WNT10B在肺鳞癌组织中表达升高

路 琳，顾艺荀，徐兴祥，闵凌峰，陈彦亮，王霄霖，陈 勇*

(苏北人民医院 1.肿瘤科；3.呼吸与重症内科； 4.胸外科， 江苏 扬州 225001;2.大连医科大学， 辽宁 大连 116044)

肺癌是全世界范围内发病率和病死率最高的恶性肿瘤[1]，肺癌组织学类型中肺鳞癌约占全部肺癌的30%。由于肺鳞癌的基因型更复杂、EGFR突变率低[2-3]，靶向治疗并没有为肺鳞癌患者带来治疗疗效上的突破[4]。WNT信号传导途径是由配体蛋白WNT和膜蛋白受体结合激发的一组多下游通道的信号传导途径，对肿瘤细胞的增殖分化、侵袭和凋亡起着重要作用。目前已经发现多种WNT蛋白，本研究通过检测肺鳞癌患者肿瘤组织标本中WNT10B的表达状况，分析WNT10B与临床病理特征之间的关系，分析WNT10B的表达与肺鳞癌患者预后的联系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源：肺鳞癌标本组织芯片(HLug-Squ150Sur-01)(上海芯超生物科技有限公司肺癌组织芯片库)，包含75例肺鳞癌组织及与之配对的癌旁正常肺组织，组织芯片的每个点都经过病理诊断，手术时间为2004年7月至2007年11月，随访截至2012-07-31。所有患者术前均未接受放化疗或其他抗肿瘤治疗，所有临床病理资料及随访数据均来自上海芯超生物科技有限公司。患者中男70例，女5例。年龄36～78岁，中位年龄64岁，其中<70岁48例，≥70岁26例，无法判断1例。T1期17例，T2期39例，T3期12例，T4期6例，无法判断1例。有淋巴结转移30例，无转移40例，无法判断5例。无远处转移73例，有转移2例。组织学分级为Ⅰ级13例，Ⅱ级40例，Ⅲ级22例。根据UICC第7版TNM 分期标准，Ⅰ期27例，Ⅱ～Ⅳ期46例，无法分期2例。

1.1.2 试剂：小鼠抗人WNT10B 单克隆抗体(5A7)(Abcam公司)，羊抗鼠HRP二抗及二氨基联苯胺(DAB)试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.2 免疫组化染色检测蛋白表达

采用二步法进行免疫组化染色，严格按照试剂操作说明进行，组织芯片先经脱蜡水化，经乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修复液修复，一抗孵育(WNT10B鼠抗人单克隆抗体，1∶5 000稀释)，4 ℃过夜，加羊抗鼠HRP二抗，37 ℃孵育1 h， DAB显色，苏木精复染，梯度乙醇脱水后封片。WNT10B蛋白阳性染色为细胞质呈黄色至棕黄色。在双盲情况下，由两名病理科医师对每个标本进行染色结果判断及评分：细胞质内出现淡黄色至棕褐色颗粒状物视为阳性，未出现视为阴性。阳性染色强度计分：无阳性染色，弱阳性(+)；黄褐色，阳性(++)；深棕褐色，强阳性(+++)。阴性及弱阳性表达纳入低表达组；阳性及强阳性表达纳入高表达组。

1.3 统计学分析

采用SPSS 13.0统计软件进行相关统计分析。计数资料的比较采用χ2检验。Kaplan-Meier 生存分析和log-rank检验以及Cox比例风险模型分析WNT10B蛋白表达与肺鳞癌预后的相关性。

2 结果

2.1 WNT10B在肺鳞癌组织中的表达

整个组织芯片有5例癌组织脱片无法评价，癌旁有1例组织脱片无法评价，WNT10B主要表达于肺鳞癌细胞质中，WNT10B在癌旁正常肺组织中低表达(图1，2)。WNT10B在肺鳞癌组织的表达明显高于癌旁正常肺组织(P<0.05)(表1)。

表1 肺鳞癌与癌旁组织中WNT10B蛋白的表达Table 1 Expression of WNT10B protein in lung squamous cell carcinoma and adjacent tissues

图1 肺鳞癌组织芯片的HE及WNT10B免疫组化染色结果Fig 1 HE staining and WNT10B immunohistochemical staining of lung squamous cell carcinoma tissue chips

from top to bottom were 0，+，++，+++图2 肺鳞癌及癌旁正常组织中WNT10B的表达Fig 2 Expression of WNT10B in adjacent normal tissues and lung squamous cell carcinoma (×200)

2.2 WNT10B表达与肺鳞癌患者临床病理特征关系

T3～T4期肿瘤的WNT10B表达显著高于T1～T2期肿瘤 (P<0.05)；WNT10B的表达与肿瘤组织的分化程度显著相关，分化越差，WNT10B表达越高 (P<0.05)(表2)。

表2 WNT10B表达与肺鳞癌患者临床病理特征之间的关系Table 2 Relationship between WNT10B expression and clinicopathological characteristics of patients with lung squamous cell carcinoma

2.3 WNT10B表达与肺鳞癌患者预后之间的关系

癌组织中WNT10B低表达者预后显著优于WNT10B 高表达者(P<0.05)(图3)。性别、淋巴结转移和WNT10B的表达是肺鳞癌的独立预后影响因素(表3)。

图3 不同表达WNT10B水平肺鳞癌患者的生存曲线Table 3 Survival curves of patients with lung squamous cell carcinoma with different expression of WNT10B

表3 Cox比例风险模型分析结肺鳞癌预后相关因素Table 3 Cox proportional hazard model analyzes prognostic factors of lung squamous cell carcinoma

3 讨论

WNT/β-catenin信号通路在生物体的发育中起重要作用[5]，而异常激活与肿瘤的发生发展紧密相关[6]。WNT家族至少包括19种WNT蛋白，其中WNT10B在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用[7-11]。在胃癌中，抑制细胞WNT10B的表达导致了胃癌细胞的增殖侵袭能力下降[7]。在胰腺癌中，降低细胞WNT10B的表达能够抑制胰腺癌细胞BxPC-3的侵袭和转移[8]。在结直肠癌组织中WNT10B低表达，WNT10B低表达患者的预后优于WNT10B高表达患者[11]。在子宫内膜癌中，癌组织WNT10B的表达较正常组织高，但是随着组织学分化越来越差，WNT10B的阳性表达率逐渐降低，并且WNT10B高表达组患者的预后好于低表达组[12]。本研究运用肺鳞癌组织芯片分析 WNT10B在肺鳞癌组织和癌旁组织的表达情况，结果表明WNT10B在肺鳞癌组织中高表达，而在癌旁组织中低表达，这一结果与既往研究结果一致[7-8]。通过临床资料分析发现，WNT10B高表达者T分期越晚，分化程度越差。既往研究显示WNT10B还参与肿瘤的淋巴结转移[7, 11]，但本研究未发现WNT10B的表达与淋巴结转移有关，可能与病例数少以及部分数据缺失有关。通过随访观察，发现WNT10B表达和性别均是独立的预后影响因素，但由于本组患者中仅有5例女性患者，所有本研究有关性别的结果还需要大样本数据的进一步的验证。本研究缺少肺部非肿瘤疾病的标本，同时未进行半定量分析，这些将会继续予以改进。

综上所述， WNT10B在肺鳞癌组织中表达增高，并与临床病理因素及预后密切相关，WNT10B有望成为肺鳞癌的一个新的肿瘤标志物和预后指标。同时，WNT10B在肺鳞癌中发生发展的具体机制还有待进一步研究。