供的浓度，适当扩大或缩小稀释倍数，用无菌纯水对消毒液进行稀释。

2.3  悬液定量杀菌试验[4]  取4.5 mL各种浓度消毒液加到灭菌的6 mL离心管中，37 ℃预热，然后将0.5 mL菌悬液加入预热的消毒液中，立刻混合均匀并记时，同时设立阳性对照（0.5 mL菌悬液和4.5 mL生理盐水）和阴性对照（5 mL生理盐水），37 ℃恒温培养箱中分别作用10 min和30 min，吸取100 μL混合液均匀加入营养琼脂平板中，37 ℃恒温培养24 h，观察结果并进行菌落计数。

3  结果

检测结果见表1。

在实验室条件下，衛可稀释至1600倍、聚醇醚碘稀释至200倍、苯扎溴铵稀释至5000倍、过氧乙酸稀释至3000倍、戊二醛稀释至100倍，作用10 min，可完全杀灭5种细菌。低浓度的戊二醛作用10 min，仍有细菌生长，但是延长作用时间至30 min，可完全杀灭细菌，其他消毒液也有相同情况，说明延长消毒液作用时间可增强抑菌效果。菌落计数结果表明，相同浓度的消毒液对绿脓杆菌的杀灭效果低于其他4种细菌，可见属于假单胞菌属的绿脓杆菌抗药性较强。

4  讨论

五种消毒剂中，卫可主要成分是过硫酸氢钾三盐复合物，可以杀灭各种病原微生物，其代谢产物不会对人类和环境带来影响，主要用于禽舍、空气、饮水、畜禽等消毒。过氧乙酸属于过氧化物类消毒剂，氧化性极强，因其腐蚀性强，要避免高浓度大剂量使用，使用过程中注意安全。聚醇醚碘是单质碘、聚乙二醇和苯基醚复合物，刺激性、腐蚀性和毒性低，常用于皮肤甚至粘膜消毒;但是碘易挥发，见光易分解，需要密封、避光保存。苯扎溴铵是一种季铵盐阳离子表面活性消毒剂，毒性低、无腐蚀性、性质稳定，主要用于器械、物体表面和手部消毒，忌与碘制剂、过氧化物和阴离子表面活性剂同用。戊二醛是活泼的烷化剂，其抗菌活性不受低温影响，2%的碱性戊二醛溶液活性较强，能杀灭细菌繁殖体、真菌、芽胞，刺激性小，主要用于鸡舍喷雾和器具浸泡消毒。

本实验结果表明，按照厂家推荐的浓度，卫可和过氧乙酸灭菌效果很好，聚醇醚碘和苯扎溴铵基本符合，戊二醛低浓度不能完全杀灭细菌，但可以通过延长作用时间来达到更好的杀菌效果。本实验是在实验室条件下进行的，而在实际应用过程中会受到有机物、温度、稀释液等因素的影响[5]，建议消毒前先彻底清扫污物，还要注意稀释液的酸碱度，根据不同消毒对象选择不同种类消毒剂和使用浓度。同时，尽量避免消毒剂混合使用，可以交替使用消毒剂，降低单一消毒剂对致病菌的耐药性[6]。

参考文献：

[1]  孙秀如，卢永胜，张梅芳，等.如何建立种鸡场的生物安全体系[J].中国家禽，2008，11（2）：43-44.

[2]  佟海山，陈遇英.我国兽用消毒剂的应用现状与对策[J].中国兽医杂志，2017，53（9）：115-117.

[3]  任凯，解猛，姜文汉，等.常用化学消毒剂的作用机理[J].中国卫生工程学，2004，3（1）：55-56.

[4]  徐利平，陈小萍.戊二醛消毒剂的安全性与临床应用[J].中国消毒学志，2005，22（1）：96-98.

[5]  安云科.影响消毒剂效果的因素及选择消毒药的原则[J].黑龙江畜牧兽医，2012（1）：78-79.

[6]  班海群， 李新武， 张流波.消毒剂的使用对细菌耐药的潜在影响[J].中国消毒学杂志，2008，2（3）：308-312.