大黄酸和红景天对肝纤维化大鼠α-SMA、Hab18G/CD147表达的影响

位小杰，刘东璞，贾诗慧， 郭 冶，卢凤美

(1.佳木斯大学研究生院，黑龙江 佳木斯 154007；2.佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007)

肝脏纤维化的发生机制复杂多样，肝细胞损伤原因不单一，当肝细胞发生炎症坏死刺激后使原本具有储脂功能的细胞肝星状细胞活化转化为肌成纤维细胞，并释放出大量细胞外基质,和其生成和吸收之间的平衡打破,最后形成肝纤维化。因此，肝星状细胞的活化是肝纤维化的关键。实验证明大黄酸具有抗炎，抗纤维化作用。红景天有抗氧化应激和抑制自由基的形成的功效。本实验中应用大鼠CCl4肝纤维化模型来探讨大黄酸和红景天对肝纤维的治疗作用。和前期相关研究证明，红景天具有抑制肝纤维化进展的药理功效[1]。本实验的目的是探讨联合使用是否比单次使用效果好。

1 材料与方法

1.1 材料

实验动物：健康成年SD雄性大鼠40只，180～220g重。进行观察喂养5d，挑出健康和营养状况在同一水平的大鼠进行实验。

1.2 方法

1.2.1 动物分组与肝纤维化模型的制备

将40只大鼠随机平均分为4组。分别为：空白对照组(A)：利用同等体积的生理盐水进行灌胃和腹腔注射；模型组(B)：进行CCl4腹腔注射和生理盐水灌胃；大黄酸组(C)：进行CCl4腹腔注射和大黄酸灌胃；大黄酸联合红景天组(D)：进行的CCl4腹腔注射和大黄酸联合红景天灌胃。

1.2.2 模型制备

大鼠肝纤维化模型是利用CCl4腹腔注射制造，浓度为40%，用花生油溶解稀释[2]。模型组(B)、大黄酸组(C)、大黄酸联合红景天组(D)。3组大鼠依次进行腹腔注射给药四氯化碳，2次/周，实验共6周。

1.2.3 药物治疗

在CCl4腹腔给药后一周后，大黄酸组(C)和大黄酸联合红景天组(D)在造模的同时，给予治疗。大黄酸组(C)：按100mg/kg剂量进行灌胃处理。方法：大黄酸用生理盐水搅拌溶解。大黄酸联合红景天组(D)：将大黄酸红景天用生理盐水溶解后按剂量大黄酸100mg/kg，红景天400mg/kg剂量进行灌胃处理，3次每周，共5周。

1.2.4对α-SMA、Hab18G/CD147因子进行检测

采用免疫组化方法对α-SMA、Hab18G/CD147因子进行检测分析。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 大鼠组织病理学观察

切片进行HE染色后，观察空白对照组大鼠切片，肝小叶排列整齐，肝细胞形态正常。与空白对照组(A)相比较，模型组(B)大鼠肝脏肝小叶结构紊乱，肝条索间隙增宽，伴肝细胞脂肪变，肝小叶间大量纤维结缔组织增生，向小叶间插入，尚未形成完整间隔。大黄酸组肝小叶间有纤维结缔增生，肝细胞大小均一，有少量的脂肪变。大黄酸联合红景天组有少量纤维结缔组织增生。与模型组比较，大黄酸组、大黄酸联合红景天组纤维组织明显减少，但大黄酸联合红景天组肝组织纤维化程度最轻。上述结果由两名资深病理科医师诊断判定。 见图1。

图1 A空白对照组 B模型组 C大黄酸组 D大黄酸红景天组肝脏病理学改变(×400)

2.2 实验大鼠肝组织细胞因子α-SMA、Hab18G/CD147免疫组化表达

见图2～3。见表1。

表1 4组大鼠肝组织中α-SMA、Hab18G/CD147平均光密度值表达情况

图2 A正常组B模型组C大黄酸组 D大黄酸红景天组肝脏中α-SMA免疫组化表达(×200)

图3 A正常组 B模型组 C大黄酸组 D大黄酸红景天组肝脏中Hab18G/CD147免疫组化表达(×400)*与A组比较，P<0.05；#与B组比较，P<0.05;а与C比较，P<0.05。

3 讨论

肝纤维化是可逆的过程[3]。临床上目前以西药和手术治疗为主，副作用较大且预后不理想，所以，研究中药对肝纤维化的治疗作用对肝病的恶化结果的控制有重要意义。α-SMA被认为是肝星状细胞激活的标志性蛋白并与肝纤维化有高度的相关性[4]。Hab18G / CD147是一种癌标基因，通过增加MMPs来分解的主要含有 IV、VI胶原蛋白细胞外基质完成癌细胞的转移，在肝纤维化的过程中其作用是进一步增强了TGF-β蛋白质的表达，促进肝星状细胞的活化，使含有 I、III蛋白的细胞外基质增多[5～8]，其产生的胶原主要来源于肝星状细胞的分泌。本研究通过观察空白组、模型组和大黄酸组和大黄酸和红景天联合用药组大鼠的肝组织病理切片变化和α-SMA、Hab18G/CD147免疫组化表达情况来证明大黄酸和红景天联合用药组对肝纤维化的治疗有协同作用。实验结果显示，大黄酸和红景天联合用药能较好地恢复受损肝脏的肝细胞，在治疗这个方面体现出良好的效果。大黄酸和红景天可能是通过减少α-SMA、Hab18G/CD147的表达来实现减少肝星状细胞的活化数量，通过减少细胞外基质的生成来抑制肝纤维化的进展，达到治疗肝纤维的作用。本实验通过病理检测，细胞因子蛋白表达结果来探究大黄酸和红景天对肝纤维化的治疗作用，在未来的研究中可以通过探究两种细胞因子作用的通路和靶点基因来为肝纤维化的治疗提供依据。